Androgens in breast cancer cells physiology: a connection with calcium homeostasis?

Several evidences suggest that androgenic actions and calcium (Ca2+) homeostasis alterations may contribute to the development of breast cancer. The androgen receptor is detected in the majority of human breast cancer cases, including those that are oestrogen and progesterone receptor negatives. It has also been shown that androgens play an important role regulating breast cells proliferation and death. On the other hand, it is known that intracellular Ca2+ is a ubiquitous second messenger involved in the regulation of several biological processes in the cell such as proliferation and apoptosis. In this way, deregulation of intracellular Ca2+ concentration via altered expression and/or function of Ca2+ transporters, Ca2+ channels and/or Ca2+ binding proteins may have implications breast pathophysiology. Recently, studies have demonstrated that androgens regulate the expression and/or activity of several Ca2+ regulator proteins, namely the Ca2+-binding protein regucalcin and voltage-dependent L-type Ca2+ channel in distinct cell types. The present project aims to investigate the effect of androgen 5α-dihydrotestosterone (DHT) on the expression of regucalcin and L-type Ca2+ channel (α1C subunit) in human breast cancer cells (MCF-7). The presence of regucalcin and L-type Ca2+ channel (α1C subunit) in these cells was confirmed by means of RT-PCR and Western Blot. The effect of androgens on the mRNA expression of regucalcin and L-type Ca2+ channel (α1C subunit) was evaluated by real-time PCR. DHT down-regulated the expression of regucalcin and L-type Ca2+ channel (α1C subunit) in MCF-7 cells. In both cases, this effect was reverted in presence of androgen inhibitor flutamide and oestrogen inhibitor ICI 182,780, suggesting that DHT effects regulating regucalcin and L-type Ca2+ channel (α1C subunit) expression are mediated by the androgen receptor, but also by the oestrogen receptor due to the metabolization of DHT to oestrogenic products. This study first demonstrated the presence of L-type Ca2+ channel (α1C subunit) in human breast cancer cells and showed that androgens modulate expression of Ca2+ regulator proteins in these cells. These findings suggest that androgenic actions regulating cell death and proliferation of breast cancer cells may be associated with the control of Ca2+ homeostasis.Várias evidências sugerem que as ações androgénicas e alterações na homeostasia do cálcio (Ca2+) podem contribuir para o desenvolvimento do cancro de mama. O recetor de androgénios é detetado na maioria dos casos de cancro de mama humano, incluindo os que são considerados negativos para os recetores de estrogénios e de progesterona. Também se tem demonstrado que os androgénios desempenham um papel importante na regulação da proliferação e morte em células da mama. Por outro lado, sabe-se que o Ca2+ intracelular é um segundo mensageiro ubíquo envolvido na regulação de diversos processos biológicos da célula, tais como a proliferação e a apoptose. Desta forma, a desregulação da concentração intracelular de Ca2+ , através de alterações na expressão e/ou função de transportadores de Ca2+, canais de Ca2+ e/ou proteínas de ligação ao Ca2+ , pode ter implicações na fisiopatologia da mama. Recentemente, alguns estudos demonstraram que os androgénios regulam a expressão e/ou atividade de várias proteínas reguladoras de Ca2+, nomeadamente a proteína de ligação ao Ca2+ regucalcina e o canal de Ca2+ dependente de voltagem do tipo L, em tipos celulares distintos. Com o presente projeto pretende-se investigar o efeito do androgénio 5αdihidrotestosterona (DHT) na expressão da regucalcina e do canal de Ca2+ do tipo L (subunidade α1C) em células de cancro da mama humano (MCF-7). A presença da regucalcina e do canal de Ca2+ do tipo L (subunidade α1C) nestas células foi confirmada por RT-PCR e Western Blot. O efeito dos androgénios na expressão do mRNA da regucalcina e do canal de Ca2+ do tipo L (subunidade α1C) foi avaliado por PCR em tempo real. A DHT diminui a expressão da regucalcina e do canal de Ca 2+ do tipo L (subunidade α1C) em células MCF-7. Em ambos os casos, este efeito foi revertido em presença do inibidor de androgénio flutamida e do inibidor de estrogénios ICI 182,780, sugerindo que os efeitos da DHT na regulação da expressão da regucalcina e do canal de Ca2+ do tipo L (subunidade α1C) são mediados pelo recetor de androgénios, mas também pelo recetor de estrogénios devido à metabolização da DHT em produtos estrogénicos. Este estudo demonstrou primeiramente a presença do canal de Ca2+ do tipo L (subunidade α1C) nas células de cancro da mama humano e demonstrou que os androgénios regulam a expressão de proteínas reguladoras de Ca2+ nestas células. Estes resultados sugerem que a ação reguladora dos androgénios na proliferação e morte celular nas células de cancro da mama pode estar associada ao controlo da homeostasia do Ca2+

