Green marketing and the conscious consumers in Portugal

This study aims to understand the green consumer in Portugal by investigating their level of environmental concern and the ecological conscious consumer behaviour shown. Additionally, how they perceive the credibility of ecolabels, the characteristics they find most important in green products and, finally, what are the main obstacles to make green purchases. Furthermore, it was explored if the ecological conscious consumer behaviour in Portugal diverged by means of demographic variables (Gender, age, education, occupation and income level). An online survey was published, and 315 valid responses were gathered and analysed in the statistical program SPSS to make possible answering the research questions and hypothesis proposed for this investigation. The results obtained show that the Portuguese consumers are environmental concerned and show high ecological conscious consumer behaviour. It was concluded that women are more prone to show green behaviour than man, however, there were not found significant differences of ecological conscious consumer behaviour relatively to the other demographic variables in question. Also, the results show ecolabels to be considered credible through the eyes of green consumers in Portugal. Furthermore, environmental concern was found to have a positive impact on green behaviour, as well as the perceived credibility of ecolabels. In contrast, green barriers have a negative impact on green behaviour. Additionally, the most important characteristics of green products are identified in this paper, along with the main obstacles of green purchase.Este estudo pretende compreender o consumidor verde português, investigando o seu nível de preocupação ambiental, o comportamento ecológico consciente do consumidor. Adicionalmente, como este entende a credibilidade dos rótulos ecológicos, as características que considera mais importantes nos produtos verdes e, finalmente, quais são os principais obstáculos para fazer compras verdes. Além disso, foi explorado se o comportamento ecológico consciente do consumidor em Portugal divergia por meio de variáveis demográficas (sexo, idade, educação, ocupação e nível de rendimento mensal líquido). Foi publicado um inquérito online, tendo sido recolhidas 315 respostas válidas e posteriormente analisadas no programa estatístico SPSS, de forma a possibilitar a resposta às questões e hipóteses propostas para esta investigação. Os resultados obtidos mostram que os consumidores portugueses estão preocupados com o ambiente e apresentam um comportamento de consumo consciente do ponto de vista ecológico. Concluiu-se que as mulheres são mais propensas a mostrar comportamento ecológico do que os homens, no entanto, não foram encontradas diferenças significativas de comportamento ecológico consciente do consumidor em relação às restantes variáveis demográficas em questão. Os resultados mostram que os rótulos ecológicos são considerados credíveis aos olhos dos consumidores verdes em Portugal. Além disso, verificou-se que as preocupações ambientais têm um impacto positivo no comportamento ecológico, bem como na credibilidade percebida dos rótulos ecológicos. Em contraste, as barreiras ecológicas têm um impacto negativo no comportamento ecológico. Adicionalmente, as características mais importantes dos produtos verdes são identificadas neste documento, juntamente com os principais obstáculos à compra verde

The role of metabolic and behavioral compensations in weight management

The lack of efficacy of weight loss (WL) interventions can be mostly attributed to low adherence to dietary/physical activity (PA) recommendations. However, metabolic and behavioral compensations are expected to occur as a response to WL. These include decreases in energy expenditure (EE) components, reductions in PA and increases in energy intake (EI). Adaptive thermogenesis (AT), defined as a higher-than-expected decrease in any EE component that is not explained by changes in body composition stores (fat mass and fat-free mass) has been considered a possible barrier to WL and its maintenance. Regardless, evidence is still scarce about the presence and the assessment of these compensatory responses after a moderate WL, as well as some methodological limitations when assessing AT. Therefore, this dissertation presents 6 research papers that results from the Champ4life project, a randomized clinical trial involving a lifestyle intervention aimed to promote a moderate WL targeting former elite athletes who developed overweight/obesity and became inactive. The first study consisted in a systematic review regarding the existence of AT in resting EE (REE), sleeping EE (SEE) and total daily EE as a response to an WL intervention. The results pointed out for some fragilities that needed to be studied further, such as the large