Detección de microRNAs extracelulares y su potencial como biomarcadores moleculares

RESUMEN Los microRNAs (miRNAs) son moléculas de RNA de 18 a 24 nucleótidos de longitud involucrados en la regulación de la expresión génica a nivel postranscripcional en la célula. En este trabajo analizamos la expresión de miRNAs en muestras de tejido y suero de pacientes con cáncer mamario, y este perfil permite distinguir pacientes con cáncer de mama y mujeres sanas con alta sensibilidad, especificidad y eficiencia. La combinación de dos miRNAs para tejido y tres para suero, usados en conjunto como un solo grupo, eleva significativamente la eficiencia de la prueba, y demuestra que los miRNAs tienen gran potencial como nuevos biomarcadores no invasivos en cáncer de mama. Adicionalmente, se realizó la búsqueda de miRNAs en el protozoario Entamoeba histolytica, por secuenciación profunda, lo que permitió realizar la primera descripción de miRNAs en este parásito. Se identificaron 199 miRNAs exclusivos para este parásito, que servirán de base para el estudio de la regulación génica en E. histolytica y el establecimiento de nuevos biomarcadores para la amibiasis. ABSTRACT MicroRNAs (miRNAs) are 18 to 24 nucleotide-long RNA molecules responsible for the regulation of gene expression at the post-transcriptional level in the cell. In this work, we analyzed the expression of miRNAs in tissue samples and serum of patients with breast cancer and we found that miRNA expression patterns distinguish patients with breast cancer from healthy women with high sensitivity, specificity, and efficiency. The combination of 2 and 3 miRNAs used as a group in tissue and serum respectively, significantly increases the efficiency of the test and shows that miRNAs have potential as novel noninvasive biomarkers in breast cancer detection. Additionally, miRNAs were detected by deep sequence in the protozoan parasite Entamoeba histolytica, which allowed the first description of miRNAs in this parasite. We identified 199 new miRNAs in E. histolytica, which are the base for the study of gene regulation and the establishment of new biomarkers for amoebiasis

ACCIÓN INHIBITORIA DE PROBIÓTICOS SOBRE EL CRECIMIENTO AXÉNICO IN VITRO DEEntamoeba histolytica

Entamoeba histolytica es el protozoario parásito cosmopolita causante de la amibiasis y sus múltiples manifestaciones clínicas afectando con mayor frecuencia a los países en vías de desarrollo en donde existe hacinamiento y condiciones sanitarias deficientes e inadecuadas; en México representa un problema de saludpública por su frecuencia, morbilidad, mortalidad y fácil dispersión; para el control de la amibiasis y sus manifestaciones clínicas, se administra metronidazol como droga de elección, sin embargo este fármaco produce efectos secundarios indeseables. Reportes recientes indican que cultivos in vitro de E. histolytica han desarrollado resistencia a este fármaco. En este trabajo evaluamos el efecto de 1, 10, 20 y 100 mg/mL de liofilizados de medios condicionados con probióticos (Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei y Lactococcus lactis) sobre el crecimiento axénico in vitro de E. histolytica. Las concentraciones ensayadas mostraron diferencia estadística significativa (ANOVA p=0.05) como inhibidores del crecimiento in vitro de Entamoeba histolytica HM1-IMSS. Estos resultados abren la posibilidad de contar con una alternativa nutricional para la prevención y tratamiento de la amibiasis sin presentar efectos secundarios indeseables.Palabras claves: Entamoeba histolytica, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactococcus lactis, cultivo axénico, probióticos.Entamoeba histolytica, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactococcus lactis, axenic culture, probiotics

Efecto del Albendazol en ratas Long Evans gestantes e infectadas con T. spiralis

El Albendazol es el antihelmíntico de primera elección para varias parasitosis, entre ellas la Trichinellosis, sin embargo, el tiempo de tratamiento debe ser por periodos prolongados.El objetivo del trabajo fue determinar el efecto de este medicamento sobre ratas Long Evans gestantes e infectadas con T. spiralis. Se sincronizaron las ratas para gestarlas e infectarlas, el tratamiento fue de uno a catorce días, se utilizó la técnica de Hematoxilina-Eosina para evaluar el efecto sobre el hígado y el aparato reproductor, se determino el número de crías por tratamiento y las características de las crías obtenidas, los resultados indican una degeneración de los tejidos conforme aumenta el tiempo de tratamiento además se observa que el numero de crías es afectado directamente al aumentar el tiempo de tratamiento.The Albendazol is the antihelmintic of first election for several parasitism, among them trichinellosis, nevertheless, the time of treatment must be per prolonged periods. The aim of this work was to determine the effect of this medicine on Long rats Evans pregnant and infected with T. spiralis. We synchronize the rats to develop them and to infect them, the treatment went of one to fourteen days, used the Hematoxilina-Eosin technique to verify the effect on the liver and the reproductive apparatus and verified the number of young for each treatment and if correspondence between the obtained characteristics of the reproductive apparatus and young existed, the results indicate a degeneration of weaves as increases the timeof treatment in addition is observed that I number of young is directly affected when increasing the treatment

