Testing the role of extracellular vesicles in early left right patterning

Abstract Bilaterian animals, such as humans, are characterized by an external roughly mirror symmetry along the left – right axis that covers a pronounced internal asymmetric arrangement of the thoracic and abdominal organs. While external symmetry has been associated with health and beauty standards, the internal asymmetry may rely more on efficiency and functionality of the different physiological systems. The left – right asymmetry of visceral organs is established early on during embryonic development within a transient and specialized structure, commonly referred to as the left – right organizer (LRO). The LROs appear in many shapes and sizes, depending on the species, but a common feature in some vertebrates is the requirement of motile cilia. The movement of these tiny hair-like protrusions generate a directional fluid flow, that scales with the cube of cilia length, in order to become capable of triggering a differentiated response on the left side of the LRO. Such flow-dependent response involves Pkd2 channel activation and calcium signaling that subsequently drive the left sided expression of the Nodal signaling cascade. Nodal is a secreted protein that translates the asymmetries established at the LRO to the rest of the embryo, through the lateral plate mesoderm. As embryonic development evolves, at specific time points and locations along the anterior – posterior axis, Nodal induces the expression of genes involved in the formation of the heart, brain, gut and its derivatives, modulating the lateralization of these organs. With this work, we dedicated our efforts to understanding a few molecular and cellular steps missing in the establishment of the left – right axis within the LRO. In the Chapter 2, we explored how the fluid flow is sensed by the LRO cells. Between the two hypotheses in the field, one based on mechanosensing and other on chemosensing properties of the flow, we found that the number of extracellular vesicles is too low and variable to transport sufficient and efficiently a sidedness molecular signal towards the left sided LRO cells. Moreover, pharmacological impairment of distinct endocytic pathways did not impact on heart laterality arrangement. We also found out an upstream regulator of Notch signaling, syntenin-a, involved in the cell fate decision between motile and immotile cilia. We showed that syntenin-a loss-of-function severely affected the left – right axis development. By downregulating the levels of syntenin a, Notch signaling is activated increasing the expression of her12 and resulting in a higher number of immotile cilia, in concordance with our previous published data. We next described a potential molecular switch, downstream of Notch signaling, composed by the Rabconnectin complex. As this complex is known to promote V-ATPase assembly and consequently its activity, we inhibited the V-ATPase activity and we observed an increase in the number of motile cilia. Thus, suggesting that the link between Notch signaling and motile – immotile cilia ratio is through the modulation of pH. Lastly, in Chapter 3, we focused on the impact of ciliary dysfunction in the epithelial respiratory cells. We characterized the distribution pattern of several ciliary proteins in two siblings harboring a primary ciliary dyskinesia causing mutation on Zmynd10 gene. Recent studies showed that ZMYND10 is one of the cytoplasmatic factors responsible for stabilizing and driving axonemal dynein arm assembly. We showed here that outer and inner axonemal dyneins, that become mostly absent from the ciliary axoneme in Zmynd10 mutant respiratory ciliated cells, can sometimes enter the proximal part of the cilium. These results suggest that to a low extent the dynein arms can still assemble and be transported into the cilium in the absence of ZMYND10, thus opening an opportunity for small-molecule therapies that promote protein stability in primary ciliary dyskinesia disease management.Resumo Os animais bilaterais, como os humanos, são caracterizados por uma simetria externa ao longo do eixo esquerda – direita que cobre um arranjo interno pronunciadamente assimétrico dos órgãos torácicos e abdominais. Enquanto a simetria externa tem sido associada a padrões de saúde e beleza, a assimetria interna pode depender maioritariamente da eficiência e funcionalidade da montagem dos diferentes sistemas fisiológicos. Esta assimetria esquerda – direita dos órgãos viscerais é estabelecida durante o desenvolvimento embrionário dentro de uma estrutura transiente e especializada, normalmente conhecida por organizador esquerda – direita. Os organizadores esquerda – direita aparecem em várias formas e tamanhos, dependendo da espécie, mas uma característica comum em alguns dos vertebrados é a existência de cílios. Os cílios são organelos compostos por microtúbulos que são projetados da superfície da célula. E estes podem ser móveis ou imóveis dependendo da presença ou ausência de proteínas motoras, as dineínas do axonema, que geram energia suficiente para mover o cílio. No caso do organizador esquerda – direita, os dois tipos de cílios estão presentes e desempenham funções distintas: os cílios móveis promovem um fluxo direcional do fluido existente no lúmen dos organizadores, cuja velocidade é proporcional ao cubo do comprimento ciliar, e os cílios imóveis são potencialmente responsáveis por