variability between and within studies and the lack of consistency among methodologies to predict REE and/or to assess AT. Therefore, the second investigation aimed to compare 13 different methodologies varying in how REE was predicted and/or how AT was calculated. The findings of this study emphasized the substantial impact of the used methodological approach, as AT values varied among participants. The third manuscript aimed to understand if AT occurs after a moderate WL (<10%) and if it is still persists after a period of weight stabilization (8 months). AT occurred after 4 months of WL and remained significant after a successful WL maintenance. Study 4 aimed to understand if AT occurs in other EE components, namely in non-exercise activity thermogenesis (NEAT). Study 5 comprised behavioral compensations, aimed to evaluate the interindividual variability in EI and EE after WL and to understand how changes in EI are associated with changes in PA duration and PAEE. For studies 4 and 5, neither an energy conservation in NEAT nor the existence of behavioral compensations after WL were found. Still, the large variability among participants were considered in both studies, emphasizing the need of analyzing not only the mean values but also the individual WL responses. The last study aimed to explore the impact of WL on intuitive eating and food reward outcomes. The findings revealed that food reward decreased after a moderate WL, as well as a decrease in willingness to allow themselves to eat whatever food is desired when hungry and an increase in better food choices (in terms of matching one’s physical needs). This dissertation contributes substantially to the available literature considering metabolic and behavioral compensations and the large individual variability observed that may occur as a response to WL, emphasizing the challenges that researchers and practitioners might face in WL management. Understanding these compensator responses is crucial to better implement WL interventions that will lead to a successful WL and maintenance of a reduced weight state.Embora a baixa eficácia das intervenções para perda de peso seja normalmente justificada pela baixa adesão às recomendações dietéticas/atividade física, a existência de compensações metabólicas e comportamentais têm sido sugeridas, incluindo reduções nos componentes do dispêndio energético (DE), reduções na atividade física e o aumento da ingestão energética (IE). A adaptação metabólica (AM), definida como uma diminuição maior do que o esperado em qualquer componente do DE face às alterações da composição corporal (massa gorda e massa isenta de gordura), tem sido considerada uma possível barreira para a perda de peso e a sua manutenção a longo prazo. Porém, juntamente com algumas questões metodológicas relativamente à avaliação da AM, a existência dessas respostas compensatórias após uma perda de peso moderada não é clara. Assim, esta dissertação contém 6 artigos cujos resultados provêm do projeto Champ4life, um ensaio clínico randomizado com uma intervenção do estilo de vida para atletas em fase pós carreira que viviam com excesso de peso/obesidade e que eram considerados inativos, estando o projeto dividido numa fase de perda de peso ativa (4 meses) seguida de uma fase de manutenção do peso perdido (8 meses). O primeiro estudo consistiu numa revisão sistemática relativamente à existência de AM no metabolismo de repouso, DE a dormir e no DE total como resposta a uma intervenção para perda de peso. Os resultados enfatizaram algumas fragilidades que devem ser analisadas com detalhe, como a grande variabilidade entre estudos e entre participantes, tal como a falta de consistência em relação às metodologias utilizadas para predizer o metabolismo de repouso e/ou para calcular a AM. Assim, o segundo estudo teve como objetivo comparar 13 metodologias que diferiam em como o metabolismo de repouso era predito e/ou como a AM era calculada. Os resultados deste estudo enfatizaram o impacto substancial da metodologia escolhida, pois os valores de AM variaram significativamente entre os métodos estudados. O terceiro artigo teve como objetivo perceber se a AM ocorre após uma perda de peso moderada (<10%) e se continua relevante após um período de manutenção de peso. A AM não só ocorreu após 4 meses de perda de peso, como também se manteve significativa após o período de manutenção. O estudo 4 estudou a existência de AM noutros componentes do DE, nomeadamente a AM na atividade física que não é considerada exercício. O 5º artigo estudou a existência de compensações comportamentais, com o objetivo de analisar a variabilidade interindividual na IE e no DE após perda de peso e também em perceber como é que alterações na IE estão associadas com alterações na duração e a energia despendida em atividade física. Apesar de não terem sido encontradas nem uma