INDUÇÃO DE OVULAÇÃO COM SWAB VAGINAL EM GATAS DOMÉSTICAS E SEUS EFEITOS SOBRE A MORFOLOGIA UTERINA

A ovulação em gatas é induzida por um reflexo neuroendócrino atribuído à estimulação mecânica dos receptores sensoriais durante o coito. Esta estimulação pode ser simulada com auxílio do swab vaginal, desencadeando a pseudogestação. Objetivou-se verificar a eficiência da indução de ovulação com swab, a fim de estabelecer um tratamento contraceptivo natural para felinos domésticos, bem como os efeitos sobre o útero do uso repetido dessa técnica. Na primeira fase do trabalho, foram avaliados 12 animais em três ciclos estrais consecutivos. No primeiro ciclo (T1), houve estimulação vaginal com swab. No segundo ciclo (T2), foi utilizado macho vasectomizado para cópula. No último ciclo (T3), a ovulação foi acompanhada sem estímulo (controle). Na segunda etapa do trabalho, 13 gatas foram submetidas a sucessivos estados de pseudogestação com intuito de verificar os efeitos da estimulação mecânica sobre o útero. A confirmação da ovulação em todas as etapas do trabalho foi realizada por meio da mensuração dos níveis de progesterona. A estimulação vaginal com swab apresentou resposta similar à obtida por monta natural (P>0,05). Algumas gatas apresentaram modificações uterinas discretas; no entanto, nenhum desses achados foi considerado de relevância patológica. Desta forma, a indução de ovulação com swab mostrou-se segura e sem efeitos colaterais expressivos.Palavras-chave: contraceptivo; estro; felinos; ovulação

Influência do momento da inseminação na taxa de concepção e razão sexual de fêmeas zebuínas/Influence of the moment of insemination in the conception and sexual ratio in zebu females

Este trabalho foi realizado com objetivo de avaliar se o intervalo entre a inseminação e ovulação pode influenciar a taxa de prenhez e a razão sexual secundária da prole de fêmeas zebuínas submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Foram sincronizados 469 fêmeas, entre novilhas e vacas, alocadas aleatoriamente em três grupos experimentais: IA42, IA54 e IA66, inseminadas respectivamente às 42, 54 e 66 horas após a remoção do implante de progesterona. As taxas de concepção diferiram entre as categorias (p < 0,05), mas não entre os tratamentos resultando em 28% e 45% no grupo IA42, 34% e 47% no IA54 e finalmente 33% e 48% no IA66 para novilhas e vacas respectivamente. Os resultados demonstraram que o momento da inseminação não alterou a taxa de concepção nem a razão sexual secundária das crias, o que permite maleabilidade no momento de inseminação após sincronização e a busca por alternativas para manipular a razão sexual

EFEITO DA SOLUÇÃO, DA FIXAÇÃO EM FORMOL-SALINA E DO TEMPO DE INCUBAÇÃO SOBRE OS RESULTADOS DO TESTE HIPOSMÓTICO PARA SÊMEN EQÜINO CONGELADO

Este experimento objetivou determinar o melhor protocolo de teste hiposmótico (HO) para avaliar a integridade funcional da membrana plasmática dos espermatozóides eqüinos submetidos à criopreservação. Foram avaliadas três soluções HO (água destilada, frutose 100 mOsmol/L e citrato de sódio 100 mOsmol/L), os tempos de incubação de 0, 15 e 30 minutos dependendo do tipo de solução utilizada e o processo de fixação ou não em formol-salina. Após a descongelação do sêmen foram retiradas alíquotas de sêmen para incubação nas três soluções HO. Decorridos os tempos de incubação (0, 15 e 30 minutos), retirou-se uma alíquota de sêmen para leitura do percentual de espermatozóides reativos ao teste HO e fixou-se, em formolsalina, o restante da mistura sêmen/solução HO para posterior leitura e comparação entre as leituras fixadas versus não fixadas. Não houve diferença (P>0,05) entre os tempos de incubação independente da solução HO utilizada. A água destilada apresentou maior percentagem de espermatozóides reativos ao teste no protocolo que não usou a fixação em formol, entretanto apresentou resultado semelhante às amostras incubadas em frutose e citrato de sódio, no protocolo que utilizou a fixação em formol. Não houve diferença (P>0,05) na comparação, por solução, da leitura fixada versus não fixada.
 PALAVRAS-CHAVE: Eqüino, sêmen congelado, teste hiposmótic