detetar esse mesmo fluxo. Por conseguinte, a deteção do fluxo desencadeia uma resposta assimétrica nas células do lado esquerdo do organizador esquerda – direita, que é dependente do canal de cálcio Pkd2 localizado nos cílios. Assim, os iões de cálcio entram pelo cílio e ativam a libertação de mais iões dos organelos internos, o que resulta numa onda de cálcio propagada pela célula que, por sua vez, é necessária para iniciar uma cascada molecular de sinalização composta por Nodal e os seus inibidores. Nodal é um factor secretado da família TGF-β inicialmente expresso em redor do organizador esquerda-direita de forma simétrica. Um dos seus antagonistas expresso no organizador, Dand5, impede a propagação precoce e simétrica de Nodal para a placa lateral da mesoderme. Contudo, a onda de cálcio que se forma nas células do organizador promove a degradação de dand5, tornando-se assim o primeiro gene assimetricamente expresso e libertando Nodal da sua repressão especificamente no lado esquerdo do organizador. Consequentemente, Nodal é capaz de ativar a sua própria expressão na placa lateral da mesoderme do lado esquerdo e a expressão de um segundo inibidor, lefty1, na linha mediana, de forma a impedir que Nodal ative a sua expressão no lado direito. À medida que o desenvolvimento embrionário evolui, Nodal propaga-se pela mesoderme ao longo do eixo anterior - posterior, que em estadios e regiões específicas, leva à expressão de genes envolvidos na formação do coração, cérebro, fígado, pâncreas, entre outros, modulando a lateralização destes órgãos. Este campo da biologia do desenvolvimento tem evoluído bastante ao longo dos últimos anos, contudo algumas questões continuam em aberto. A forma como o fluxo é detetado pelas células do organizador esquerda – direita é uma delas. Historicamente, o campo está dividido em torno de duas hipóteses principais – o modelo quimiossensor e o modelo mecanossensor. Por um lado, o modelo quimiossensor propõe que o fluxo serve para transportar vesículas e moléculas sinalizadoras para o lado esquerdo, onde serão internalizadas pelas células do organizador. Por outro lado, o modelo mecanossensor baseia-se na força hidrodinâmica que o fluxo exerce sobre os cílios imóveis. Com este projeto de doutoramento pretendemos fornecer novos dados do mecanismo biofísico impulsionado pelo fluxo usando o organizador esquerda – direita do peixe-zebra como modelo animal. Inicialmente, dedicámo-nos a inspecionar as características moleculares das células do organizador e o conteúdo de fluído para inferir sobre as possíveis contribuições do modelo quimiosensor na deteção do fluxo de fluidos pelo canal Pkd2. Para tal, gerámos uma linha transgénica para quantificar e permitir o rastreamento de vesículas extracelulares dentro do lúmen do organizador e usámos uma nova configuração de micromanipulação para modificar o conteúdo do fluido do organizador. Os nossos resultados mostram que o número de vesículas extracelulares detetadas é muito baixo e variável para transportar um sinal molecular de lateralidade de forma eficiente para as células do organizador do lado esquerdo. Adicionalmente, a inibição farmacológica de vias endocíticas distintas não teve impacto na lateralidade do coração. De seguida, analisámos a regulação do número de cílios móveis e imóveis no organizador esquerda – direita. No peixe zebra, todos os cílios têm a ultra estrutura necessária para se moverem, contudo, apenas alguns cílios se tornam móveis. O nosso grupo tinha anteriormente descoberto que a decisão entre móvel e imóvel é feita pela via de sinalização de Notch. Com este trabalho, nós identificámos novos moduladores a montante e efetores a jusante da sinalização de Notch envolvidos neste processo. Mostrámos que a perda de função da syntenin-a afeta severamente o desenvolvimento do eixo esquerda – direita, uma vez que ativa a sinalização de Notch e a expressão do seu gene alvo, her12, o que resulta num número maior de cílios imóveis e por conseguinte num fluxo do fluído menor. Também descrevemos um potencial botão molecular, a jusante da sinalização de Notch, composto pelo complexo Rabconnectin. Uma vez que este complexo é conhecido por promover a montagem da V-ATPase e consequentemente sua atividade, inibimos a atividade da V ATPase e observámos um aumento do número de cílios móveis. Assim, sugerimos que a ligação entre a sinalização de Notch e a proporção de cílios móveis – imóveis se dá através da modulação do pH. Por fim, no Capítulo 3, focámo-nos no impacto da disfunção ciliar nas células epiteliais respiratórias. Caracterizámos o padrão de distribuição de várias proteínas ciliares em dois irmãos portadores de discinésia ciliar primária causada por uma mutação no gene Zmynd10. Estudos recentes mostram que ZMYND10 é um dos fatores citoplasmáticos responsáveis por estabilizar e conduzir a montagem do braço de dineína que constituí o axonema do cílio móvel. Mostrámos aqui que as dineínas externas e internas do axonema, que se tornam principalmente ausentes do cílio em células respiratórias mutadas no gene Zmynd10, podem, no entanto, entrar na parte proximal do cílio. Estes resultados sugerem que uma pequena porção dos braços de dineína conseguem ser montados e transportados para o cílio na ausência de ZMYND10, abrindo assim uma oportunidade para terapias com pequenas moléculas que promovam a estabilidade de proteínas na gestão do tratamento da doença de discinésia ciliar primária

