21 research outputs found

    Comparing derivatization reagents for quantitative LC–MS/MS analysis of a variety of vitamin D metabolites

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    The present study systematically compares the sensitivity and selectivity of the analysis of multiple vitamin D metabolites after chemical derivatization using different reagents for liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC–MS/MS). Generally, chemical derivatization is applied to vitamin D metabolites to increase the ionization efficiency, which is particularly important for very low abundant metabolites. Derivatization can also improve the selectivity of the LC separation. A wide variety of derivatization reagents has been reported in recent years, but information on their relative performance and applicability to different vitamin D metabolites is, unfortunately, not available in the literature. To fill this gap, we investigated vitamin D3, 3ÎČ-25-hydroxyvitamin D3 (3ÎČ-25(OH)D3), 3α-25-hydroxyvitamin D3 (3α-25(OH)D3), 1,25-dihydroxyvitamin D3 (1,25(OH)2D3), and 24,25-dihydroxyvitamin D3 (24,25(OH)2D3) and compared response factors and selectivity after derivatizing with several important reagents, including four dienophile reagents (4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione (PTAD), 4-[2-(6,7-dimethoxy-4-methyl-3-oxo-3,4-dihydroquinoxalinyl)ethyl]-1,2,4-triazoline-3,5-dione (DMEQ-TAD), Amplifex, 2-nitrosopyridine (PyrNO)) as well as two reagents targeting hydroxyl groups: isonicotinoyl chloride (INC) and 2-fluoro-1-methylpyridinium-p-toluenesulfonate (FMP-TS). In addition, a combination of dienophiles and hydroxyl group reagents was examined. For LC separations, reversed-phase C-18 and mixed-mode pentafluorophenyl HPLC columns using different compositions of the mobile phase were compared. With respect to detection sensitivity, the optimum derivatization reagent for the profiling of multiple metabolites was Amplifex. Nevertheless, FMP-TS, INC, PTAD, or PTAD combined with an acetylation reaction showed very good performance for selected metabolites. These reagent combinations provided signal enhancements on the order of 3- to 295-fold depending on the compound. Chromatographic separation of the dihydroxylated vitamin D3 species was readily achieved using any of the derivatization reactions, while for 25(OH)D3 epimers, only PyrNO, FMP, INC, and PTAD combined with acetylation enabled complete separation. In conclusion, we believe this study can serve as a useful reference for vitamin D laboratories, to help analytical and clinical scientists decide which derivatization reagent to choose for their application.Peer Reviewe

    Analysis of vitamin D metabolic markers by mass spectrometry: Recent progress regarding the “gold standard” method and integration into clinical practice

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    Liquid chromatography/tandem mass spectrometry is firmly established today as the gold standard technique for analysis of vitamin D, both for vitamin D status assessments as well as for measuring complex and intricate vitamin D metabolic fingerprints. While the actual mass spectrometry technology has seen only incremental performance increases in recent years, there have been major, very impactful changes in the front- and back-end of MS-based vitamin D assays; for example, the extension to new types of biological sample matrices analyzed for an increasing number of different vitamin D metabolites, novel sample preparation techniques, new powerful chemical derivatization reagents, as well the continued integration of high resolution mass spectrometers into clinical laboratories, replacing established triple-quadrupole instruments. At the same time, the sustainability of mass spectrometry operation in the vitamin D field is now firmly established through proven analytical harmonization and standardization programs. The present review summarizes the most important of these recent developments.Peer Reviewe

    Tocotrienol Affects Oxidative Stress, Cholesterol Homeostasis and the Amyloidogenic Pathway in Neuroblastoma Cells: Consequences for Alzheimer’s Disease

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    One of the characteristics of AlzheimerÂŽs disease (AD) is an increased amyloid load and an enhanced level of reactive oxidative species (ROS). Vitamin E has known beneficial neuroprotective effects, and previously, some studies suggested that vitamin E is associated with a reduced risk of AD due to its antioxidative properties. However, epidemiological studies and nutritional approaches of vitamin E treatment are controversial. Here, we investigate the effect of α-tocotrienol, which belongs to the group of vitamin E, on AD-relevant processes in neuronal cell lines. In line with the literature, α-tocotrienol reduced the ROS level in SH-SY5Y cells. In the presence of tocotrienols, cholesterol and cholesterol esters, which have been shown to be risk factors in AD, were decreased. Besides the unambiguous positive effects of tocotrienol, amyloid-ÎČ (AÎČ) levels were increased accompanied by an increase in the activity of enzymes responsible for AÎČ production. Proteins and gene expression of the secretases and their components remained unchanged, whereas tocotrienol accelerates enzyme activity in cell-free assays. Besides enhanced AÎČ production, tocotrienols inhibited AÎČ degradation in neuro 2a (N2a)-cells. Our results might help to understand the controversial findings of vitamin E studies and demonstrate that besides the known positive neuroprotective properties, tocotrienols also have negative characteristics with respect to AD