Flow cytometric methodology for the detection of de novo human T-cell leukemia virus -1 infection in vitro: a tool to study novel infection inhibitors

Methodology to detect and study de novo human T-cell leukemia virus (HTLV)-1 infection is required to further our knowledge of the viruses’ mechanisms of infection and to study potential therapeutic interventions. Whilst methodology currently exists, utilisation of an anti- Tax antibody to detect de novo Tax expression in permissive cells labelled with cell tracker allowing for the detection by flow cytometry of new infection after co-culture with donor cell lines productively infected with HTLV-1 is an alternative strategy. Using this methodology, we have been able to detect de novo infection of the T cell line HUT78 following co-culture with the productively infected HTLV-1 donor cell line MT-2 and to confirm that infection can be effectively blocked with well characterised infection inhibitors. This methodology will benefit experimental studies examining HTLV infection in vitro and may aid identification of therapeutic agents that block this process

Risco nutricional de pacientes hospitalizados em região central do Rio Grande do Sul

Objetivo: Identificar a ocorrência de risco nutricional em pacientes hospitalizados na rede privada em região central do RS através da Nutrition Risk Screening (NRS-2002). Método: Trata-se de um estudo transversal, realizado com 161 pacientes no período de novembro de 2016 a março de 2017. Foi aplicado o questionário NRS-2002 para identificação do RN com os pacientes admitidos em até 72 horas de internação. Resultados: A idade média dos indivíduos foi de 63,2±20 anos, sendo 37,3% (30) adultos e 101 (62,7%) idosos. O gênero feminino representou 90 (56%) da amostra. Observou-se maior ocorrência de RN entre os indivíduos com idade superior a 60 anos (p<0.05). Verificou-se que 72 (45%) apresentaram-se eutróficos e 18 (11%) desnutridos. Houve maior ocorrência de internação por neoplasias 67 (41,6%), seguido de doenças gastrointestinais 39 (24,3%) e neurológicas 26 (16%). Conclusão: A triagem nutricional NRS (2002) demonstrou-se efetiva para identificação de risco nutricional em pacientes hospitalizados.Descritores: Risco nutricional. Triagem nutricional. Desnutrição hospitalar.

Cooperation or conflict? Impact of intraspecific diversity on Escherichia coli biofilms

Intraspecific diversity in biofilm communities is associated with enhanced survival and growth of the individual biofilm populations. In here, we assess if this apparent cooperative behavior still holds as the number of different strains in a biofilm increases. Using E. coli as a model organism, the influence of intraspecific diversity in biofilm populations composed of up to six different E. coli strains, was assessed. Biofilm quantification was evaluated by crystal violet (CV) staining and colony forming units (CFU) counts. In general, with the increasing number of strains in a biofilm, an increase in cell counts and a decrease in matrix production was observed. This observation was confirmed by cluster analysis that indicated that after 24h of biofilm formation the best model, according to the Bayesian information criterion (BIC), consisted of three clusters that grouped together biofilms with an equal number of strains. It hence appears that increased genotypic diversity in a biofilm leads E. coli to maximize the production of its offspring, in detriment of the production of public goods (i.e. matrix components), that would be beneficial to all strains individually and the consortium as a whole. Apart from the ecological implications, these results can be explored in the area of clinical biofilms, as a decrease in matrix production might render these intraspecies biofilms more sensitive to antimicrobial agents