A Folha de Ituiutaba: uma análise sob os domínios da História Cultural, Minas Gerais (1961-1964).

Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)O presente trabalho tem como tema principal o estudo do Jornal Folha de Ituiutaba, sob a perspectiva da História Cultural. Através desse estudo, contemplam-se os aspectos culturais do município de Ituiutaba, localizado na região do Triângulo Mineiro, no estado de Minas Gerais. Por meio das fontes analisadas, disponíveis na Hemeroteca Digital da Biblioteca Nacional, é possível compreender como as edições representavam a cidade de Ituiutaba, na década de 1960, através de suas notícias e demais elementos presentes no periódico. Para a compreensão do recorte temporal analisado, que data de 1961 a 1964, faz-se uma abordagem do contexto histórico e uma abordagem histórica dos jornais, a fim de compreender como era a estrutura do Folha de Ituiutaba. Questiona-se quais os aspectos culturais presentes na cidade e quais aspectos a fonte oculta de seus leitores

A gestão de recursos humanos e os sistemas e tecnologias de informação

Mestrado em Gestão de Recursos HumanosO presente relatório de estágio para a realização do Trabalho Final de Mestrado incide sobre a gestão de recursos humanos e os sistemas e tecnologias de informação, que a empresa AXA, multinacional inserida na atividade seguradora dispõe. Os sistemas e as tecnologias de informação da empresa AXA que este trabalho vai abordar são: o People IN, a intranet ONE e o GESVEN GRH. Contudo, o sistema de informação que este trabalho dá mais enfoque será o GESVEN GRH, isto porque o papel deste sistema é de bastante relevância no departamento de recursos humanos na AXA Portugal. Ao longo deste trabalho final de mestrado será revelada a importância que os sistemas e tecnologias de informação têm nas atividades administrativas de recursos humanos, bem como a importância destas ferramentas no dia-a-dia dos profissionais desta área.The following internship report for the conclusion of the Master's Degree Final Paper focuses on human resources management and on the information systems and technologies, which the company AXA, a multinational inserted into the insurance business, has available. The technologies and information systems of the company AXA which this paper will address are: People IN, ONE intranet and GESVEN HRM. However, the information system that this paper focuses the most is the GESVEN HRM, due to the fact that the role of this system is extremely relevant in the human resources department at AXA Portugal. During this final master's degree paper will be uncovered the importance that the information systems and technologies have in the administrative activities of human resources, as well as the importance of these tools in human resources' professionals day-to-day work