DIFERENTES SOLUÇÕES DE TESTE HIPOSMÓTICO PARA SÊMEN OVINO

O teste hiposmótico (HO) vem sendo usado para avaliar a integridade funcional da membrana espermática de várias espécies de mamíferos domésticos e baseia-se na troca de fluido do meio intracelular com o meio extracelular até que haja um equilíbrio. O objetivo deste estudo foi comparar duas diferentes soluções de teste HO para sêmen ovino fresco e resfriado, utilizando as soluções de frutose-citrato de sódio e sacarose, ambas a 100mOsmol/L. Foram utilizadas 8 amostras de sêmen fresco e 128 amostras de sêmen resfriado. Para cada amostra de sêmen foram retiradas duas alíquotas de 25μL. Uma alíquota foi adicionada em um eppendorf4 contendo 200μL de solução de frutose-citrato de sódio e a outra em eppendorf contendo 200μL de solução de sacarose. As duas amostras foram incubadas em banho-maria a 37o C, por 30 minutos e posteriormente fixadas com 300μL de formol salina tamponada. A leitura das formas reativas foi realizada em microscopia de contraste de fase, com objetiva de imersão de 100X. O percentual de formas reativas, com membrana funcionalmente íntegra, foi avaliado após contagem dos espermatozóides com dobramento e/ou enrolamento de cauda e também após subtração das patologias de cauda encontradas antes do teste. Para o sêmen fresco, as soluções de frutose-citrato de sódio e sacarose foram semelhantes (P>0,05), na identificação do percentual de formas reativas, quando a fórmula de cálculo foi aplicada. Quando a fórmula não foi utilizada, verificou-se que a frutose-citrato de sódio foi superior a sacarose (P<0,05). As amostras de sêmen resfriado, antes e após submeter os dados à fórmula de cálculo reagiram diferentemente, dependendo da solução HO utilizada, sendo a frutose-citrato de sódio (P<0,05) a melhor solução para a realização deste teste HO em sêmen resfriado de ovino

OVULATION INDUCTION WITH VAGINAL SWAB IN DOMESTIC FEMALE CATS AND ITS EFFECTS ON UTERINE MORPHOLOGY

A neuroendocrine reflex attributed to the mechanical stimulation of sensory receptors during copulation induces ovulation in cats. This stimulation can be simulated with a vaginal swab, triggering pseudopregnancy. The efficiency of ovulation induction with swab was evaluated in order to establish a natural contraceptive treatment for domestic cats as well as to analyze the effect on uterus of the repeated use of this technique. At the first phase of the study, 12 animals were evaluated in three consecutive estrous cycles. In the first cycle (T1), vaginal swab stimulation was applied. In the second cycle (T2), a vasectomized male was used. In the third cycle (T3), ovulation was accompanied unstimulated (control). At the second phase of the study, 13 female cats were induced to successive pseudopregnancy states to check the effects on the uterus. Confirmation of ovulation in the two phases of the study was carried out by measuring progesterone serum levels. The vaginal swab stimulation showed a similar response to that obtained by natural mating (P>0.05). Some cats showed mild uterine changes without pathological relevance. Thus, ovulation induction with swab is secure and without significant side effects.Keywords: contraceptive; feline; oestrus; ovulation

Biometria testicular de garanhões da raça Campolina

O objetivo deste trabalho foi avaliar a biometria testicular de garanhões Campolina, correlacionando-a com a idade e peso corporal do animal. Foram realizadas medidas lineares dos testículos direito e esquerdo de comprimento (CD, CE), largura (LD, LE), altura (HD, HE), e a largura escrotal total (LET). Vinte e cinco garanhões foram avaliados e divididos em três grupos etários: Grupo I (60 e 120 meses). Os parâmetros de biometria testicular no GI foram: 10,0 ± 1,5 cm (CD); 10,1 ± 1,2 cm (CE); 5,8 ± 0,5 cm (LD); 6,2 ± 0,6 cm (LE); 6,6 ± 0,8 cm (HD); 7,0 ± 0,8 cm (HE); 10,6 ± 1,0 cm (LET). As medidas do GII foram: 10,9 ± 1,1 cm (CD); 10,4 ± 0,8 cm (CE); 6,5 ± 0,5 cm (LD); 6,8 ± 0,6 cm (LE); 7,5 ± 1,0 cm (HD); 7,8 ± 0,5 cm (HE); 12,0 ± 1,0 cm (LET). No GIII foram: 9,8 ± 0,8 cm (CD); 10,3 ± 0,5 cm (CE); 7,0 ± 0,8 cm (LD); 7,4 ± 0,8 cm (LE); 7,1 ± 0,7 cm (HD); 7,6 ± 1,1 cm (HE); 11,9 ± 0,8 cm (LET). Não houve diferença entre as medidas lineares de comprimento, largura e altura, entre os testículos direito e esquerdo dos animais estudados. Das medidas testiculares lineares somente a largura testicular média no grupo I diferiu dos grupos etários II e III (P0,05)