conservação de energia nesse componente do DE nem compensações comportamentais, a grande variabilidade entre participantes foi considerada nos dois estudos, enfatizando a necessidade de analisar não apenas as médias como também as respostas individuais quando observamos variáveis de perda de peso. O último estudo teve como objetivo explorar o impacto da perda de peso em variáveis de alimentação intuitiva e de recompensa alimentar, observando ainda a relação entre alterações nestes componentes e a composição corporal. Após uma perda moderada de peso, os valores de recompensa alimentar diminuíram, tal como a permissão para comer alimentos desejados quando se está com fome, e ainda um aumento da realização de melhores escolhas alimentares (considerando as necessidades físicas individuais). Esta dissertação contribui substancialmente para a evidência atualmente existente sobre as compensações metabólicas e comportamentais que ocorrem como resposta a uma perda de peso. O entendimento destas respostas compensatórias é importante para implementar intervenções adequadas, que levem a uma perda de peso bemsucedida, bem como a sua manutenção a longo prazo

A catalogue of stress granules´ components: implications for neurodegeneration

Stress granules (SGs) are irregularly shaped foci constituted by a variety of different types of RNAs, proteins, factors involved in translation and signaling molecules. These granules form transiently in response to a variety of stress stimuli, such as viral infections or translation blocking drugs, and facilitate stress response by sequestering mRNAs and proteins and affecting the translation of RNA transcripts. SGs are necessary for stress response, however, abnormalities in SGs functioning and the association of their formation with the aggregation of many pathological proteins, have been linked to pathological changes in several human diseases, such as neurodegenerative diseases, cancer, and aging. The aim of this work was to identify all the proteins described as SGs components in mammalian cells and to build an online open access database with the all information collected. The SGs components were identified through an exhaustive study search (PubMed) and further details about each component were retrieved using public databases. Moreover, a transcriptomic analysis was performed analyzing the gene expression data for each SGs component in different neurodegenerative diseases. We identified 464 proteins as components of mammalian cells SGs, from which 253 were classified as RNA-binding proteins (RBPs). Details about each protein, such as molecular function, link to disease, cell type where they were detected and the stress stimuli used to induce SGs assembly, were also collected and are available in the database. Through a transcriptomic analysis, where “disease vs control” groups were compared and analyzed, a vast majority of SGs proteins were found to be differentially expressed in different neurodegenerative diseases. All the information collected was used to build the Mammalian Stress Granules Proteome (MSGP), available at https://msgp.pt/, an important tool for researchers in this area of growing interest, being the first database to list and provide information about all SGs proteins identified so far.Em condições de stresse, os organismos eucariotas possuem um conjunto de mecanismos para o combater e assim restabelecer a homeostasia celular. Nesta resposta inclui-se a formação dos grânulos de stresse, que são estruturas de formato irregular, sem membrana e formados de forma transiente, que sequestram mRNAs e proteínas, afectando a tradução, e assim facilitando a resposta celular ao stresse. Os grânulos de stresse são constituidos por uma grande variedade de componentes: proteínas, mRNAs e microRNAs, componentes da tradução e moléculas de sinalização. No entanto, o perfil proteíco destes grânulos varia consoante o tipo celular onde se formam e o tipo de stresse celular, como por exemplo, a privação nutricional, infecções virais, radiações UV, entre outros. Para a formação dos grânulos de stresse são necessárias proteínas ligantes a RNA (RNA-binding proteins – RBPs). As RBPs são proteínas envolvidas numa variedade de processos relacionados com RNA, como o splicing alternativo e a biogénese de miRNA, possuindo um papel muito importante na função neuronal. Estas proteínas, para além de fazerem parte da constituição dos grânulos de stresse, são também fundamentais para a sua formação. Tal como já foi referido a formação dos grânulos de stresse é temporária, uma vez que quando o stresse desaparece, estes grânulos são eliminados. Esta eliminação é feita através de autofagia, mais especificamente por macroautofagia, na qual a proteína Valosin-containing protein (VCP) é fundamental, ou por autofagia mediada por chaperonas. Embora por um lado os grânulos de stress sejam