A educação artística enquanto metodologia dinamizadora da Língua Portuguesa

A presente dissertação insere-se no âmbito da Unidade Curricular Estágio IV, enquanto prática pedagógica supervisionada do Mestrado em Educação Pré Escolar e Ensino do 1º Ciclo do Ensino Básico e, pretende refletir sobre o papel da Educação Artística enquanto metodologia inclusiva de outras áreas do currículo do 1º Ciclo do Ensino Básico, nomeadamente a Língua Portuguesa. A Educação Artística é uma política educativa de valorização da cultura e das artes, e intervém no desenvolvimento das aprendizagens dos alunos, com o pretexto de enriquecer as experiências dos mesmos, propondo metodologias inovadoras de aprendizagem, pois contribui para o desenvolvimento do sentido crítico, criativo, estético e cognitivo. É um instrumento que contribui para o desenvolvimento da capacidade de pensar e compreender e ainda facilita a expressão dos sentimentos, ou seja, a capacidade emocional, possibilitando o desenvolvimento da criatividade e da imaginação, da perceção do eu e dos outros. As crianças têm uma enorme capacidade de interpretação, isto é, fazer a leitura de uma obra plástica. A Educação pela Arte é uma metodologia que utiliza a arte como base: as obras dos artistas como fonte de análise, a expressão e criação artística como forma de desenvolver competências únicas nas crianças. Serve, por isso, a Educação Artística para munir qualquer criança com competências como a capacidade de observar, justificar, comunicar, ser crítico, imaginar, criar e permanecer criativo. Desta forma, o principal objetivo deste estudo é demonstrar a importância da Educação Artística no desenvolvimento das aprendizagens dos alunos. Os instrumentos utilizados neste estudo foram a observação, os registos diários, os vídeos e os questionários feitos aos alunos da turma onde estava inserida. No que diz respeito aos resultados, e tendo em conta o programa curricular do 1º Ciclo do Ensino Básico, a Educação Artística é uma metodologia fundamental para a articulação com as outras áreas, pois facilita o processo de transição de umas áreas para as outras e promove ainda competências que não se conseguem adquirir nas outras áreas. Tendo em conta o tempo de estudo, optou-se por selecionar a Língua Portuguesa como área aliada à Expressão Artística, envolvendo a estruturação de textos e a escrita dos mesmos, pois é um dos domínios da área que os alunos menos sentem interesse e que muitas vezes suscita dúvidas e errosThis dissertation is part of the Internship IV curriculum unit, as supervised teaching practice of the Master's Degree in Preschool Education and Teaching in the 1st Cycle of Basic Education and intends to reflect on the role of Art Education as an inclusive methodology of other areas of the curriculum of the 1st cycle of basic education, including Portuguese Language. Artistic Education is an educational policy of valuing culture and the arts, and intervenes in the development of students' learning, under the pretext of enriching their experiences, proposing innovative learning methodologies, as it contributes to the development of critical, creative, aesthetic and cognitive sense. It is a tool that contributes to the development of the ability to think and understand and also facilitates the expression of feelings, i.e. emotional capacity, enabling the development of creativity and imagination, perception of self and others. Children have an enormous capacity to interpret, that is, to read a work of art. Art Education is a methodology that uses art as its basis: the works of artists as a source of analysis, artistic expression and creation as a way of developing unique skills in children. Art Education therefore serves to equip any child with skills such as the ability to observe, justify, communicate, be critical, imagine, create and remain creative. Thus, the main objective of this study is to demonstrate the importance of Art Education in the development of students' learning. The instruments used in this study were observation, daily records, videos and questionnaires made to the students of the class where I was inserted. As regards the results, and taking into account the curricular programme of the 1st cycle of basic education, Artistic Education is a fundamental methodology for the articulation with other areas, as it facilitates the process of transition from one area to another and promotes skills that cannot be acquired in other areas. Taking into account the study time, it was decided to select Portuguese Language as an allied area to Artistic Expression, involving the structuring of texts and their writing, as it is one of the areas of the area in which students feel less interest and that often raises doubts and mistakes

