Caracterizacion estructural de la proteina alcohol acil transferasa asociada a la biosintesis de compuestos volatiles en Vasconcellea pubescens

89 p.El aroma de los frutos es un importante atributo de calidad que influye en la aceptación del consumidor, es un carácter complejo, determinado por un conjunto de compuestos volátiles de bajo peso molecular. En Vasconcellea pubescens (papaya cultivada en Chile) el aroma del frutos es atribuido principalmente a ésteres de bajo peso molecular, los cuales son producidos mediante reacciones de esterificación entre alcoholes y acil CoAs catalizadas por la enzima Alcohol Acil Transferasa (VpAAT1). Con el objeto de aumentar nuestro entendimiento acerca de la producción de aroma durante el proceso de maduración del fruto V. pubescens, se realizó un estudio de los mecanismos moleculares de la VpAAT1, mediante la técnica de modelamiento comparativo, construyendo la estructura tridimensional de la enzima la cual fue validada y refinada mediante dinámica molecular. El modelo resultante mostró que la proteína está formada por 15 hojas β, 11 α hélices y 4 hélices denominadas Hélices 310. El sitio activo de la proteína es el segmento HTMSD y se encuentra en un loop entre la hoja β 7 y la α hélice 5. La dinámica molecular de 2ns mostró que la H166 y D170 forman parte del sito activo, orientando sus cadenas laterales hacia un canal de solvente presente en el centro de la enzima, permitiendo una interacción directa entre estos residuos con acil-CoA y alcohol. Por docking molecular se exploraron las diversas posibilidades de interacción entre la proteína y sus dos ligandos. Para la interacción con alcoholes y acil CoAs se sugiere la conformación más estable del complejo formado por estas tres moléculas de forma de reproducir el posible mecanismo catalítico de la enzima. Al mutar la H166 por Alanina, se determinó la importancia del residuo de Histidina dentro de la actividad catalítica de la enzima, lo cual reflejó diferencias importantes en los valores energéticos de la enzima silvestre versus la mutante, siendo más estable la proteína silvestre. De esta manera, el modelo sugiere el mecanismo de acción de la enzima VpAA

Mutagénesis sitio dirigida de un residuo conservado de la enzima alcohol acil transferasa (VpAAT1) y el rol que cumple en la biosíntesis de esteres volátiles

63 p.La papaya de montaña (Vasconcellea pubescens) posee un aroma muy característico, compuesto principalmente por ésteres. La reacción de esterificación es catalizada por la enzima alcohol aciltransferasa (VpAAT1) la cual es miembro de la familia BAHD, que transfieren un acil-CoA a un alcohol. Para obtener una perspectiva sobre el mecanismo de acción de VpAAT1, se utilizó la metodología de modelamiento comparativo para construir la estructura de la enzima. La estructura de la enzima VpAAT1 mostró dos dominios conectados por un loop, con un canal de solvente en el centro de la estructura, los dos residuos H166 y D170 que se describen como importantes para la acción catalítica, presentan sus cadenas laterales hacia la cavidad central del canal, permitiendo su interacción con los sustratos. Para evaluar si esto es realmente así, se realizó primeramente la mutación in silico del residuo de D170E, donde se observaron cambios significativos en la energía de interacción proteína-ligando y la orientación en el canal de solvente de los sustratos, de modo que la energía se torna desfavorables al interactuar los ligandos con la proteína mutante. Así mismo, estudios cinéticos sobre la enzima nativa, mostraron que existe una diferencia en los niveles de afinidad entre los distintos ligandos, tanto alcoholes como el ligando acetil-CoA, siendo este último el más favorable para la enzima, por sobre los alcoholes, esto es posible determinarlo debido a que este sustrato posee una menor KM. A modo de corroborar estos estudios in silico se evaluó de manera in vitro la mutación del residuo D170E. Los resultados de este estudio mostraron una pérdida total de la actividad, observándose una correlación con los datos bioinformáticos descritos previamente, además de confirmar el papel funcional del residuo durante la catálisis de VpAAT1, y la producción de ésteres, los cuales son componentes importantes del aroma en el fruto de papaya de montañ

Caracterización estructural de factores de transcripción del tipo MADS en su unión a ADN involucrado en la respuesta a inclinación de Pinus radiata D. Don

