Molecular Docking-Based Design and Development of a Highly Selective Probe Substrate for UDP-glucuronosyltransferase 1A10

Intestinal and hepatic glucuronidation by the UDP-glucuronosyltransferases (UGTs) greatly affect the bioavailability of phenolic compounds. UGT1A10 catalyzes glucuronidation reactions in the intestine, but not in the liver. Here, our aim was to develop selective, fluorescent substrates to easily elucidate UGT1A10 function. To this end, homology models were constructed and used to design new substrates, and subsequently, six novel C3-substituted (4-fluorophenyl, 4-hydroxyphenyl, 4-methoxyphenyl, 4-(dimethylamino)phenyl, 4-methylphenyl, or triazole) 7-hydroxycoumarin derivatives were synthesized from inexpensive starting materials. All tested compounds could be glucuronidated to nonfluorescent glucuronides by UGT1A10, four of them highly selectively by this enzyme. A new UGT1A10 mutant, 1A10-H210M, was prepared on the basis of the newly constructed model. Glucuronidation kinetics of the new compounds, in both wild-type and mutant UGT1A10 enzymes, revealed variable effects of the mutation. All six new C3-substituted 7-hydroxycoumarins were glucuronidated faster by human intestine than by liver microsomes, supporting the results obtained with recombinant UGTs. The most selective 4(dimethylamino)phenyl and triazole C3-substituted 7-hydroxycoumarins could be very useful substrates in studying the function and expression of the human UGT1A10.Peer reviewe

Luokanopettajien työn imu, työkokemus sekä ammatillinen itsetunto

Tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää työkokemuksen yhteyttä luokanopettajien työn imuun. Työn imu on työhyvinvointiin liittyvä käsite, ja luokanopettajien työn imu vaikuttaa heidän opetustyönsä tuloksiin sekä oppilaiden hyvinvointiin. Tarkastelun kohteena ovat luokanopettajien työkokemuksen yhteys heidän kokemansa työn imun ulottuvuuksiin ja tuon yhteyden tilastollinen suhde, kun malliin lisätään selittäjäksi luokanopettajien ammatillinen itsetunto. Lisäksi tutkimuksessa selvitettiin laadullisin keinoin millaiset asiat vahvistavat luokanopettajien ammatillista itsetuntoa. Aineisto koostuu 262 luokanopettajan vastauksista marraskuussa 2015 kerättyyn sähköiseen kyselylomakkeeseen. Luokanopettajien työn imua tutkittiin työn imu -arviointimenetelmällä (Utrecht Work Engagement Scale, UWES). Työkokemuksen yhteyttä selvitettiin monimuuttujaisen varianssianalyysin avulla. Ammatillista itsetuntoa tarkasteltiin määrällisesti kootun summamuuttujan avulla ja sen yhteyttä työn imun ulottuvuuksiin mitattiin monimuuttujaisen kovarianssianalyysin avulla lisäämällä se kovariaatiksi. Avoimen kysymyksen vastaukset teemoiteltiin vastausluokkiin. Runsas työkokemus oli kohottavasti yhteydessä kaikkiin työn imun ulottuvuuksiin. Työkokemuksen yhteys ei kuitenkaan ollut tilastollisesti merkitsevää, kun malliin lisättiin selittäjäksi luokanopettajien ammatillinen itsetunto. Täten luokanopettajien työhyvinvointia edistettäessä on syytä kiinnittää huomiota opettajien käytössä oleviin voimavaroihin, erityisesti henkilökohtaisiin voimavaroihin kuten ammatilliseen itsetuntoon. Voimavarat ovat työn imuun myönteisessä yhteydessä olevia tekijöitä. Luokanopettajien ammatillista itsetuntoa vahvistivat onnistumiset opetussuunnitelman mukaisissa tavoitteissa (esimerkiksi oppilaiden itsetunnon ja sosiaalisten taitojen kehittäminen) sekä opettajien omiin arvoihin pohjautuvissa tavoitteissa (esimerkiksi hyvän yhteishengen luominen)

Sosiaali- ja terveydenhuollon henkilöstön vuorovaikutuksellinen tiedonkulku : koulutus ammattihenkilöstölle