    Differentiation of dihydroxylated vitamin D3 isomers using tandem mass spectrometry

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    Vitamin D compounds are a group of secosteroids derived from cholesterol that are vital for maintaining bone health in humans. Recent studies have shown extraskeletal effects of vitamin D, involving vitamin D metabolites such as the dihydroxylated vitamin D3 compounds 1,25-dihydroxyvitamin D3 and 24,25-dihydroxyvitamin D3. Differentiation and characterization of these isomers by mass spectrometry can be challenging due to the zero-mass difference and minor structural differences between them. The isomers usually require separation by liquid chromatography (LC) prior to mass spectrometry, which adds extra complexity to the analysis. Herein, we investigated and revisited the use of fragmentation methods such as collisional induced dissociation (CID), infrared multiphoton dissociation (IRMPD), electron induced dissociation (EID), and ultraviolet photodissociation (UVPD), available on a 12T Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometer (FT-ICR MS) to generate characteristic fragments for the dihydroxylated vitamin D3 isomers that can be used to distinguish between them. Isomer-specific fragments were observed for the 1,25-dihydroxyvitamin D3, which were clearly absent in the 24,25-dihydroxyvitamin D3 MS/MS spectra using all fragmentation methods mentioned above. The fragments generated due to cleavage of the C-6/C-7 bond in the 1,25-dihydroxyvitamin D3 compound demonstrate that the fragile OH groups were retained during fragmentation, thus enabling differentiation between the two dihydroxylated vitamin D3 isomers without the need for prior chromatographic separation or derivatization

    Tocotrienol Affects Oxidative Stress, Cholesterol Homeostasis and the Amyloidogenic Pathway in Neuroblastoma Cells: Consequences for Alzheimer’s Disease

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    One of the characteristics of AlzheimerÂŽs disease (AD) is an increased amyloid load and an enhanced level of reactive oxidative species (ROS). Vitamin E has known beneficial neuroprotective effects, and previously, some studies suggested that vitamin E is associated with a reduced risk of AD due to its antioxidative properties. However, epidemiological studies and nutritional approaches of vitamin E treatment are controversial. Here, we investigate the effect of α-tocotrienol, which belongs to the group of vitamin E, on AD-relevant processes in neuronal cell lines. In line with the literature, α-tocotrienol reduced the ROS level in SH-SY5Y cells. In the presence of tocotrienols, cholesterol and cholesterol esters, which have been shown to be risk factors in AD, were decreased. Besides the unambiguous positive effects of tocotrienol, amyloid-ÎČ (AÎČ) levels were increased accompanied by an increase in the activity of enzymes responsible for AÎČ production. Proteins and gene expression of the secretases and their components remained unchanged, whereas tocotrienol accelerates enzyme activity in cell-free assays. Besides enhanced AÎČ production, tocotrienols inhibited AÎČ degradation in neuro 2a (N2a)-cells. Our results might help to understand the controversial findings of vitamin E studies and demonstrate that besides the known positive neuroprotective properties, tocotrienols also have negative characteristics with respect to AD

    AVIS du 16 dĂ©cembre 2016 rĂ©visĂ© le 14 mars 2017 de l’Agence nationale de sĂ©curitĂ© sanitaire de l’alimentation, de l’environnement et du travail relatif Ă  la contamination de produits de charcuterie crue par Trichinella spp.