120 P.Pinus radiata D. Don es la conífera de mayor importancia en la producción forestal, sustentando cerca del 80% del abastecimiento industrial de la madera en Chile. El crecimiento normal de los árboles puede verse afectado por estrés abiótico, que provocan la pérdida de verticalidad de estos. La tensión física producida en coníferas, a causa de que el tronco busca reorientar su crecimiento vertical, genera madera de compresión, esta se caracteriza por altos niveles de lignina, menor contenido de celulosa y mayor ángulo de micro-fibra, factores que disminuyen la calidad de los productos obtenidos por la industria forestal.La madera de compresión se produce por cambios en la modulación genética de la zona afectada del tronco. Para comprender este fenómeno es necesario estudiar los genes que provocan dichas modificaciones. Se ha visto que el gen xyloglucano endotransglucosilasa/hidrolasa (XTH), que participa de la expansión y formación de la madera, es sobre-expresado en respuesta a la inclinación en el lado inferior del ápice. Por otro lado, estudios previos han mostrado la activación del factor de transcripción del tipo MADS (MCM1, AG, DEFA y SRF) implicado en procesos de desarrollo y biosíntesis de la pared secundaria a tiempos tempranos de la respuesta a inclinación. A su vez, el análisis de la región promotora del gen XTH, mostró que contiene secuencias de respuesta a factores MADS. Por este motivo, se quiso establecer si el factor de transcripción de tipo MADS podría tener alguna relación en la regulación del gen XTH.En esta tesis se estudió con dos factores de transcripción de tipo MADS: denominados PrMADBJ y PrMADBT, cuyos modelos tridimensionales fueron generados utilizando como templado la estructura PDB: 3P57, los monómeros se caracterizaron por presentar una zona coil, 2 alfa hélices y dos beta plegadas anti paralelas. Adicionalmente, se emplearon técnicas de acoplamiento molecular, con las que se pudo determinar que estos factores de transcripción MADS se unen a elementos cis-regulatorios del ADN como dímeros, a través de una zona positivamente cargada de su estructura, las técnicas de acoplamiento y dinámica molecular mostraron que la interacción proteína-ADN era favorable, y que la secuencia denominada CARG4 posee una mejor interacción con los monómeros y homo-dímeros de los PrMADS. Con esto, se pudo demostrar que los residuos positivamente cargados K23, R26, K30 y K31 situados dentro del dominio MADS de la proteína serían los responsables en la interacción ADN-proteína/ABSTRACT:Pinus radiata D. Don is the most important conifer in forest production, sustaining nearly 80% of the industrial wood supply in Chile. The growth of normal trees can be affected by abiotic stress, causing the loss of their verticality. Physical strain produced in conifers, which is caused by the trunk seeking to reorient its vertical growth, generates compression wood. This wood is characterized by high levels of lignin, less cellulose content and a greater angle of micro-fiber, factors that lower the quality of the products obtained by forest industry. Compression wood is produced by changes in the genetic modulation of the affected area in the trunk. To understand this phenomenon, it is necessary to study the genes that cause such changes. It has been found that the gene xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase (XTH), involved in the expansion and wood formation is overexpressed in response to the inclination in the lower side of the apex. Furthermore, previous studies have shown the activation of the MADS transcription factor (MCM1, AG, DEFA and SRF), which is predominantly involved in developmental processes and secondary wall biosynthesis in the early stages of the tilt response. In turn, the analysis of the promoter region XTH gene sequences shows that it contains sequences response to MADS. Therefore, this study aims to determine whether the MADS transcription factor plays a key role in XTH gene regulation.A three-dimensional model of two MADS transcription factors (MADBJ and MADBT) were generated using as template the structure PDB: 3P57. Docking were used using HADDOCK program, determining that these MADS transcription factors bind cis-regulatory elements. Docking and molecular dynamics showed that the interaction of a dimer protein and DNA was favorable. Moreover, the sequence CARG4 has a better interaction with the monomers and homo-dimers of PrMADS. It was demonstrated that the positively charged residues K23, R26, K30 and K31 located within the MADS domain of the protein allowed the binding specificity

Caracterización estructural de FCXTH 1 y FCXTH 2 asociados al desarrollo y maduración del fruto de Fragaria chiloensis (L). Duch.

