DIFERENTES SOLUÇÕES DE TESTE HIPOSMÓTICO PARA SÊMEN OVINO

Abstract

O teste hiposmótico (HO) vem sendo usado para avaliar a integridade funcional da membrana espermática de várias espécies de mamíferos domésticos e baseia-se na troca de fluido do meio intracelular com o meio extracelular até que haja um equilíbrio. O objetivo deste estudo foi comparar duas diferentes soluções de teste HO para sêmen ovino fresco e resfriado, utilizando as soluções de frutose-citrato de sódio e sacarose, ambas a 100mOsmol/L. Foram utilizadas 8 amostras de sêmen fresco e 128 amostras de sêmen resfriado. Para cada amostra de sêmen foram retiradas duas alíquotas de 25μL. Uma alíquota foi adicionada em um eppendorf4 contendo 200μL de solução de frutose-citrato de sódio e a outra em eppendorf contendo 200μL de solução de sacarose. As duas amostras foram incubadas em banho-maria a 37o C, por 30 minutos e posteriormente fixadas com 300μL de formol salina tamponada. A leitura das formas reativas foi realizada em microscopia de contraste de fase, com objetiva de imersão de 100X. O percentual de formas reativas, com membrana funcionalmente íntegra, foi avaliado após contagem dos espermatozóides com dobramento e/ou enrolamento de cauda e também após subtração das patologias de cauda encontradas antes do teste. Para o sêmen fresco, as soluções de frutose-citrato de sódio e sacarose foram semelhantes (P>0,05), na identificação do percentual de formas reativas, quando a fórmula de cálculo foi aplicada. Quando a fórmula não foi utilizada, verificou-se que a frutose-citrato de sódio foi superior a sacarose (P<0,05). As amostras de sêmen resfriado, antes e após submeter os dados à fórmula de cálculo reagiram diferentemente, dependendo da solução HO utilizada, sendo a frutose-citrato de sódio (P<0,05) a melhor solução para a realização deste teste HO em sêmen resfriado de ovino