Vuorovaikutus on hyvin laaja-alainen käsite ja se vaikuttaa tiedonkulkuun. Rinnakkaiskäsitteinä käytetään usein viestintää tai dialogisuutta. Tämä toiminnallinen opinnäytetyö on tarvelähtöinen tutkimus vuorovaikutuksen ja tiedonkulun tekijöistä. Opinnäytetyön tuotoksena toteutettiin koulutustapahtuma. Opinnäytetyö vastasi kysymyksiin, mitä on vuorovaikutuksellinen tiedonkulku ja millainen on hyvä koulutus. Työn tavoitteena on vuorovaikutuksen ja tiedonkulun parantaminen ammattihenkilöstön välillä. Tarkoituksena on myös tehostaa vuorovaikutusta ja tiedonkulkua potilasturvallisuuden parantamiseksi. Ammattihenkilöstölle kohdennetulla teemahaastattelulla selvitettiin suuntaviivoja tuotokseen ja luotiin oppimisen tehostamiseksi monitahoinen koulutus kohderyhmän tarpeisiin. Tiedonkulun ja tiedon siirtymisen onnistumisen edellytys on vastavuoroinen vuorovaikutussuhde, joka on asiakas- ja potilasturvallisuuden perusta. Potilasturvallisuuden vaaratapahtumien raportointimenettely ja tietotekninen työkalu (HaiPro) on löytänyt epäkohtia tiedonkulussa. Valtakunnallisen sosiaali- ja terveysalan eettisen lautakunnan (ETENE) mukaan ammattilaisten vuorovaikutusosaamiseen kuuluvat muun muassa toinen toisensa tietäminen ja osaamisen arvostaminen, joilla luodaan luottamus ja sitoutuminen toimintaan sekä sovittuihin tavoitteisiin. Sosiaali- ja terveydenhuoltoalan moniammatillisuus on tavoitteellista ja vaikuttavaa asiakastyötä, johon kuuluvat vuorovaikutustaidot, substanssi- ja prosessiosaaminen. Siksi olisi suositeltavaa koulutustapahtuman ulottuvan kaikille organisaation tasoille. Vuorovaikutus on monenlaisia verbaalisia ja nonverbaalisia ilmaisuja, jotka vaikuttavat tiedon siirtymiseen. Vuorovaikutuksen kehitykseen vaikuttavat muun muassa minätilojen kehittyminen, ympäristö, kokemukset ja fyysiset ominaisuudet sekä opitut asiat. Vuorovaikutustaitojen oppiminen on mahdollista kohdennetulla koulutuksella. Koulutustapahtumassa tulee pyrkiä dialogisuuteen, jolla luodaan perusta oppimiselle. EDIT-tekniikalla on keskeinen osuus aikuisoppimisessa, jossa suositellaan psykodraamaa, ratkaisukeskeisyyden keinoja, reflektiivisyyttä ja debriefingiä. Kehittämisehdotuksena esitetäänkin kohdennetun pitkittäiskoulutuksen vaikuttavuuden tutkimista eri yksiköissä sekä digitalisaation vaikutusta verrattuna kasvokkain tapahtuvaan vuorovaikutukseen.The aim of this study was to find out which things in interaction influence the flow of information and produce an educational event for social and healthcare professionals. The study was conducted by using a functional needs-based method in collaboration with two Tampere city organisations. The thesis, it was studied which elements influence the flow of information and interaction and what kind of education is needed to learn interaction skills. The aim was to improve professionals’ interaction and flow of information. The second aim was to intensify interaction and flow of information to improve patient safety. The data was collected from literature. Also, professionals' interviews were made for orientation of training. The results revealed that interaction can be learned when education is allocated. An educational event was designed to be a varied event by using adult learning, psychodrama, EDIT-technique and debriefing. Interaction is a very broad concept, therefore often the words dialogue and communication have also been seen and used. Substance competence is recommended for professionals. The development of interaction is influenced by factors such as mode of mind, environment, experiences and physical properties. In the future, it would be desirable to study the targeted longitudinal studies experienced by the professionals. Further, the influence of the digital world would be beneficial to study