78 p.La frutilla chilena (Fragaria chiloensis) surge como una nueva alternativa comercial, debido a sus excelentes características organolépticas. Su fruto es de rápido ablandamiento, reflejado en la alteración de la textura del fruto, que influye negativamente en la sobrevida de postcosecha y calidad, limitando su comercialización. Estudios previos han demostrado que el ablandamiento esta relacionado con la alteración de la pared celular, lo que corresponde a una serie de modificaciones de los polisacáridos que la componen. Los xiloglucanos (XG), polisacáridos abundantes en la pared celular, entrecruzan las microfibras de celulosa otorgándole rigidez a la pared. Se piensa que la modificación de las cadenas de XG estaría involucrada en la alteración observada en la pared, lo que resulta en el ablandamiento del fruto. La enzima xiloglucano endotransglicosilasa / hidrolasa (XTH) presente en todos los tejidos vegetales, presenta alta afinidad a xiloglucano y posee actividad endotransglicosilasa (XET), endohidrolasa (XEH), o ambas. En F. chiloensis se han identificado dos genes, que presentan alta similitud de secuencia con miembros de la familia de las XTH. Fc-XTH1, presenta alta acumulación de transcritos especialmente en fruto y Fc-XTH2 relacionado con los procesos vegetativos como el crecimiento de las hojas. Con el fin de aportar nuevos antecedentes en el proceso de ablandamiento del fruto, y obtener una perspectiva sobre el mecanismo de acción a nivel molecular de las enzimas FcXTH1 y FcXTH2, se realizó modelamiento comparativo para construir las estructuras de éstas enzimas. Además, se exploró la interacción de sustratos xiloglucano (XG) con la proteína, usando simulaciones de acoplamiento molecular. Ambas enzimas mostraron energías favorables de afinidad para sustratos XG, sin embargo, la estabilidad del complejo depende del estado de glicosilación de FcXTH. Simulaciones de dinámica molecular evidenciaron una marcada estabilidad de ambas proteínas al estar glicosiladas con 9 manosas (9m). La estabilidad de los complejos fue evaluada a través de cálculos de energía libre de unión con el método MM-GBSA. Los datos son congruentes con un probable papel de XTH durante el desarrollo y maduración del fruto./ABSTRACT: The chilean strawberry (Fragaria chiloensis) appears as a new commercial alternative, due to its excellent organoleptics. Fragaria chiloensis’s fruit with fast softening, which is reflected in the alteration of the texture of the fruit that affects negatively the survival and quality of the postharvest, restricting its merchandising. Previous studies have demonstrated that the softening is related to the alteration of the cell wall, which corresponds to modifications of the constituent polysaccharides. The xyloglucans(XG), abundant polysaccharides in the cell wall, crisscross microfibers of cellulose providing stiffness to the wall. This phenomenon could be due to that the modification of XG chains would be involved in the alteration observed in the wall, which results in softening of the fruit. The xyloglucan endotransglycosylase enzyme / hydrolase (XTH) present in all vegetables tissues, exhibits high affinity to xyloglucan and possesses endotransglycosylase actvity (XET),endohydrolase activity (XEH) , or both. In F. chiloensis have been identified two genes that show high similitude of sequence with members of the XTH family. Fc-XTH1, presents high accumulation of transcripts, especially in fruit and Fc-XTH2 is related to the vegetative processes such as leaf growth. With the purpose of providing new information in the process of fruit softening and obtaining a perspective about the mechanism of action to molecular level of enzymes FcXTH1 and FcXTH2, comparative modeling was performed to build the structures of these enzymes. Moreover, the interaction of xyloglucan (XG) substrates with the protein was explored, by using molecular Docking simulations. Both enzymes showed favorable energies of affinity for XG substrates. However, the stability of the complex depends on the state of FcXTH glycosylation. Molecular dynamics simulations showed a marked stability of both proteins by being glycosylated with 9 mannose (9m). The stability of the complexes was evaluated through calculations of binding free energy with the MM-GBSA method. The data are consistent with a probable role of XTH during development and the fruit ripening

Estudio del residuo serina 370 en el mecanismo de reacción de la enzima alcohol aciltransferasa de Vasconcellea pubescens