Increased intraspecies diversity in Escherichia coli biofilms promotes cellular growth at the expense of matrix production

Intraspecies diversity in biofilm communities is associated with enhanced survival and growth of the individual biofilm populations. Studies on the subject are scarce, namely, when more than three strains are present. Hence, in this study, the influence of intraspecies diversity in biofilm populations composed of up to six different Escherichia coli strains isolated from urine was evaluated in conditions mimicking the ones observed in urinary tract infections and catheter-associated urinary tract infections. In general, with the increasing number of strains in a biofilm, an increase in cell cultivability and a decrease in matrix production were observed. For instance, single-strain biofilms produced an average of 73.1 µg·cm−2 of extracellular polymeric substances (EPS), while six strains biofilms produced 19.9 µg·cm−2. Hence, it appears that increased genotypic diversity in a biofilm leads E. coli to direct energy towards the production of its offspring, in detriment of the production of public goods (i.e., matrix components). Apart from ecological implications, these results can be explored as another strategy to reduce the biofilm burden, as a decrease in EPS matrix production may render these intraspecies biofilms more sensitive to antimicrobial agents.This work was financially supported by Base Funding—UIDB/00511/2020 of the Laboratory for Process Engineering, Environment, Biotechnology and Energy—LEPABE—funded by national funds through the FCT/MCTES (PIDDAC); Project POCI-01-0145-FEDER-030431 (CLASInVivo) and project POCI-01-0145-FEDER-029841 (POLY-PREVENTT), funded by FEDER funds through COMPETE2020—Programa Operacional Competitividade e Internacionalização (POCI) and by national funds (PIDDAC) through FCT/MCTES; Strategic funding of UIDB/04469/2020 of the Centre of Biological Engineering–CEB–funded by national funds through the FCT; Project BeMundus Brazil Europe/Erasmus Mundus scholarship granted by BM13DF0014.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Polyoxazoline-Based Nanovaccine Synergizes with Tumor-Associated Macrophage Targeting and Anti-PD-1 Immunotherapy against Solid Tumors

Nanovaccines; Tumor immune microenvironment; Tumor-associated macrophagesNanovacunes; Microambient immune tumoral; Macròfags associats al tumorNanovacunas; Microambiente inmune tumoral; Macrófagos asociados al tumorImmune checkpoint blockade reaches remarkable clinical responses. However, even in the most favorable cases, half of these patients do not benefit from these therapies in the long term. It is hypothesized that the activation of host immunity by co-delivering peptide antigens, adjuvants, and regulators of the transforming growth factor (TGF)-β expression using a polyoxazoline (POx)-poly(lactic-co-glycolic) acid (PLGA) nanovaccine, while modulating the tumor-associated macrophages (TAM) function within the tumor microenvironment (TME) and blocking the anti-programmed cell death protein 1 (PD-1) can constitute an alternative approach for cancer immunotherapy. POx-Mannose (Man) nanovaccines generate antigen-specific T-cell responses that control tumor growth to a higher extent than poly(ethylene glycol) (PEG)-Man nanovaccines. This anti-tumor effect induced by the POx-Man nanovaccines is mediated by a CD8+-T cell-dependent mechanism, in contrast to the PEG-Man nanovaccines. POx-Man nanovaccine combines with pexidartinib, a modulator of the TAM function, restricts the MC38 tumor growth, and synergizes with PD-1 blockade, controlling MC38 and CT26 tumor growth and survival. This data is further validated in the highly aggressive and poorly immunogenic B16F10 melanoma mouse model. Therefore, the synergistic anti-tumor effect induced by the combination of nanovaccines with the inhibition of both TAM- and PD-1-inducing immunosuppression, holds great potential for improving immunotherapy outcomes in solid cancer patients.Funding: R.S.-F. and H.F.F. thank the following funding agencies for their generous support: The project that gave rise to these results has received funding from the “la Caixa” Foundation under the grant agreements LCF/PR/HR22/52420016, LCF/PR/HR19/52160021, and LCF/TR/CD20/52700005 (R.S.-F. and H.F.F). H.F.F thanks the generous financial support from The Fundação para a Ciência e Tecnologia-Ministério da Ciência, Tecnologia e Ensino Superior (FCT-MCTES) (EXPL/MED-QUI/1316/2021, PTDC/BTM-SAL/4350/2021, UTAP-EXPL/NPN/0041/2021, UIDB/04138/2020, UIDP/04138/2020). R.S.-F. thanks to the European Research Council (ERC) PoC Grant Agreement no. 101113390 and ERC Advanced Grant Agreement no. 835227, the Israel Science Foundation (1969/18), the Melanoma Research Alliance (Established Investigator Award no. 615808 to R.S.-F.), the Israel Cancer Research Fund (ICRF) Professorship award (no. PROF-18-682), the Morris Kahn Foundation. B.C. is supported by the FCT-MCTES (Ph.D. Fellowship SFRH/BD/131969/2017). The authors also acknowledge the NIH Tetramer Core Facility for the provision of Adpgk tetramers, in addition to the Comparative Pathology Unit of IMM and the Histopathology Facility of IGC for supporting the histopathological study