essenciais na resposta da célula ao stresse, por outro lado, defeitos na sua formação, dinâmica ou eliminação podem contribuir para a patogénese de diversas doenças humanas, como por exemplo, cancro, e doenças neurodegenerativas. De facto, existem cada vez mais evidências que ligam os grânulos de stresse a doenças neurodegenerativas, nomeadamente as doenças de Alzheimer, Parkinson, Huntigton ou Esclerose Lateral Amiotrófica. Para além disso, várias das proteínas envolvidas na patogénese destas doenças também se encontram presentes nos grânulos de stress, como é o caso da Atx-2, Tau, FUS ou TDP-43. A importante função dos grânulos de stresse a nível celular e a sua implicação em diversas patologias torna-os alvos importantes para o estudos dessas doenças e até como possíveis alvos terapêuticos. O principal objetivo deste trabalho foi identificar todos os componentes proteícos dos grânulos de stresse descritos em células de mamífero, recolher informações sobre os mesmos e catalogar toda a informação recolhida numa base de dados online. Os componentes proteícos dos grânulos de stresse foram identificados através duma pesquisa exaustiva nos estudos disponíveis no PubMed, tendo sido filtradas apenas as proteínas existentes em células de mamífero. Para cada proteína, informações como o nome completo da proteína, gene ID, UniProt ID, se é ou não uma RBP, função molecular ou se está envolvida nalguma doença, foram obtidas através de bases de dados públicas. Para além disso, também foram recolhidas informações acerca do tipo celular em que as proteínas foram estudadas e tipo de estímulo utilizado para induzir o stress. Uma análise transcriptómica foi efetuada, utilizando dados de estudos que analisaram a expressão génica em indíviduos com as doenças de Alzheimer, Parkinson, Huntington, Esclerose Lateral Amiotrófica e também em indíviduos não-doentes (controlos). Nesta análise os grupos de doença versus controlo foram comparados, de forma a investigar a expressão diferencial dos componentes dos grânulos de stress. Foram catalogadas 464 proteínas, das quais 253 foram identificadas como RBPs e 111 já tinham sido previamente ligadas a doenças. Para além disso, 32 proteínas foram identificadas como estando relacionadas com a autofagia. Do total das 464 proteínas identificadas, 225 têm como função molecular a ligação, 308 encontram-se envolvidas em processos celulares e 131 pertencem à classe proteíca de ligação a ácidos nucleícos. Os dados da análise da expressão génica entre os grupos “doença” e “controlo”, demonstraram que a grande maioria dos componentes dos grânulos de stress encontram-se com a expressão alterada nas doenças neurodegenerativas estudadas. Por exemplo, verificou-se que na doença de Alzheimer, 187 componentes tinham a sua expressão significativamente aumentada, enquanto que 193 tinham a sua expressão diminuída. O perfil proteíco dos grânulos de stresse varia consoante o tipo celular ou tipo de estímulo de stress induzido. Assim, foi possível observar que a maioria das proteínas, mais especificamente 327, foram identificadas nas células U-2OS, enquanto 427 foram identificadas em estudos que utilizaram o arsenito de sódio como estímulo Toda a informação recolhida foi catalogada na base de dados Mammalian Stress Granules Proteome (MSGP), disponível para todos os investigadores em https://msgp.pt/. A base de dados MSGP possui a listagem de todos os componentes proteícos dos grânulos de streses assim como informações dos mesmos e dados de expressão génica para cada uma dos componentes identificados. O utilizador pode pesquisar por uma proteína específica utilizando a “search bar” ou pode filtrar a pesquisa utilizando as diferentes categorias e tags disponíveis. A MSGP é a primeira base de dados que reune todos os componentes dos grânulos descritos, constituindo uma importante ferramenta para os investigadores desta área, tendo para além disso, a possibilidade de continuar em crescimento, através da adição de informações não só acerca dos componentes já catalogados, como de outros componentes dos grânulos de stress, como por exemplo microRNAs

Valuation of a Portuguese company: Novabase, SGPS