Bruxismo: da etiologia ao diagnóstico

Tese de mestrado, Medicina Dentária, Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Dentária, 2014O bruxismo é um fenómeno clinico significante, sendo também considerado a mais prejudicial, entre todas as parafunções do sistema estomatognático, causando lesões dentárias. A Academy of Prosthodontics, em 2005, definiu bruxismo como o acto não funcional, um hábito oral involuntário, que consiste no rítmico ou espasmódico ranger, cerrar e apertar dos dentes, em movimentos da mandibula não funcionais, o que pode levar ao desenvolvimento de trauma oclusal. A American Academy of Sleep Medicine (antiga American Sleep Disorders Association) (AASM) classificou o SB como uma parasomnia do sono: “um distúrbio do sono que não é uma anormalidade dos processos responsáveis pelo sono e estado de vigília em si, mas sim um indesejável fenómeno que ocorre durante o sono”. Em 2013, Lobbezoo e colaboradores, definiram o bruxismo da seguinte forma: O bruxismo é uma atividade muscular da mandíbula de forma repetitiva caracterizada por apertar ou ranger dos dentes e / ou por “bracing” ou empurrar da mandíbula. Bruxismo tem duas manifestações circadianas distintas: pode ocorrer durante o sono (indicado como bruxismo do sono) ou durante a vigília (indicado como bruxismo acordado). Atualmente, a explicação mais plausível sobre a etiopatogenia do bruxismo assenta num modelo multifatorial, no qual fatores psicossociais e fatores fisiopatológicos interagem com estímulos morfológicos periféricos. A avaliação e diagnóstico da SB é muitas vezes um verdadeiro desafio. Em geral, a avaliação é baseada em relatos de sons de trituração dos dentes durante o sono e a presença de sinais e sintomas clínicos. No entanto, apenas uma gravação de EMG dos músculos mastigatórios pode confirmar o diagnóstico SB. Várias ferramentas de diagnóstico portáteis foram desenvolvidas para gravar a atividade EMG do temporal e do masséter durante o sono, para evitar o uso da mais sofisticada mas altamente dispendiosa e demorada polissonografia.Bruxism is a significant clinical phenomenon, considered the most damaging amongst all the parafunctions of the stomatognathic system. It is the source of multiple dental injuries. In 2005, the Academy of Prosthodontics defined bruxism as a non-functional act; an involuntary oral habit, consisting in the rhythmic or spasmodic grinding, grating or clenching of the teeth, in non-functional movements of the mandible, which could lead to the development of an occlusal trauma. The American Academy of Sleep Medicine (ex-American Sleep Disorders Association) (AASM) classified the SB as a parasomnia of the sleep: “a disturbance of the sleep that does not constitute an abnormality of the processes responsible for sleeping and for the state of vigilance in itself, being instead an undesirable phenomenon that takes place during sleep”. In 2013, Lobbezzo and their collaborators, defined bruxism as: a repetitive muscular activity of the mandible, characterized by the clenching or grinding of the teeth and / or by “bracing” or pushing the mandible. Bruxism has two distinctive circadian manifestations: it can occur during sleep (bruxism of the sleep) or during vigilance (awakened bruxism). Currently, the most plausible explanation for the etiopathogeny of bruxism is based on a multifactorial model, in which both psychosocial and physiopathological factors interact with peripheral morphological stimuli. The evaluation and diagnosis of SB is often a true challenge. In general, the evaluation is based on the reports of sounds of the teeth grinding during sleep, and on the presence of clinical signs and symptoms. However, only an EMG recording of the chewing muscles can confirm the diagnosis. Various portable tools of diagnostic were developed to record the EMG activity of the temporal and of the masseter during sleep, in order to avoid the use of more sophisticated but highly expensive and slow polissonography

Invaginação intestinal secundária a linfoma de Burkitt em cão jovem.