Adaptação e evidências de validade do Traumatic Grief Inventory para o Brasil

The aim of the this study was to verify the evidence of validity of the reduced version adapted for Brazilian Portuguese of the Traumatic Grief Inventory, through confirmatory factor analysis and relationship with external variables, in addition to assessing the reliability and presence of invariance. The first step consisted of the adaptation and evaluation by expert judges of the translated version. After the evaluation, the pilot version was answered by five participants of the target population, for semantic and content evaluation, being named, in Brazil, as the Inventário de Luto Traumático (ILT-BR). Then, 211 Brazilians, who went through a grieving process, answered the following instruments: Sociodemographic Questionnaire, Mental Health Self-Perception Questionnaire, and ILT-BR. The ILT-BR presented good fit indexes and reliability, positively correlated with stress, fear, and obsessive thoughts, with no invariance found. From these results, we concluded that the ILT-BR is suitable for use in Brazil.El objetivo de este estudio fue verificar la evidencia de validez de la versión reducida adaptada al portugués brasileño del Traumatic Grief Inventory (Inventario de Duelo Traumático), mediante un análisis factorial confirmatorio y la relación con variables externas, además de evaluar la precisión y presencia de invarianza. El primer paso fue la adaptación y evaluación por jueces expertos de la versión traducida. Después de la evaluación, se aplicó la versión piloto a cinco participantes de la población objetivo para la evaluación semántica y de contenido, denominándose Inventario de Luto Traumático (ILT-BR). Luego, 211 brasileños, que pasaron por un proceso de duelo, respondieron los siguientes instrumentos: Cuestionario Sociodemográfico, Cuestionario de Autopercepción de Salud Mental e ILT-BR. El ILT-BR mostró buenos índices de ajuste y precisión, correlacionándose positivamente con el estrés, el miedo y los pensamientos obsesivos, sin encontrar variación entre grupos. A partir de estos resultados, se concluye que el ILT-BR posee propiedades psicométricas adecuadas para su uso en Brasil.O objetivo do presente estudo foi verificar as evidências de validade da versão reduzida adaptada para o português do Brasil do Traumatic Grief Inventory, por meio de uma análise fatorial confirmatória e relação com variáveis externas, além de aferir a precisão e presença de invariância. A primeira etapa consistiu na adaptação e avaliação por juízes especialistas da versão traduzida. Após a avaliação, a versão piloto foi aplicada em cinco participantes da população-alvo para avaliação semântica e de conteúdo, sendo nomeado de Inventário de Luto Traumático (ILT-BR). Em seguida, 211 brasileiros, que passaram por um processo de luto, responderam aos seguintes instrumentos: Questionário Sociodemográfico, Questionário de Autopercepção de Saúde Mental e ILT-BR. O ILT-BR apresentou bons índices de ajuste e precisão, se correlacionando positivamente com estresse, medo e pensamentos obsessivos, sem variação entre grupos. A partir destes resultados, conclui-se que há evidências de que o ILT-BR apresenta boas propriedades psicométricas