Novabase is the Portuguese leader in the Information Technology industry and it is present in more than 35 countries. This company operates in two business segments – Business Solutions and Venture Capital – and is listed on the Euronext Lisbon stock exchange. The aim of this thesis is to determine the value of Novabase’ shares. The valuation was based on three valuation models: Discounted Cash Flow (DCF), through the Free Cash Flow to the Firm; Economic Value Added (EVA); and relative valuation (multiples and comparables). To better frame this valuation was made an analysis of the company and its main competitors, an analysis of the macroeconomic environment and an analysis of the Novabase’s main industry. The valuation using the DCF model resulted in a share value of 1,87 euros, while through the EVA model was obtained a value per share of 2,10 euros. The relative valuation presented a lower value for the Novabase’ shares, resulting in an average share price of 1,83 euros. A sensitivity analysis for the DCF and EVA was made to assess the impact of the main assumptions, such as perpetual growth rate and discount rate used, in the share values obtained. Lastly, the results of the valuation were compared to the market values at the end of 2017 and at the end of August of 2018 (3,05 euros and 2,72 euros, respectively); and to the valuation recommendations and values given by BPI and IM Valores SV (2,75 euros and 2,50 euros, respectively). The final recommendation given is Sell.Novabase é a empresa portuguesa líder em Tecnologias de Informação e está presente em mais de 35 países. Esta empresa opera em dois segmentos de negócio – Soluções Empresariais e Capital de Risco – e está cotada na bolsa de valores Euronext Lisboa. O objetivo desta tese é determinar o valor das ações da Novabase. A avaliação foi baseada em três modelos de avaliação: Discounted Cash Flow (DCF), através do Free Cash Flow to the Firm; Economic Value Added (EVA); e avaliação relativa (múltiplos e comparáveis). Para melhor enquadrar esta avaliação foi feita uma análise da empresa e seus principais concorrentes, uma análise do ambiente macroeconómico e uma análise da indústria principal da Novabase. A avaliação pelo modelo DCF resultou num valor por ação de 1,87 euros, enquanto através do modelo EVA foi obtido um valor por ação de 2,10 euros. A avaliação relativa apresentou um valor mais baixo para as ações da Novabase, resultando num preço das ações médio de 1,83 euros. A análise de sensibilidade para o DCF e EVA foi feita para avaliar o impacto dos principais pressupostos, como taxa de crescimento perpétuo e taxa de desconto, nos valores das ações obtido. Por fim, os resultados da avaliação foram comparados com os valores de mercado no final de 2017 e no final de agosto de 2018 (3,05 euros e 2,72 euros, respetivamente); e com as recomendações e valores da avaliação dados pelo BPI e IM Valores SV (2,75 euros e 2,50 euros, respetivamente). A recomendação final é de Venda

Novel affinity chromatography processes for the purification of plasmid DNA using small aromatic molecules

Molecular therapies are gaining importance as an effective therapeutic approach for various types of diseases. The most efficient vectors used to introduce the therapeutic genes are of viral origin however, non-viral vectors based on pDNA are gaining popularity due to their superior safety and easy of production. These factors have increased the demand for high quantities of pharmaceutical grade plasmid DNA (pDNA). Therefore, the research for more efficient pDNA purification protocols has also increased. Moreover, the final pDNA product must meet stringent quality criteria established by the regulatory agencies. Liquid chromatography is the method of choice for the purification of pDNA, since it is simple, robust, versatile and high reproducible. The most important features of a chromatographic procedure are the use of suitable stationary phases and ligands. As conventional purification protocols are being replaced by more sophisticated and selective procedures, the focus changes towards designing and selecting ligands of high affinity and specificity. In fact, the chemical composition of the chromatographic supports determines the interactions established with the target molecules, allowing their preferential retention over the undesirable ones. With these facts in mind, the aim of this work was to develop new chromatographic methods for the purification of pharmaceutical grade pDNA, with the purpose of improving the overall procedures to more effective, simple, economic and environmental-friendly ones. The minor groove binder berenil and the intercalator 3,8-diamino-6-phenylphenanthridine (DAPP) where chosen to be used as ligands in pDNA chromatographic purification studies. They were immobilized to an epoxy-activated Sepharose matrix using a relatively mild curing method, without a catalyst and with quite small ligand:Sepharose weight ratios. Berenil binds pDNA preferentially through hydrophobic interactions but other types of interaction contributions cannot be neglected. It was shown to be quite effective at separating and purifying pDNA from clarified and non-clarified cell lysates, using three different approaches, although isoform resolution was not obtained in either case. Using mild amounts of ammonium sulphate in the eluent, berenil-Sepharose support was able to purify distinct pDNA of two different sizes from clarified cell lysates. Moreover, the ability was continual when the clarification process was replaced by a second chromatographic run. In all