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    Cet avis annule et remplace l’avis du 16 dĂ©cembre 2016. La recommandation relative Ă  l’étiquetage p 27 « cuire suffisamment les charcuteries Ă  base de foie de porc destinĂ©es Ă  ĂȘtre consommĂ©es cuites » est modifiĂ©e comme suit : « De façon plus gĂ©nĂ©rale, les experts recommandent un Ă©tiquetage mentionnant : « cuire Ă  cƓur » pour les produits Ă  base de porc destinĂ©s Ă  ĂȘtre consommĂ©s cuits.Citation suggĂ©rĂ©e : Anses. (2017). Avis du 16 dĂ©cembre 2016 rĂ©visĂ© le 14 mars 2017 de l’Agence nationale de sĂ©curitĂ© sanitaire de l’alimentation, de l’environnement et du travail relatif Ă  la contamination de produits de charcuterie crue par Trichinella spp. (saisine n°2016-SA-0040). Maisons-Alfort : Anses, 34 p. Saisines liĂ©es n°2007-SA-0025 et 2010-SA-0231Un Ă©pisode de toxi-infection alimentaire collective (TIAC) dĂ» Ă  Trichinella liĂ© Ă  la consommation de charcuterie crue de viande de porc (figatelles) est survenu en avril 2015. Cette toxi-infection a 27 entraĂźnĂ© trois cas confirmĂ©s pour 17 personnes exposĂ©es. Les analyses rĂ©alisĂ©es sur les figatelles par le laboratoire national de rĂ©fĂ©rence (LNR, Anses, Maisons-Alfort) ont permis d’identifier la prĂ©sence de Trichinella britovi. Les figatelles ont Ă©tĂ© retirĂ©es de la chaĂźne alimentaire et l’élevage des porcs incriminĂ©s dans leur fabrication a fait l’objet d’un arrĂȘtĂ© prĂ©fectoral de mise sous surveillance (APMS) en avril 2015. Le(s) porc(s) ayant Ă©tĂ© Ă  l’origine de la TIAC avai(en)t Ă©tĂ© abattu(s) clandestinement. Par la suite, les analyses conduites au laboratoire vĂ©tĂ©rinaire dĂ©partemental d'Ajaccio (LVD 2A), dans les conditions du diagnostic rĂ©glementaire, ont permis d'identifier deux porcs positifs avec prĂ©sence de deux larves de Trichinella dans des Ă©chantillons de diaphragme de masse ≄ 5 g. Ces porcs provenaient de l’élevage placĂ© sous APMS. Les analyses du laboratoire vĂ©tĂ©rinaire dĂ©partemental ont Ă©tĂ© confirmĂ©es par le LNR avec l'identification de l'espĂšce Trichinella britovi. Les rĂ©sultats des analyses montrent que les charges parasitaires sont trĂšs faibles puisqu'elles sont infĂ©rieures Ă  une larve/gramme (LPG). La dĂ©tection d’une charge parasitaire d’une LPG avec le test de digestion artificielle rĂ©glementaire nĂ©cessite l’analyse d’au moins trois Ă  cinq grammes de muscle (Forbes et Gajadhar 1999), cela constitue la limite de dĂ©tection du test officiel. Cette charge d’une LPG correspond Ă©galement Ă  la limite en-dessous de laquelle il a Ă©tĂ© jusqu’ici considĂ©rĂ© que l'individu qui ingĂšre de la viande contaminĂ©e n’exprimera pas de trichinellose symptomatique (OIE 2012). La rĂ©glementation communautaire relative aux contrĂŽles officiels et aux protocoles analytiques concernant la prĂ©sence de Trichinella dans les viandes a Ă©tĂ© rĂ©visĂ©e en aoĂ»t 2015 (rĂšglement d’exĂ©cution (UE) 2015/1375 de la Commission du 10 aoĂ»t 2015). Les questions instruites dans l’avis sont les suivantes : 1. Actualisation des connaissances relatives Ă  la contamination des porcs par Trichinella et au risque pour le consommateur, par rapport aux avis de l’Afssa de 2007 (Afssa 2007a, b, c, d, e) et Ă  la fiche de danger biologique transmissible par les aliments de 2011. Cette actualisation portera en particulier sur les nouvelles connaissances acquises relatives Ă  la relation dose-rĂ©ponse chez l’Homme. 2. Analyse de la probabilitĂ© de dĂ©tection de Trichinella dans la viande de porc. 3. Evaluation de l’adĂ©quation entre le systĂšme de surveillance actuel et le risque sanitaire pour le consommateur. Le pĂ©rimĂštre de l’expertise est limitĂ© aux Ă©levages corses de porcs en plein air

    Avis de l'Anses relatif à la présence de parasites Toxocara spp. dans les viandes de sanglier sauvage

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    Citation suggĂ©rĂ©e : Anses. (2023). Avis relatif Ă  la prĂ©sence de parasites Toxocara spp. dans les viandes de sanglier sauvage (saisine 2023-SA-0055). Maisons-Alfort : Anses, 20 p.Des analyses sur les carcasses de sangliers sauvages inspectĂ©es dans les Ă©tablissements français de traitement de gibiers sauvages ont rĂ©vĂ©lĂ© depuis deux ans la prĂ©sence rĂ©guliĂšre de larves de Toxocara spp. Ce constat a conduit les services vĂ©tĂ©rinaires d'inspection Ă  saisir ces carcasses, conformĂ©ment Ă  l'article 45 du rĂšglement d'exĂ©cution (UE) n°2019/627 de la Commission du 15 mars 2019 qui prĂ©voit que les viandes prĂ©sentant une infestation parasitaire sont dĂ©clarĂ©es impropres Ă  la consommation humaine. La problĂ©matique pour le gestionnaire est double. Le premier enjeu est liĂ© au risque de toxocarose pour les consommateurs de viandes de sanglier et des recommandations relatives Ă  la conservation et la cuisson des viandes Ă  adresser aux chasseurs. Le second enjeu est relatif Ă  la gestion des lots de sangliers dĂ©tectĂ©s positifs.Les demandes instruites dans le cadre de cette expertise sont les suivantes :Demande 1 : Établir un profil de risque pour Toxocara spp. dans les viandes de sanglier sauvage.Demande 2 : Évaluer l’efficacitĂ© de traitements assainissants de la carcasse sur la viabilitĂ© duparasite Toxocara spp., plus particuliĂšrement la congĂ©lation et la cuisson, dans le cas oĂč cestraitements sont rĂ©alisĂ©s, soit par les Ă©tablissements du secteur alimentaire, soit directementpar les consommateurs