Asunto- tai kiinteistökaupasta vetäytyminen

Tutkielmassa tarkastellaan asunto- ja kiinteistökaupasta vetäytymistä. Tutkielmassa vetäytymisellä tarkoitetaan sitä, että toinen osapuoli kieltäytyy tekemästä lopullista kauppaa hyväksytyn tarjouksen jälkeen. Tutkimuksen tarkoitus on selvittää, sitovatko hyväksytyt tarjoukset osapuolia asunto- ja kiinteistökaupassa ja mitä oikeusvaikutuksia hyväksytyillä tarjouksilla on. Tutkielmassa myös selvitetään käsirahallisen ja vakiokorvauslausekkeellisen ostotarjouksen, varausmaksun sekä esisopimuksen merkitys kaupasta vetäytymisessä. Tutkielmassa käsitellään ensin oikeustoimilain mukaisten tarjousten sääntelyä ja kuinka sopimus lain mukaan syntyy. Koska oikeustoimilain sääntelyä sovelletaan asuntokauppaan, käsitellään seuraavaksi tarjouksia osana asuntokaupan valmistelua. Tämän jälkeen tutustutaan asuntokauppalain sääntelemään varausmaksuun, käsirahaan ja vakiokorvaukseen osana asuntokauppaa. Asuntokauppaa käsittelevän luvun lopussa käsitellään vielä rakennusvaiheessa olevan ja uuden valmiin asunnon kauppaa koskevaa sääntelyä. Kiinteistökauppaa käsitellään tutkimukseni kolmannessa luvussa. Kiinteistökaupassa olennaista on se, että maakaari sääntelee kiinteistökaupan määrämuotoiseksi oikeustoimeksi. Näin ollen oikeustoimilakia ei sovelleta kiinteistökaupassa annettuihin tarjouksiin, vaan lopullinen osapuolia velvoittava sopimus syntyy vasta kun maakaaren mukainen määrämuotoinen esisopimus tai kauppakirja on laadittu. Käsirahaa ja vakiokorvausta käytetään myös kiinteistökaupassa, mutta niiden merkitys on erilainen verrattuna asuntokauppaan. Viimeisenä tarkastelen sääntelyltään kiinteistökaupan ja asuntokaupan välimuotoa eli kauppaa vuokraoikeudesta rakennuksineen. Vuokraoikeus rinnastetaan kiinteistön kauppaan, mutta kaupasta vetäytymisen tutkimuksessa vuokraoikeus on kuitenkin lähempänä asuntokauppaa, sillä sen kauppaa ei ole tehtävä määrämuodossa, joten sopimuksen syntymiseen sovelletaan oikeustoimilakia. Tutkimuksen perusteella voidaan todeta, että asuntokaupasta voidaan vetäytyä, jos siitä on etukäteen hyväksytyssä tarjouksessa sovittu. Kiinteistökaupassa taas voidaan vetäytyä aina siihen hetkeen asti, kun maakaaren muotomääräykset täyttävä esisopimus tai kauppakirja on allekirjoitettu. Käsirahallinen ja vakiokorvauslausekkeellinen tarjous ovat keinoja sopia mahdollisuudesta vetäytyä kaupasta. Käsirahasta ja vakiokorvauksesta menetettävä määrä kuitenkin riippuu siitä, onko kyseessä asuntokauppa, kiinteistökauppa vai vuokraoikeuden kauppa. Tutkimusmenetelmä on lainopillinen eli oikeusdogmaattinen ja lähteinä on käytetty lainsäädäntöä, lainvalmisteluaineistoa, oikeuskirjallisuutta ja oikeuskäytäntöä