cases plasmid solutions were in accordance to the specifications of a pharmaceutical product, however the yields were quite different: two consecutive chromatographic runs lead to lower recoveries (33%) and smaller pDNA molecules have higher recoveries using one run through the column (85% vs 45%). A negative chromatography approach was also performed with berenil-Sepharose, showing some advantages in terms of salt usage as well as procedure time. In this case the recovery yield was quite good (87%) and although pDNA solutions had a comparable purity to that obtained with the other approaches, the gDNA reduction was not so effective. DAPP is slightly A-T specific and binds DNA through non-covalent, reversible stacking interactions of the condensed aromatic moiety into two successive base pairs, while the phenyl residue gets inserted into the minor groove. In addition, protonated DAPP molecules bind to DNA much strongly due to the generation of strong electrostatic interactions. Plasmid DNA binding to DAPP-Sepharose varies with pH and is affected by the presence of salt in the eluent. In fact, total retention of clarified lysate components was only possible with a pH below DAPP's free state pKa (5.8) and the presence of salt destabilizes that same retention. So, the elution of bound species was simply performed by adding small amounts of sodium chloride to the buffers. These features were successfully applied for purification of sc pDNA with two distinct sizes that were obtained according to the regulatory agencies specifications. Once more, the recovery yield of the smaller pDNA molecule was higher than the one obtained for the largest one (94% vs 65%). In conclusion, DAPP-Sepharose showed exceptional characteristics to be used as an affinity support for the purification of pharmaceutical grade sc pDNA. In comparison with berenil- Sepharose, it uses much smaller amounts of salt, with less economic and environmental impact, while improving the quality and yield of the obtained plasmid fractions. Moreover, it is able to separate sc pDNA from linear and oc isoforms even in complex lysates. Moreover, combining DAPP-Sepharose chromatography with other optimized production, extraction and clarification procedures, can offer a number of advantages for pharmaceutical pDNA purification. Also, since the most significant disadvantage of this DAPP-Sepharose support is the relatively low capacity for pDNA, which in turn is strongly related to the solid matrix used, other more stable stationary phases with low pressure drops and interconnected macropores, that allow a high mass transfer of solutes, are quite fascinating alternatives.Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT

Towards automation in anaesthesia: a review

Simpósio Internacional MeMeA, realizado em 2014.Surgeries represent a risk for patients and a big cost for the hospital. Anaesthesia represents a complex part of surgery also carries risks for patients. The most known are awareness (with deep psychological consequences); increased risk of morbidity and mortality; adverse reactions and long post-op recovery. The complexity of anaesthesia management can be reduced by studying the patients' responses and developing indicators of the patient state. To assess the level of depth of anaesthesia, the anaesthetist needs to be aware of the patient physiological responses to the drugs and to surgical stimuli. A system that could advise on the patient state considering all clinical signs being measured, the patient individual response and the amount of drugs, will have a big impact on patient overall safety and future health, post-op recovery and hospital resources. This paper does a review of different systems and methods applied to several aspects of the anaesthesia field. All with the goal of working towards automation in this very complex area, that involves high risks for patients. This paper covers advisor systems; signal processing; new monitors and devices; mathematical modelling; and control algorithms; all focused on practical clinical implementation. The objective is to have an overview of the work done so far and the steps taken towards automation in anaesthesia.ISPA - System Integration and Process Automation Unit - Part of the LAETA (Associated Laboratory of Energy, Transports and Aeronautics) a I&D Unit of the Foundation for Science and Technology (FCT), Portugal. FCT support under project PEst-OE/EME/LA0022/2013.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Molecular physiology and evolution of a new developmental stability pathway