Translation and cross-cultural adaptation of the Clinical Competence Questionnaire for use in Brazil

Objetivo: traducir y adaptar transculturalmente el Clinical Competence Questionnaire para uso de los estudiantes brasileños que concluyen la graduación en enfermería, así como para medir las propiedades psicométricas del cuestionario. Método: estudio metodológico realizado en seis etapas: traducción del instrumento Clinical Competence Questionnaire, obtención de consenso de las traducciones, retrotraducción, análisis por el comité de especialistas, pretest y presentación del proceso de adaptación transcultural para los desarrolladores. Las propiedades psicométricas fueron medidas utilizando el alfa de Cronbach, coeficiente de correlación intraclase e índice de validez de contenido. Resultados: el instrumento fue traducido, adaptado transculturalmente y su versión final estuvo constituida por 48 ítems. El coeficiente alfa de Cronbach fue de 0,90; el índice de concordancia de los ítems fue de 99% para los estudiantes y de 98% para los evaluadores. Conclusión: el Clinical Competence Questionnaire fue traducido y adaptado para uso de estudiantes brasileños; las propiedades psicométricas, de la versión en portugués del cuestionario, presentaron consistencia interna satisfactoria encontrada en la muestra estudiada.Objective: translating and transculturally adapting the Clinical Competence Questionnaire to Brazilian senior undergraduate Nursing students, as well as measuring psychometric properties of the questionnaire. Method: a methodological study carried out in six steps: translation of the Clinical Competence Questionnaire instrument, consensus of the translations, back-translation, analysis by an expert committee, pre-testing and then presentation of the cross-cultural adaptation process to the developers. Psychometric properties were measured using Cronbach's alpha, intraclass correlation coefficient and content validity index. Results: the instrument was translated, transculturally adapted and its final version consisted of 48 items. Cronbach's alpha coefficient was 0.90, and the agreement index of the items was 99% for students and 98% for evaluators. Conclusion: the Clinical Competence Questionnaire was translated and adapted to Brazilian students, and the psychometric properties of the Portuguese version of the questionnaire presented satisfactory internal consistency regarding the studied sample.Objetivo: traduzir e adaptar transculturalmente o Clinical Competence Questionnaire aos estudantes brasileiros concluintes da graduação em enfermagem, bem como mensurar as propriedades psicométricas do questionário. Método: estudo metodológico realizado em seis etapas: tradução do instrumento Clinical Competence Questionnaire, consenso das traduções, retrotradução, análise pelo comitê de especialistas, pré-teste e apresentação do processo de adaptação transcultural para os desenvolvedores. As propriedades psicométricas foram mensuradas utilizando-se o alfa de Cronbach, coeficiente de correlação intraclasse e índice de validade de conteúdo. Resultados: o instrumento foi traduzido, adaptado transculturalmente e sua versão final foi constituída de 48 itens. O coeficiente alfa de Cronbach foi de 0,90, e o índice de concordância dos itens foi de 99% para os estudantes e de 98% para os avaliadores. Conclusão: o Clinical Competence Questionnaire foi traduzido e adaptado a estudantes brasileiros, e as propriedades psicométricas da versão em português do questionário apresentaram consistência interna satisfatória quanto à amostra estudada

Levantamento de alterações macroscopicas post mortem em aves silvestres / Post-mortem macroscopic changes in wild birds