110 p.La papaya de montaña (Vasconcellea pubescens) es un fruto climatérico que desarrolla un fuerte y característico aroma, el cual está determinado principalmente por ésteres que son producidos a partir de alcoholes y acil-CoA mediante una reacción de esterificación catalizada por la enzima Alcohol aciltransferasa (VpAAT1). Recientemente, estudios sobre la estructura de la enzima VpAAT1 mostraron que ésta posee un canal de solvente en el centro de la estructura, en el cual se encuentran dispuestos los residuos H166 y D170, miembros del motivo HxxxD descrito como el motivo catalítico de la enzima. Adicionalmente, estudios realizados en la enzima Alcohol aciltransferasa de melón (CmAAT1), la cual esta filogenéticamente relacionada a VpAAT1 han mostrado que la presencia de un residuo de serina en la posición 363 (S370 en VpAAT1) sería importante para la actividad de la enzima, siendo la primera evidencia del rol de este residuo parcialmente conservado. Sin embargo, no se ha descrito hasta ahora algún rol en el mecanismo de formación de ésteres de este residuo en la enzima VpAAT1. Por lo tanto, para entender y evaluar un posible rol de este residuo en la actividad catalítica de la enzima VpAAT1 y a fin de incrementar el entendimiento en el proceso de formación de ésteres en papaya de montaña se realizaron estudios in silico de la mutación S370 por alanina y treonina. Posteriormente se llevaron a cabo estudios de acoplamiento molecular, dinámica molecular y MM-GBSA caracterizando a nivel atómico las propiedades estructurales e interacciones específicas que determinan la afinidad de la proteína nativa y las mutantes en presencia de los sustratos Bencil alcohol, Butanol, Cinamil Alcohol, Etanol, Acetil-CoA, Hexanoil-CoA. La interacción enzima-sustratos mostró que las energías de afinidad fueron menos favorables para las enzimas mutantes evidenciando que las sustituciones afectaron la interacción de la enzima por los sustratos. Mediante Dinámica Molecular se exploró el comportamiento de los sustratos con las enzimas mutantes evidenciando que las sustituciones realizadas estarían interfiriendo en la interacción directa de los sustratos con los residuos del sitio activo. Finalmente los resultados obtenidos mediante MM-GBSA se correlacionan con los datos anteriormente reportados./ABSTRACT: Mountain papaya (Vasconcellea pubescens) is a climacteric fruit which develop a strong and characteristic aroma mainly determined by esters. These esters are produced from alcohol and acyl-CoA via an esterification reaction catalyzed by the enzyme alcohol acyltransferase (VpAAT1). Recently, studies on the structure of the enzyme VpAAT1 showed that has a channel in the center of the structure. In this channel the catalitic residues H166 and D170 are located. Additionally, studies of the enzyme Alcohol acyltransferase (CmAAT1) from melon, which is phylogenetically related to VpAAT1 have shown that the presence of a serine residue at position 363 (S370 in VpAAT1) which is important for the enzyme activity, being the first evidence of the role of this residue partially preserved. However, a role in the mechanism of ester formation of this residue in the enzyme VpAAT1 has not been described so far. Therefore, this study aims to understand and evaluate a potential role of this residue in the catalytic activity of the enzyme and to increase the VpAAT1 understanding on the esters formation. In silico mutation of S370 for alanine and threonine were performed as well as molecular docking, molecular dynamics and MM-GBSA atomic level to characterize the structural properties and specific interactions which determine the affinity of the native and mutant protein in the presence of substrates Benzyl alcohol Butanol, cinnamyl alcohol, ethanol, acetyl-CoA, hexanoyl-CoA. Enzyme-substrate interaction showed that the interaction energies were less favorable for the mutant enzymes showing that substitutions affected the interaction of the enzyme substrates. Using Molecular Dynamics explored the behavior of the substrates in the mutant enzymes showing that substitutions made would be interfering with the direct interaction of the substrates with the active site residues. Finally the results obtained by MM-GBSA correlate with previously reported data

Caracterización estructural de isoformas de la enzima alcohol acil transferasa (AAT) involucrada en la biosíntesis de ésteres volátiles en Cucumis melo. Evaluación del rol del residuo thr268 para la actividad enzimática