Tese de mestrado, Biologia (Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2015Em Drosophila melanogaster, após a eclosão do ovo, a larva desenvolve-se ao longo de três estádios larvares, que são seguidos pela formação da pupa, terminando assim a fase de crescimento. O tempo das várias transições do desenvolvimento do insecto é influenciado por factores ambientais e é regulado pela hormona esteroide, ecdisona. Os padrões de crescimento e morfogénese a que o animal é sujeito durante o período de desenvolvimento são determinados e, portanto, previsíveis. No entanto, para que seja produzido um organismo com dimensões corporais apropriadas e em sintonia com o ambiente, estes processos podem ser afectados por condições extrínsecas (como a nutrição) ou por perturbações intrínsecas que ocorram, por exemplo, durante a regeneração de um órgão e/ou tecido. Esta capacidade que um organismo tem de lidar com estas perturbações, refletindo proporções corporais corretas é designada por estabilidade de desenvolvimento. Esta é uma propriedade muito relevante para o desenvolvimento, pois a alteração das dimensões corporais e/ou de órgãos de um animal pode afectar a sua fitness e, consequentemente, o seu output reprodutivo. Na larva da grande maioria dos insectos holometabólicos (insectos que sofrem uma metamorfose completa entre os estádios de ovo, larva, pupa e adulto), os discos imaginais representam os percursores da maioria dos apêndices do indivíduo adulto, tais como as asas ou as patas. Os discos imaginais têm a capacidade de se regenerarem durante a fase de crescimento larvar, mesmo após dano químico (por agente alquilante, por exemplo) ou físico (por irradiação raio-x). No entanto, quando estas estruturas são danificadas, a transição de larva para pupa é atrasada o tempo suficiente para que as células ajustem as suas taxas de proliferação, permitindo a reparação dos danos. Sendo que os discos imaginais estão remotamente localizados em relação ao cérebro, onde são produzidas as hormonas responsáveis pelo controlo do tempo de desenvolvimento, o mecanismo através do qual as deficiências de crescimento influenciam o tempo de metamorfose tem que ser dependente de um ou mais sinais difusíveis. Ao sentirem que não atingiram o tamanho apropriado, os discos comunicam o seu estado anormal ao resto do corpo, através da secreção de um sinal que impede a pupariação até que seja atingida a dimensão ideal. Recentemente, dois grupos de investigação independentes descobriram o principal elemento envolvido neste mecanismo de regulação: Dilp8. Dilp8 é um péptido pertencente à superfamília das insulinas/IGFs/relaxinas, que é secretado pelos discos imaginais em situações de crescimento anormal. Todos os péptidos pertencentes a esta família apresentam uma estrutura semelhante àquela das preproinsulinas, consistindo na associação contígua entre um péptido sinal, uma cadeia B, um péptido- C e uma cadeia A. Nas insulinas e relaxinas (mas não nos IGFs), o péptido-C é clivado pela ação de uma convertase, que reconhece sequências de clivagem específicas, dando origem a um péptido maturo ativo. Apesar da importância de Dilp8 na regulação da estabilidade do desenvolvimento já ter sido demonstrada, até à data continua por determinar qual o mecanismo de ação molecular que permite a coordenação do crescimento anormal e do tempo desenvolvimento. Este projeto pretendia então explorar os mecanismos moleculares de ação e a evolução de Dilp8. Para tal, foram utilizadas moscas transgénicas e o sistema de sobrexpressão UAS-Gal4. Inicialmente, foi desenvolvido um estudo de evolução molecular que revelou a existência de homólogos de Dilp8 em várias espécies de dípteros, pertencentes ao ramo Brachycera. O alinhamento das sequências proteicas destes homólogos permitiu a identificação de resíduos de aminoácidos absolutamente conservados entre as diferentes espécies. Para tentar perceber quais destes resíduos estavam intimamente associados à função desempenhada por Dilp8 no controlo do tempo de desenvolvimento, foram criadas linhas de moscas que continham uma versão alterada de Dilp8. Nestas linhas, cada um destes aminoácidos foi, individualmente, substituído por outro ou completamente eliminado. O tempo do início da metamorfose foi analisado nestas linhas de moscas sobrexpressando de forma ubíqua cada um dos péptidos alterados e verificou-se que, de facto, a alteração de alguns destes aminoácidos levou à eliminação do atraso no desenvolvimento, provocado pela sobrexpressão da versão wild-type de Dilp8. Os dados obtidos parecem indicar que Dilp8 precisa de ser processado para que o péptido maturo promova a estabilidade do desenvolvimento. No entanto, embora a produção da versão não processada do péptido tenha sido confirmada em todas as linhas transgénicas em estudo, em nenhum dos casos foi possível a detecção do péptido maturo por Western Blot.. Tal dificultou a confirmação da hipótese sugerida pelos resultados obtidos. Para obter mais conhecimento acerca do papel do péptido-C na regulação do tempo de desenvolvimento, este foi sobrexpresso sozinho (sem qualquer outro elemento de Dilp8) e verificou-se que este não apresentou a