Introdução Foi presente à consulta uma cadela de 11 meses de idade de raça indeterminada referenciada por outro Centro de Atendimento Médico Veterinário por motivo de abdómen agudo. Na história pregressa verificou-se que existia a suspeita de ingestão de corpo estranho (CE) no dia anterior à consulta, vómito incoercível com 24 horas de duração, dor abdominal e anorexia parcial. Ao exame clínico, registaram-se diversas alterações entre as quais a presença de mucosa oral congestionada, desidratação de 5% e ligeira hipotermia (37,8°C) estando os restantes parâmetros dentro dos limites normais. Na palpação manual da cavidade abdominal detectou-se a presença de uma massa tubular no abdómen médio. Tendo em conta os achados do exame clínico, o paciente foi admitido para exames complementares de diagnóstico por suspeita de obstrução intestinal. Objectivos Os objectivos desta comunicação são a descrição de uma neoplasia intestinal rara num cão jovem como causa de invaginação intestinal. Metodologia Após a obtenção da história pregressa e exame físico realizaram-se diversos exames complementares de diagnóstico que incluiu perfil bioquímico sérico, hemograma, radiologia abdominal simples com projecções latero-lateral e ventro-dorsal. Adicionalmente foi também realizada ecografia abdominal. Resultados O hemograma evidenciou uma leucocitose com neutrofilia e trombocitopenia. No perfil bioquímico sérico realizado os parâmetros estavam dentro dos intervalos de referência para a espécie. Os achados radiológicos evidenciaram a presença de um CE não linear radiopaco na região do abdómen médio e uma massa com radiopacidade de tecido mole com efeito de massa igualmente no abdómen médio. A ecografia abdominal confirmou a presença de obstrução intestinal pela presença de um CE associada a uma invaginação intestinal. Após estabilização pré-cirúrgica, o paciente foi sujeito a laparatomia exploratória, procedimento no qual se confirmou a presença de um CE não linear (um aglomerado de fios de nylon de um esfregão) no jejuno e caudalmente a este uma invaginação jejuno-jejunal. Procedeu-se a desinvaginação e observou-se num segmento da porção jejunal invaginada um espessamento da parede intestinal com estenose do lúmen e com congestão e hemorragia da serosa. Em consequência deste achado realizou-se uma enterectomia do segmento estenosado com uma margem de segurança de 4 cm, seguida de anastomose intestinal topo a topo com padrão de sutura simples interrompida. O CE foi removido pela incisão da enterectomia devido á sua proximidade. Explorou-se a cavidade abdominal e todo o tubo digestivo não se registando alterações macroscópicas adicionais. O segmento intestinal removido foi enviado para análise histopatológica. O diagnóstico histopatológico determinou uma infiltração de células neoplásicas linfóides em toda a espessura da parede intestinal concluindo-se pela presença de um linfoma de Burkitt. A recuperação pós-operatória decorreu sem complicações maiores tendo sido concedido alta ao paciente 4 dias após a cirurgia. Conclusões Os CE, as enterites víricas e parasitárias são causas frequentes de invaginação intestinal em pacientes jovens, no entanto as neoplasias intestinais são a principal causa de invaginação em animais geriátricos1,3. A ocorrência de neoplasia intestinal e especificamente o linfoma de Burkitt nunca foi descrita anteriormente como causa de invaginação intestinal em cão jovem. Referências bibliográficas 1. Schwandt, C.S., (2008). Low-grade or benign intestinal tumours contribute to intussusception: a reporton one feline and two canine cases. Journal of Small Animal Practice, 49, 651 – 654. 2. Radovanović, Z., Slavković, A., Marjanović, Z., Živanović, D., Djordjević, I. (2017). Burkitt lymphoma as a cause of intussusceptions – The significance of positron emission tomography scan in the follow-up. Vojnosanit Pregl. 74(3): 294– 297. 3. Levien, A.S., Baines S.J., (2011). Histological examination of the intestine from dogs and cats with intussusception. Journal of Small Animal Practice, 52 (11):599-606

Pkd2 Affects Cilia Length and Impacts LR Flow Dynamics and Dand5

Funding: This work was supported by the Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT-ANR/BEX-BID/0153/2012 research grant). SL is funded by an FCT CEEC contract for Principal Investigator. The work was also supported by Sociedade Portuguesa de Nefrologia (research grant 2015), iNOVA4Health – UID/Multi/04462/2013 (a program financially supported by Fundação para a Ciência e Tecnologia/ Ministério da Educação e Ciência, through national funds and co-funded by FEDER under the PT2020 Partnership Agreement) and Fundação para a Ciência e Tecnologia (research grant – PTDC/BEXBID/1411/2014). MR-R was supported by national funds through Fundação para a Ciência e Tecnologia, in the context of the celebration of the program contract foreseen in the numbers 4, 5, and 6 of article 23 of D.L. no. 57/2016 of 29 August, as amended by Law no. 57/2017 of 19 July. Zebrafish used as animal model were reared and maintained in the CEDOC Fish Facility, with the support from the research consortia Congento, co-financed by Lisboa Regional Operational Program (Lisboa2020), under the Portugal 2020 Partnership Agreement, through the European Regional Development Fund (ERDF) and Fundação para a Ciência e TecnologiaThe left-right (LR) field recognizes the importance of the mechanism involving the calcium permeable channel Polycystin-2. However, whether the early LR symmetry breaking mechanism is exclusively via Polycystin-2 has not been tested. For that purpose, we need to be able to isolate the effects of decreasing the levels of Pkd2 protein from any eventual effects on flow dynamics. Here we demonstrate that curly-up (cup) homozygous mutants have abnormal flow dynamics. In addition, we performed one cell stage Pkd2 knockdowns and LR organizer specific Pkd2 knockdowns and observed that both techniques resulted in shorter cilia length and abnormal flow dynamics. We conclude that Pkd2 reduction leads to LR defects that cannot be assigned exclusively to its putative role in mediating mechanosensation because indirectly, by modifying cell shape or decreasing cilia length, Pkd2 deficit affects LR flow dynamics.publishersversionpublishe