Low density lipoproteins added to an extender frozen or lyophilized are evenly efficient in cryoprotecting ovine sperm cells than when 16% whole egg yolk was added

The aim of this study was to test different concentrations of low density lipoprotein (LDL) in replacement of whole egg yolk in extenders preserved in the aqueous or lyophilized form, for ram sperm cryopreservation using two cooling curves (-40°C/min from 5 to –140°C and nitrogen vapor). One ejaculate from six Santa Inês rams was collected. Each ejaculate was divided into nine different diluents as follows: Tris-16% yolk (control), and Tris with 2, 4, 6 and 8% fresh LDL, and criopreserved in the aqueous or lyophilized form. The samples were diluted to a final concentration of 100 x 106 sperm/mL and filled into 0.25 ml straws. After thaw, sperm cells were evaluated for motility and sperm kinetics (CASA), and submitted to the hypoosmotic swelling test and the evaluation of the structural integrity of sperm membranes using fluorescent dyes (CFDA: PI), as well as sperm morphology and longevity. The experimental design was randomized blocks, and results were submitted to ANOVA and the averages were compared using the Scott-Knott test. There were no differences in progressive motility and functional and structural integrity of the membrane evaluated when different concentrations of aqueous or lyophilized low density lipoproteins or egg yolk were added to the extender (P>0.05). As for the velocity of sperm movement, the control medium had some kinetic scores similar to the extender containing LDL, both aqueous and lyophilized (P> 0.05). Results were similar between cooling curves. Therefore, we conclude that the media containing all concentrations of LDL, aqueous or lyophilized, were able to protect the ram sperm cells during the cryopreservation process, as whole egg yolk did

Efeito da catalase, superóxido dismutase e glutationa reduzida em diluidor contendo lipoproteínas de baixa densidade na viabilidade de espermatozoides ovino criopreservados

 The aim of this study was to evaluate the motility, kinetics and membrane integrity of ovine sperm cryopreserved in extenders containing 8% LDL with enzymatic antioxidants at different concentrations. Four Santa Inês rams were used to form four pools of semen (each pool containing ejaculates from four ram, totaling four ejaculates per animal). Each seminal pool was divided into eight aliquots for the following treatments: 1) Tris-glucose-glycerol (TGG) + (16%) egg yolk (control 1); 2) TGG + 8% (w/v) LDL (control 2); 3) TGG + 8% LDL + catalase 100 U/mL; 4) TGG + 8% LDL + catalase 200 U/mL; 5) TGG + 8% LDL + superoxide dismutase 100 U/mL; 6) TGG + 8% LDL + superoxide dismutase 200 U/mL; 7) TGG + 8% LDL + reduced glutathione 5 mM; and 8) TGG + 8% LDL + reduced glutathione 10 mM. The samples were packed into 0.25 mL straws, cooled (-0.25 °C/ min), maintained at 5 °C for 2 h and then frozen (-25 °C/ min) using a TK4000®. Immediately after thawing (38 °C/ 30 s), sperm motility and movement characteristics were assessed by computer sperm analysis (CASA). The structural integrity of the plasma and acrosomal membranes was analyzed using fluorescent dyes. The functional integrity of membranes was assessed using a hypoosmotic swelling test. As assessed by ANOVA, significant differences (P<0.05) among treatments were only observed for VCL, VSL and VAP. For the VCL variable, the 2, 3, 4, 5, 6 and 7 extenders were similar and higher than 1 and 8 extenders, the latter being similar to each other. For the VSL variable, the 3, 4, 5, 6 and 7 extenders were similar and higher than 1, 2 and 8 extenders, the latter being similar to each other. For the VAP variable, the 3, 4 and 6 extenders were similar and higher than 1, 2, 5, 7 and 8 extenders, the latter being similar to each other. In conclusion, enzymatic antioxidants as catalase e superoxide dismutase improve the protective activity of extenders containing LDL on frozen ovine sperm. Objetivou-se avaliar a motilidade, cinética e integridade das membranas de espermatozoides ovinos criopreservados em diluidores contendo 8% de LDL com antioxidantes enzimáticos em diferentes concentrações. Quatro carneiros da raça Santa Inês foram utilizados para formar quatro pools de sêmen (cada pool contendo ejaculados provenientes dos quatro carneiros, totalizando quatro ejaculados por animal). Cada pool de sêmen foi dividido em oito alíquotas para os seguintes tratamentos: 1) Tris-glicose-glicerol (TGG) + (16%) gema de ovo (controle 1); 2) TGG + 8% (g/L) LDL (controle 2); 3) TGG + 8% LDL + catalase 100 U/mL; 4) TGG + 8% LDL + catalase 200 U/mL; 5) TGG + 8% LDL + superóxido dismutase 100 U/mL; 6) TGG + 8% LDL + superóxido dismutase 200 U/mL; 7) TGG + 8% LDL + glutationa reduzida 5 mM; and 8) TGG + 8% LDL + glutationa reduzida 10 mM. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,25 mL, resfriadas (-0,25 °C/min), mantidas a 5 °C por duas horas e em seguida congeladas (-25 °C/ min) usando uma máquina de congelar TK4000®. Imediatamente depois da descongelação (38 °C/30 s), as amostras foram submetidas à análise computadorizada (CASA) para avaliação da motilidade e cinética. A integridade estrutural das membranas plasmática e acrossomal foi analisada utilizando corantes fluorescentes. A integridade funcional das membranas foi avaliada utilizando o teste hiposmótico. Como indicado pelo teste ANOVA, diferenças significativas (P<0,05) entre tratamentos só foram observadas para VCL, VSL e VAP. Para a variável VCL, os meios diluidores 2, 3, 4, 5, 6 e 7 foram similares e maiores que os diluidores 1 e 8, sendo os últimos semelhantes entre si. Para a variável VSL, os diluidores 3, 4, 5, 6 e 7 foram similares e maiores que os diluidores 1, 2 e 8, sendo os últimos semelhantes entre si. Para a variável VAP, os diluidores 3, 4 e 6 foram similares e maiores que o 1, 2, 5, 7 e 8, sendo os últimos semelhantes entre si. Em conclusão, os antioxidantes enzimáticos catalase e superóxido dismutase melhoraram a atividade protetora dos diluidores contendo LDL sobre os espermatozoides ovinos