capacidade de atrasar a metamorfose. Em D. melanogaster, a sobrexpressão de Dilp8 tem outro efeito para além do atraso no tempo de desenvolvimento: as moscas tornam-se mais pesadas sem, no entanto, aumentarem as suas dimensões corporais. De modo a explorar o envolvimento do péptido-C neste fenótipo, as pupas de diferentes genótipos de sobrexpressão de péptidos alterados foram pesadas. Não foram obtidas diferenças de peso diretamente relacionadas com a alteração do péptido-C, indicando que esta região de Dilp8, embora possa estar envolvida noutra funções biológicas, não é diretamente responsável pelo aumento de peso verificado. O estudo das sequências homólogas de Dilp8 permitiu ainda explorar a história evolutiva deste péptido. Para tal, foi utilizada uma espécie mais ancestral, Hermetia illucens, para a qual um RNAseq revelou a existência de, pelo menos, duas sequências homólogas de Dilp8. Para verificar se esta versão ancestral do péptido (Hilp8) mantém a capacidade de induzir atrasos no desenvolvimento quando sobrexpresso em D. melanogaster, um dos homólogos de Dilp8 foi clonado nesta espécie. Os resultados desta abordagem revelaram que Hilp8 não tem a capacidade de regular o tempo de desenvolvimento de Drosophila. Porém, tal como discutido ao longo do trabalho, tal não indica diretamente que a forma ancestral de Dilp8 apresentava uma função diferente em H. Illucens. Este trabalho permitiu ainda confirmar a existência de, pelo menos, duas regiões do genoma diferentes responsáveis pela codificação de duas sequências homólogas de Dilp8. A análise estrutural destas duas sequências permitiu, ainda, a distinção de, pelo menos, três exões para ambas, tal como é característico da maioria dos Ilps. De modo a entender se Hilp8 apresenta outro tipo de homologia funcional em relação a Dilp8, uma nova análise de RNAseq foi desenvolvida, com a utilização de larvas de H. Illucens sujeitas à injeção do agente alquilante EMS. Em Drosophila, a exposição a esta droga leva à ativação da via de Dilp8 e, consequentemente, a atrasos na pupariação. Em H. Illucens não foi possível a determinação de um aumento da transcrição de hilp8, após a exposição a EMS. Porém, foi detectada uma elevada variação de expressão entre amostras biológicas. Esta observação dificulta a determinação do envolvimento de Hilp8 na resposta ao dano. Para estudar a homologia funcional de Dilp8 e das duas formas de Hilp8, a expressão dos genes no tecido reprodutivo de fêmeas foi analisada H. Illucens adultas e, contrariamente ao que é verificado em Drosophila, estes não se encontram enriquecidos em ovários. Este resultado pode indicar um funcionamento divergente dos dois homólogos. Em suma, este estudo, com a utilização de abordagens fisiológicas, moleculares e de evo-devo permitiu aumentar o nosso conhecimento acerca do funcionamento e da história evolutiva de Dilp8.In insects, development follows predictable growth and morphogenesis patterns that involve both tight control and flexibility in the regulation of cell size and number, in order to produce an animal with proper body and organ size. However, as environmental and intrinsic perturbations can affect these processes, organisms have evolved the capability to buffer these perturbations through developmental stability processes. Abnormally growing imaginal discs of Drosophila delay pupariation by secreting Dilp8, an insulin/IGF/relaxin-like peptide. Dilp8 promotes developmental stability by coordinating the growth of the discs with the onset of metamorphosis. Although the importance of Dilp8 in the regulation of metamorphosis has already been demonstrated, its structure, sequence conservation and posttranslational processing have never been studied. My objective was to learn more about the molecular mechanisms of action and evolution of Dilp8. By using physiological and molecular genetics approaches, it was possible to determine conserved amino acids crucial for Dilp8 function and to propose a requirement for Dilp8 C-peptide processing for the coordination of tissue damage and developmental timing. These studies also shed light into the evolutionary history of Dilp8. An Evo-Devo approach was used to study the expression and function of Dilp8 homologues from a brachyceran fly that shared a common ancestor with Drosophila about 180 million years ago, Hermetia illucens. RNA-Seq analyses suggest H. illucens encodes at least two Dilp8 homologues Hilp8a and Hilp8b, none of which responds to ethylmethanesulfonate-induced tissue damage. Furthermore, ubiquitous expression of Hilp8a in Drosophila larvae did not delay development when expressed in Drosophila. These results suggest that the involvement of Dilp8 in the developmental stability pathway in Drosophila might have evolved after the last common ancestor of all Brachycera lived. However, more studies need to be developed for this to be confirmed