Implication of menopause and ageing

Funding Information: S. Sousa is grateful to FCT and European Social Fund through Programa Operacional Capital Humano for the Ph.D . grant ( SFRH/BD/137516/2018-COVID/BD/153231/2023 ). The authors thank the General Surgery Department of Hospital de São João (Porto, Portugal) and to all patients that consented to participate. Funding Information: This work was financially supported by Portuguese national funds through projects UIDB/50006/2020 , UIDP/50006/2020 , and LA/P/0008/2020 , from the Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT)/Ministério da Ciência , Tecnologia e Ensino Superior . Funding Information: S. Sousa is grateful to Fundação para a Ciência e a Tecnologia and European Social Fund through Programa Operacional Capital Humano for the Ph.D . grant ( SFRH/BD/137516/2018-COVID/BD/153231/2023 ). Publisher Copyright: © 2023 Elsevier LtdFatty acids (FA) are biomarkers of metabolic dysfunction. Adipose tissue is the largest reservoir of FA and acts differently in obese individuals. Menopause by itself significantly alters metabolism, lipid metabolism dysregulation, and adipose tissue distribution. How adipose tissue FA alters an obese individual's metabolism depending on a female's menopausal status is yet poorly understood. Hence, the subcutaneous (scAT) and visceral adipose tissue (vAT) FA profile for 173 obese premenopausal and postmenopausal women was measured and associated with biochemical parameters. scAT and vAT FA profiles were distinct by themselves and in menopause. In total 816 associations were found with biochemical parameters, where only 58 were independent of the menopausal status. The associations found to emphasize the importance of assessing the adipose tissue FA profile and how their behavior changes with menopause. The FA are crucial in metabolic processes and can be helpful biomarkers in the prevention/treatment and follow-up of female obesity.publishersversionpublishe

Assessment of synthetic musks, polychlorinated biphenyls and brominated flame retardants in adipose tissue of obese northern Portuguese women – Metabolic implications

Funding Information: This work was financially supported by Portuguese national funds through projects UIDB/50006/2020 , UIDP/50006/2020 , and LA/P/0008/2020 , from the Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT)/ Ministério da Ciência, Tecnologia e Ensino Superior (MCTES). Funding Information: S. Sousa is grateful to FCT and ESF (European Social Fund) through POCH (Programa Operacional Capital Humano) for the Ph.D. grant ( SFRH/BD/137516/2018 and COVID/BD/153231/2023 ). The authors thank the General Surgery Department of Hospital de São João (Porto, Portugal) for the human adipose tissue samples and to all patients that consent to participate. Publisher Copyright: © 2023 Elsevier B.V.Obesity is a worldwide multifactorial disease linked to persistent pollutants exposure amongst other factors. Humans are daily exposed to an assort of pollutants, such as polychlorinated biphenyls, brominated flame retardants and synthetic musks. These, also known as endocrine disruptors, were all found in human adipose tissue, the preferable matrix for the assessment of long-time accumulation. There are several accounts of hazardous effects of polychlorinated biphenyls and brominated flame retardants on the human organism, whereas for synthetic musks little is still known. Hence, in this study, the levels of polychlorinated biphenyls, brominated flame retardants, and synthetic musks were measured in samples of adipose tissue from 188 Obese Portuguese Women (subcutaneous or scAT and visceral or vAT). After which, associations between pollutants levels and several biochemical parameters from assorted of metabolic processes were studied. Brominated flame retardants were not found in any sample analysed, synthetic musks were found in all the samples analysed (100 % detection frequency) with median levels of 0.4 ± 0.6 μg/g in scAT and 0.4 ± 0.7 μg/g in vAT and polychlorinated biphenyls were found in the majority of samples (<90 % detection frequency) with median levels of 0.1 ± 0.3 μg/g in both tissues. Median concentrations of synthetic musks and polychlorinated biphenyls were similar between scAT and vAT. In total 315 associations were achieved with pollutants levels in adipose tissue, including 273 Spearman's correlations (146 negative and 127 positive). Additionally, 3 multiple linear regressions were achieved. Synthetic musks behave differently than polychlorinated biphenyls and other well-known persistent pollutants in the human body. Synthetic musks behaviour is yet poorly known and their high levels and detection frequencies enforces the need for more studies about their impact on human health. Understanding how these chemicals alter the metabolism is crucial knowledge and hopefully will contribute to improving the treatment and follow-up of obesity in the female population.publishersversionpublishe