92 p.El aroma es un atributo importante en la calidad de un fruto y está determinado por un grupo de compuestos volátiles de bajo peso molecular. En melón (Cucumis melo), los compuestos mayormente producidos corresponden a ésteres, los cuales son sintetizados por la enzima Alcohol Acil Transferasa (AAT) que cataliza la transferencia de un grupo acilo desde un acil-CoA a un alcohol. Se ha descrito que existen cuatro isoformas de AATs en C. melo (CmAAT1-4). Estas enzimas, a excepción de la enzima CmAAT2, son activas por expresión heteróloga en levadura y muestran afinidades diferenciales por una amplia batería de sustratos. Se ha demostrado que la falta de actividad en CmAAT2 se debe a la presencia del residuo alanina en la posición 268 en lugar de treonina presente en las tres restantes enzimas activas. En el presente trabajo, se obtuvo la estructura de las cuatro isoformas CmAAT mediante modelamiento comparativo. CmAAT1, CmAAT3 y CmAAT4 presentaron un canal de solvente cercano al segmento HXXXD correpondiente al sitio activo y CmAAT2 evidenció la auscencia de este. La interacción enzima-sustratos mostró que las energías de interacción para las cuatro isoformas fueron más favorables para los derivados de acil-CoA que para los alcoholes. Los sustratos ingresaron al canal de solvente y se ubicaron en el sitio activo de CmAAT1, CmAAT3 y CmAAT4. Los derivados de acil-CoA posicionaron el grupo carbonilo de éstos cerca del nitrógeno ε del residuo de histidina y el grupo hidroxilo de los alcoholes hacia el oxígeno del grupo carboxílico del residuo de aspartato. En CmAAT2 los sustratos se posicionaron en regiones lejanas al sitio activo. La mutación de Thr268 por Ala en CmAAT1 impidió la formación del canal de solvente y afectó directamente el ingreso de los sustratos al sitio activo de esta enzima, de modo contrario, en CmAAT2 la mutación de Ala268 por Thr favoreció la formación de un bolsillo cercano al sitio activo anteriormente inexistente y permitió el ingreso de los sustratos. Mediante dinámica molecular se exploró el comportamiento de acetil-CoA y hexanol en CmAAT1, evidenciando que la movilidad de los sustratos y la participacíon de Ser363 estaría favoreciendo una interacción directa entre His161 con acetil-CoA y hexanol./ABSTRACT:Aroma is an important attribute in fruit quality, which determined by a set of low molecular weight volatile compounds. In melon fruit (Cucumis melo), esters are the main compounds, which are, synthesized through the action of alcohol acyl transferases (AAT). The enzyme catalyses the formation of esters by transferring an acyl-CoA to an alcohol. Four isoforms of AAT in C. melo (CmAAT1-4) have been reported. The expression of these isoforms in yeast showed that three of them are active, being CmAAT2 the only one with no activity. Most importantly all active enzymes showed differential affinities when several different substrates are used. It has been shown that the loss of activity of CmAAT2 is due to the presence of an alanine instead of threonine in position 268. Being present the alanine in the three remaining active enzymes. In this work we obtained the structure of four CmAAT isoforms through comparative modelling. CmAAT1, CmAAT3 and CmAAT4 present a solvent channel near the HXXXD segment that corresponds to the active site. CmAAT2 has demonstrated the absence of the solvent channel. Enzime-substrates interaction shows that interaction energies of the four isoforms are more favorable for acyl-CoA substrates than for alcohols. The substrates entered the solvent channel and were located at the active site for CmAAT1, CmAAT3 and CmAAT4. Acyl-CoA derivatives positioned the carbonyl group near the ε nitrogen of the histidine residue. The hydroxyl group of the alcohols was moved towards the oxygen of the carboxylic group of aspartate residue. In CmAAT2, the substrates were positioned in the far-off regions of the active site. The mutation Thr268 to Ala in CmAAT1 prevented the formation of the channel solvent and directly affected the entry of the substrates to the active site of this enzyme, otherwise, the mutation of Ala268 to Thr in CmAAT2 would have encouraged the formation of previously nonexistent a pocket near the active site and allowed the entry of substrates. The behaviour of acetyl-CoA and hexanol in CmAAT1 will be explore through molecular dynamics, showing that the mobility of substrates and the participation of Ser363 would favour a direct interaction between His161 with acetyl-CoA and hexanol.   Palabras claves:  CmAA

Caracterización estructural de las proteínas FcEXPA1 y FcEXPA2 asociadas al desarrollo y maduración del fruto de Fragaria chiloensis (L). Duch