O Brasil, por sua grande extensão territorial e variedade climática, apresenta ampla diversidade de aves silvestres despertando o interesse comercial de criatórios autorizados, porém, também a ocorrência da comercialização irregular provenientes do tráfico de animais e nesta situação, por sua vez estes ocasionalmente são vítimas de fraturas, desnutrição, lacerações e até mesmo queimaduras. Estes animais quando apreendidos são conduzidos a centros especializados para tratamento clinico e/ou cirúrgico como ocorre com o Serviço de Atendimento a Animais Silvestres - SAAS da UNICENTRO, porém infelizmente muitas vezes veem a óbito devido suas condições tornando-se fonte de estudo anatomopatológico com a finalidade de aprendizado referente a enfermidades que possam apresentar, assim são encaminhados ao Laboratório de Anatomia Patológica Veterinária também da UNICENTRO, situado no campus CEDETEG município de Guarapuava. Foram analisadas 62 aves necropsiadas do o período de agosto de 2020 até abril de 2021, do total da amostragem realizada, 8 apresentaram comprometimento intestinal associado a enterite catarral estando este processo associado a alterações parasitarias ocorridas de forma persistente, 8 com alterações exclusivamente circulatórias e em sacos aéreos relacionando-se a reações inflamatórios de etiologia viral, 15 apresentaram alterações congestivas hepáticas tendo este comprometimento relacionado ao comprometimento circulatório consequente a hipóxia oriunda de enfermidade cardiorrespiratória ou toxêmica, 9 tinham alterações circulatórias em epicárdio favorecido pela etiologia viral direta ao endotélio vascular local ou em resposta a alteração sistêmica, 17 apresentaram fraturas em asas associadas a processos traumáticos e em 5 observou-se aderências viscerais em abdômen tendo como diagnóstico conclusivo a tricomoníase observando granulomas em sistema digestório e respiratório sendo possível a identificação do agente etiológico e descrição da lesão pela microscopia onde as amostras foram coletadas e armazenas em solução de formalina tamponada a 10% e coradas pela hematoxilina e eosina (H&E). A importância no levantamento referente a causa mortis faz-se necessária para compreender o porquê muitas vezes estes animais não são salvos clinicamente pois já eram portadores de enfermidades as quais agravaram com o consequente ato do tráfico e conhecer essas etiologias permite que nas próximas atividades condutas mais adequadas sejam realizadas possibilitando que estes sejam salvo.

Contaminação por micobacteriose em peixe ornamental: Xiphophorus maculatus / Mycobacterial Contamination in Ornamental Fish: Xiphophorus maculatus

O Xiphophorus maculatus, popularmente conhecido como plati, é originário da América do Norte e Central, introduzido no Brasil nos estados do Espírito Santo e São Paulo, onde ocorrem em vida livre nos canais e valas com fluxo de água tipicamente lento, também em córregos e brejos. Em aquários existem linhagens raramente pura, inclusive encontrado vestígios de material genético de outras espécies do gênero, cruzamentos entre Xiphophorus variatus e Xiphophorus hellerii e algumas subespécies apresentam cores obtidas em cativeiro como verde oliva, brancos e pretos. Estes animais em cativeiro são comumente acometidos por micobacterioses, uma enfermidade infectocontagiosa granulomatosa causada por um bacilo gram positivo no qual a sua contaminação se deve normalmente pela ingestão de alimentos contaminados. O presente trabalho descreve a ocorrência de micobacteriose em Xiphophorus maculatus provenientes de venda comercial, nos quais foram encaminhados ao Laboratório de Anatomia Patológica Veterinária da UNICENTRO. Os animais acondicionados em solução de formalina tamponada a 10% e corados pela técnica de Hematoxilina & Eosina (HE), sendo observado infiltrado inflamatório mononuclear com presença de células gigantes do tipo epitelioides, estas apresentavam distribuição nuclear periférica, e presença do Mycobacterium sp distribuídos em seu citoplasma. Tal tipo de alteração é considerada patognomônico deste agente etiológico, e associando a apresentação do desvio de coluna vertebral caracterizou o diagnóstico por micobacteriose