Development of LC/MS techniques for plant and drug metabolism studies

Abstract Liquid chromatography (LC) combined with mass spectrometry (MS) is a powerful tool for qualitative and quantitative analytics of organic molecules from various matrices, and the use of this hyphenated technique is very common in bioanalytical laboratories. In this study, LC/MS methods and the required sample preparation applications were developed for plant flavonoid and drug metabolism studies. The main focus was in developing methods to be used during cytochrome P450 (CYP) -specific drug interaction studies. Traditional high performance liquid chromatography (HPLC) and new, more efficient and faster ultra-performance liquid chromatography (UPLC) were utilized together with time-of-flight (TOF) and triple quadrupole (QqQ) mass spectrometry. In the flavonoid study, collision-induced radical cleavage of flavonoid glycosides was tested and observed to be a suitable tool for the structure elucidation of the 15 flavonol glycosides extracted from the medicinal plant Rhodiola rosea. Ten of these glycosides were previously unreported in the plant. Several unreported in vivo bupropion metabolites were identified from human urine when developing the method for the new and more extensive in vitro and in vivo N-in-one interaction cocktail assays. The qualified analysis methods developed here enable faster analysis for the N-in-one cocktail assays, in turn enabling a more efficient screening of drugs that affect CYP-enzyme activities. In the case of the human in vitro cocktail assay, fourteen compounds were analyzed using a single LC/MS/MS run. The method has proven to be very reliable and has been used in several interaction studies utilizing different sample matrices. The in vivo cocktail assay that was developed enables totally non-invasive sample collection from the patients, the urine sample being sufficient for the UPLC/MS/MS analysis of all target compounds. The last part of the study consisted of developing a specific and very sensitive UPLC/MS/MS method for the analysis of one of the in vivo cocktail analytes, the antidiabetic drug repaglinide, from human placenta perfusates.Tiivistelmä Nestekromatografia (LC) yhdistettynä massaspektrometriaan (MS) on tehokas työväline kvalitatiivisessa ja kvantitatiivisessa analytiikassa, ja tätä tekniikkaa käytetään erityisesti bioalan laboratorioissa. Tässä väitöskirjatyössä kehitettiin ja sovellettiin LC/MS- ja näytteenkäsittelymenetelmiä kasvien flavonoidimetabolian ja lääkeaineiden metaboliatuotteiden tutkimukseen keskittyen erityisesti sytokromi P450 (CYP) -entsyymispesifisten lääkeaineiden interaktiotutkimuksiin tarvittaviin menetelmiin. Työssä hyödynnettiin perinteistä korkean erotuskyvyn nestekromatografiaa (HPLC) ja uutta, suorituskyvyltään vielä tehokkaampaa ja nopeampaa nestekromatografiaa (UPLC) yhdessä lentoaika- (TOF) ja kolmoiskvadrupolimassaspektrometrian (QqQ) kanssa. Tutkimustyön flavonoidimetaboliaan keskittyneessä osuudessa havaittiin törmäyksen aiheuttaman (CID) radikaalipilkkoutumisen soveltuvan lääkinnällisenä kasvina käytetystä ruusujuuresta (Rhodiola rosea) uutettujen viidentoista flavonoliglykosidin rakennemääritykseen. Kymmentä näistä löydetyistä glykosideista ei oltu aiemmin raportoitu ruusujuuresta. Tutkimustyön keskeisimpänä tavoitteena kehitettiin kvalifioidut LC/MS -analyysimenetelmät käytettäväksi aikaisempaa kattavampien in vitro ja in vivo -olosuhteiden N-in-one -tyyppisten CYP-entsyymi-interaktiotutkimusten analyyttisenä työkaluna. Näitä analyysimenetelmiä kehitettäessä löydettiin ja tunnistettiin ihmisen virtsasta aiemmin raportoimattomia metaboliitteja CYP2B6 -entsyymin malliaineena käytetyn bupropionin annostelun jälkeen. Kyseisten kehitettyjen analyysimenetelmien avulla CYP-entsyymien toimintaan vaikuttavien lääkeaineiden tutkiminen on aiempaa nopeampaa ja antaa yhdellä kertaa samasta tutkimuksesta entistä laaja-alaisempaa tietoa. In vitro -tutkimusta varten kehitetty LC/MS/MS -analyysimenetelmä on osoittautunut erittäin käyttökelpoiseksi lukuisissa interaktiotutkimuksissa, ja in vivo -tutkimusta varten kehitetty UPLC/MS/MS -analyysimenetelmä mahdollistaa täysin ei-invasiivisen näytteenoton potilaista. Tutkimustyön viimeisessä vaiheessa kehitettiin erittäin herkkä ja spesifinen UPLC/MS/MS -analyysimenetelmä CYP2C8-entsyymin toiminnan malliaineena käytetyn repaglinidin analysoimiseksi koejärjestelystä, jossa tutkitaan yhdisteiden kulkeutumista raskausaikana äidin ja sikiön verenkierron välillä istukan kautta