What is the most suitable hypoosmotic swelling test to assess functional integrity of cryopreserved equine sperm?

ABSTRACT. Snoeck P.P.N., Melo M.I.V., Alves S.G.G., Bittencourt R.F., Ribeiro Filho A.L., Chalhoub M. & Henry M. [What is the most suitable hypoosmotic swelling test to assess functional integrity of cryopreserved equine sperm?] Qual é o teste hiposmótico mais indicado para avaliar a integridade funcional de espermatozoides equino criopreservados? Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 36(4):355-361, 2014. Departamento de Ciências Agrárias e Ambientais, Universidade Estadual de Santa Cruz, Rodovia Jorge Amado, Km 16, Salobrinho, Ilhéus, BA 45662-000, Brasil. E-mail: [email protected] The aim of this work was to standardize the most efficient hypoosmotic swelling test (HOST) to determine the percentage of functional integrity of cryopreserved equine sperm by testing protocols with different solutes and distilled water, different incubation times in water bath, osmolarities, dilution rates and with or without formol-saline fixation. In experiment 1 the sucrose, fructose, sodium chloride and sodium citrate solutions with 50 and 100 mOsmol/L and the distilled water were tested in the dilutions rate of 1:10 and 1:20, incubated in water bath for 10 and 15 minutes. The types of hypoosmotic reaction were evaluated in phase contrast microscopy. There were no differences (P≥0.05) between the incubation times, osmolarities of solutions, and dilution rates of the semen with distilled water. The fructose solution was more efficient to determine the percentage of reactive sperm (P≤0.05) than the sodium chloride and sodium citrate solutions, but was similar to sucrose and distilled water (P≥0.05). The test with distilled water identified the higher percentage of reactive sperm with strongly coiled tails compared to the tests with hypoosmotic solutions with 50 and 100mOsmol/L (P≤0.05). Experiment 2 tested the semen and distilled water dilutions to perform the HOST (1:5, 1:10, 1:15, 1:20 and 1:25). The 1:15 distilled water HOST was superior when compared to the other protocols (P≤0.05), and was similar to the 1:25 dilution protocol (P≥0.05). The effect of the saline-formol fixation was studied in experiment 3. The semen:distilled water dilution rate used was 1:15. After water bath incubation the sperm were immediately assessed or fixed for later analysis. There were no differences (P≥0.05) in the comparison between the fixed and non fixed protocol. The most efficient HOST to determine the percentage of functional integrity of cryopreserved equine sperm is carried out with 1:15 water distilled dilution (semen:distilled water), incubated for 10 minutes, fixed in saline-formol solution; the immediate reading is not necessar