    Avis de l'Anses relatif à la présence de parasites Toxocara spp. dans les viandes de sanglier sauvage

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    Citation suggĂ©rĂ©e : Anses. (2023). Avis relatif Ă  la prĂ©sence de parasites Toxocara spp. dans les viandes de sanglier sauvage (saisine 2023-SA-0055). Maisons-Alfort : Anses, 20 p.Des analyses sur les carcasses de sangliers sauvages inspectĂ©es dans les Ă©tablissements français de traitement de gibiers sauvages ont rĂ©vĂ©lĂ© depuis deux ans la prĂ©sence rĂ©guliĂšre de larves de Toxocara spp. Ce constat a conduit les services vĂ©tĂ©rinaires d'inspection Ă  saisir ces carcasses, conformĂ©ment Ă  l'article 45 du rĂšglement d'exĂ©cution (UE) n°2019/627 de la Commission du 15 mars 2019 qui prĂ©voit que les viandes prĂ©sentant une infestation parasitaire sont dĂ©clarĂ©es impropres Ă  la consommation humaine. La problĂ©matique pour le gestionnaire est double. Le premier enjeu est liĂ© au risque de toxocarose pour les consommateurs de viandes de sanglier et des recommandations relatives Ă  la conservation et la cuisson des viandes Ă  adresser aux chasseurs. Le second enjeu est relatif Ă  la gestion des lots de sangliers dĂ©tectĂ©s positifs.Les demandes instruites dans le cadre de cette expertise sont les suivantes :Demande 1 : Établir un profil de risque pour Toxocara spp. dans les viandes de sanglier sauvage.Demande 2 : Évaluer l’efficacitĂ© de traitements assainissants de la carcasse sur la viabilitĂ© duparasite Toxocara spp., plus particuliĂšrement la congĂ©lation et la cuisson, dans le cas oĂč cestraitements sont rĂ©alisĂ©s, soit par les Ă©tablissements du secteur alimentaire, soit directementpar les consommateurs

    Avis de l'Anses relatif à l’actualisation des repùres alimentaires du PNNS pour les femmes enceintes ou allaitantes

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    Les bases scientifiques nĂ©cessaires Ă  l’établissement des repĂšres du Programme NationalNutrition SantĂ© (PNNS) ont Ă©tĂ© actualisĂ©es par l’Anses en 2016 pour la population gĂ©nĂ©rale adulte sur la base des nouvelles rĂ©fĂ©rences nutritionnelles et des donnĂ©es rĂ©centes de consommation et de composition des aliments (Anses 2016b). Par ailleurs, l’activitĂ© physique a Ă©tĂ© traitĂ©e dans le rapport « Actualisation des repĂšres du PNNS - RĂ©visions des repĂšres relatifs Ă  l’activitĂ© physique et Ă  la sĂ©dentaritĂ© », saisine n°2012-SA-0155, publiĂ© en 2016 (Anses 2016c).L’actualisation des repĂšres alimentaires en vigueur dans le cadre du prĂ©cĂ©dent PNNS 2011-2015 pour la population des femmes enceintes ou allaitantes se fonde sur l’analyse desrecommandations existantes dans d’autres pays et sur les relations Ă©pidĂ©miologiques entre la consommation de groupes d’aliments et la santĂ© des femmes enceintes ou allaitantes et de leur enfant. Le prĂ©sent avis porte sur les femmes enceintes et allaitantes dont la grossesse ne prĂ©sente pas de risque particulier et n’est pas qualifiĂ©e de pathologique.Les risques liĂ©s Ă  la consommation d’alcool par les femmes enceintes ou allaitantes ne sont pas traitĂ©s dans le cadre de cet avis car c’est une question spĂ©cifique, indĂ©pendante des autres facteurs alimentaires, qui a fait l’objet d’évaluation et de procĂ©dure de gestion rĂ©centes (SantĂ© publique France 2017)
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