Detección de los cambios Fenotípicos en productos de Ratas Long Evans infectadas con Trichinella spiralis y tratadas con Albendazol

Trichinella spiralis es uno de los agentes causantes de la Trichinellosis, es una zoonosis de distribución mundial, afecta a gran número de mamíferos así como al humano. En México la causa principal de infección se asocia con el consumo de carne de cerdo infectada con T. spiralis. En este trabajo se detectaron los cambios fenotípicos en productos de ratas Long Evans infectas con T. spiralis y tratadas con Albendazol. Utilizamos ratas cepa Long Evans en edad reproductiva. Divididas en grupos, incluidos controles y con tratamiento de uno a catorce días de tratamiento, para sincronizar la gestación en las ratas se realizaron frotis vaginales. Para la detección del parásito se utilizaron técnicas directas de compresión en placa y digestión artificial y la técnica indirecta de MIDD, para los cambios fenotípicos de crías obtenidas se realizo análisis detallado con microscopio estereoscópico.Trichinella spiralis is one of the causative agents of the Trichinellosis, is a zoonosis of world-wide distribution, affects to big number of mammals like this as to the human.In Mexico the main cause of infection associate with the consumption of pig infected meat with T. spiralis. In this work detected the phenotypical changes in long Evans rats products infected with Trichinells spiralis and threated with albendazol medication. Use rats cepa long evans ina reproductive age. Divided in groups, included controls and with treatment varying of one to fourteen days of treatment, to synchronize the management in the rats realized vaginal.smears For the detection of the parasites used direct techniques of understanding in plate and artificial digestion and the indirect technician of MIID, for the phenotypical changes of baby rats obtained realized a detailed analysis with stereoscopic microscope

Inhibición del crecimiento axénico in vitro de Entamoeba histolytica por acción de probióticos

Para el control de la amibiasis y sus múltiples manifestaciones clínicas, la droga de elección es el metronidazol; sin embargo, esta droga ocasiona diversos efectos secundarios indeseables en los pacientes, y recientemente se ha reportado resistencia de algunas cepas de E. histolytica al metronidazol. En este trabajo se reporta la inhibición del crecimiento de trofozoítos de E. histolytica por acción de los liofilizados de medios condicionados con Lactococcus lactis, Lactobacillus casei y Lactobacillus acidophilus, probióticos que pueden considerase como alternativa de prevención o tratamiento contra la amibiasis. Metronidazole is currently the best drug used in the control of the clinical manifestations of amebiasis. This drug however comes with secondary effects. There have been recent reports of E. histolytica resistance to metronidazole. In this work we report the growth inhibition of E. histolytica trophozoites through the lyophilized conditioned with Lactobacillus acidophilus, Lactococcus lactis, and Lactobacillus casei media, which can be considered as an alternative of treatment or prevention of amebiasis

Identification and characterization of microRNAs from Entamoeba histolytica HM1-IMSS.

BACKGROUND: Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis, a disease that is a major source of morbidity and mortality in the developing world. MicroRNAs (miRNAs) are a large group of non-coding RNAs that play important roles in regulating gene expression and protein translation in animals. Genome-wide identification of miRNAs is a critical step to facilitating our understanding of genome organization, genome biology, evolution, and post-transcriptional regulation. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: We sequenced a small RNA library prepared from a culture of trophozoites of Entamoeba histolytica Strain HM1-IMSS using a deep DNA sequencing approach. Deep sequencing yielded 16 million high-quality short sequence reads containing a total of 5 million non-redundant sequence reads. Based on a bioinformatics pipeline, we found that only 0.5% of these non-redundant small RNA reads were a perfect match with the drafted E. histolytica genome. We did not find miRNA homologs in plant or animal miRNAs. We discovered 199 new potential Entamoeba histolytica miRNAs. The expression and sequence of these Ehi-miRNAs were further validated through microarray by µParaflo Microfluidic Biochip Technology. Ten potential miRNAs were additionally confirmed by real time RT-PCR analysis. Prediction of target genes matched 32 known genes and 34 hypothetical genes. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: These results show that there is a number of regulatory miRNAs in Entamoeba histolytica. The collection of miRNAs in this parasite could be used as a new platform to study genomic structure, gene regulation and networks, development, and host-parasite interactions

Length distribution of mappable reads.

<p>Most of the reads that are likely to be miRNAs are of 25 to 26 nucleotides in size accounting for 40% of the total mappable reads.</p

Correlation of cluster nt average vs microarray.

<p>The correlation of 0.532 suggesting agreement between expression estimations from the microarray and deep sequencing.</p

Pie plot of data filtering and database mapping.

<p>Distribution of reads obtained by deep Sequencing of trophozoites from Entamoeba histolytica.</p