Este experimento objetivou determinar o melhor protocolo de teste hiposmótico (HO) para avaliar a integridade funcional da membrana plasmática dos espermatozóides eqüinos submetidos à criopreservação. Foram avaliadas três soluções HO (água destilada, frutose 100 mOsmol/L e citrato de sódio 100 mOsmol/L), os tempos de incubação de 0, 15 e 30 minutos dependendo do tipo de solução utilizada e o processo de fixação ou não em formol-salina. Após a descongelação do sêmen foram retiradas alíquotas de sêmen para incubação nas três soluções HO. Decorridos os tempos de incubação (0, 15 e 30 minutos), retirou-se uma alíquota de sêmen para leitura do percentual de espermatozóides reativos ao teste HO e fixou-se, em formolsalina, o restante da mistura sêmen/solução HO para posterior leitura e comparação entre as leituras fixadas versus não fixadas. Não houve diferença (P>0,05) entre os tempos de incubação independente da solução HO utilizada. A água destilada apresentou maior percentagem de espermatozóides reativos ao teste no protocolo que não usou a fixação em formol, entretanto apresentou resultado semelhante às amostras incubadas em frutose e citrato de sódio, no protocolo que utilizou a fixação em formol. Não houve diferença (P>0,05) na comparação, por solução, da leitura fixada versus não fixada. PALAVRAS-CHAVE: Eqüino, sêmen congelado, teste hiposmótic