104 p.La frutilla Chilena (Fragaria chiloensis) es una especie nativa que surge como una nueva alternativa comercial, debido a sus excelentes características organolépticas y hortícolas, destacando la tolerancia frente a diferentes factores de estrés tanto biótico como abiótico. Su fruto es perecedero, de rápido ablandamiento, reflejado en la alteración de la textura del fruto, que influye negativamente en la vida de postcosecha y calidad de éste, limitando así su comercialización. Estudios previos han demostrado que el ablandamiento del fruto de F. chiloensis está relacionado con la modificación de la pared celular, mediado por un grupo de proteínas entre las que se encuentran las expansinas. Las expansinas son proteínas que inducen una disrupción reversible de los enlaces de hidrógeno existentes entre las microfibrillas de celulosa y las hemicelulosas, permitiendo la relajación de la pared celular. Hasta la fecha se desconoce a nivel molecular el modo de acción de las expansinas. Por lo tanto, con el fin de aportar nuevos antecedentes en relación a estas proteínas es que se obtuvo la estructura tridimensional de dos expansinas de F. chiloensis (FcEXPA1 y FcEXPA2), asociadas a la maduración del fruto de F. chiloensis, mediante modelado comparativo. Además, se realizó acoplamiento molecular y simulación de dinámica molecular frente a distintos sustratos del tipo hemicelulosa (XG) y celulosa, con el fin de evaluar el rol de las expansinas en la interacción con dichos sustratos. De esta forma, el estudio de la estructura de estos dos miembros de la familia de las expansinas en frutilla, nos permitió indagar comparativamente acerca de posibles diferencias estructurales y/o de interacción con sustratos entre miembros de esta familia génica./ABSTRACT:The Chilean strawberry (Fragaria chiloensis) is a native species that is emerging as a new commercial alternative, due to its excellent organoleptic and horticultural traits, highlighting tolerance to biotic and abiotic stress. Chilean strawberry fruit is perishable, showing a rapid and intense softening, reflected in the alteration of the texture of the fruit, which negatively influences the postharvest life and fruit quality, thus limiting the market. Previous studies have shown that fruit softening of F. chiloensis is related to cell wall modification mediated by expansins protein. Expansins induce a reversible disruption of the hydrogen bonds between cellulose microfibrils and hemicellulose (xyloglucan) allowing relaxation of the plant cell wall. With the aim to gain insight about the mode of action of expansins at molecular level, the three-dimensional structure of two Chilean strawberry expansins (FcEXPA1 and FcEXPA2) will be obtained by comparative modeling. Then, molecular docking and molecular dinamics with different hemicellulose and cellulose will be performed, in order to evaluate the mode of interaction of expansins with model substrates. The structural characterization of two members of the expansins family in strawberry allows us to investigate possible differences about structure and / or substrates interaction between members of the same gene famil

Effectiveness of an intervention for improving drug prescription in primary care patients with multimorbidity and polypharmacy:Study protocol of a cluster randomized clinical trial (Multi-PAP project)

This study was funded by the Fondo de Investigaciones Sanitarias ISCIII (Grant Numbers PI15/00276, PI15/00572, PI15/00996), REDISSEC (Project Numbers RD12/0001/0012, RD16/0001/0005), and the European Regional Development Fund ("A way to build Europe").Background: Multimorbidity is associated with negative effects both on people's health and on healthcare systems. A key problem linked to multimorbidity is polypharmacy, which in turn is associated with increased risk of partly preventable adverse effects, including mortality. The Ariadne principles describe a model of care based on a thorough assessment of diseases, treatments (and potential interactions), clinical status, context and preferences of patients with multimorbidity, with the aim of prioritizing and sharing realistic treatment goals that guide an individualized management. The aim of this study is to evaluate the effectiveness of a complex intervention that implements the Ariadne principles in a population of young-old patients with multimorbidity and polypharmacy. The intervention seeks to improve the appropriateness of prescribing in primary care (PC), as measured by the medication appropriateness index (MAI) score at 6 and 12months, as compared with usual care. Methods/Design: Design:pragmatic cluster randomized clinical trial. Unit of randomization: family physician (FP). Unit of analysis: patient. Scope: PC health centres in three autonomous communities: Aragon, Madrid, and Andalusia (Spain). Population: patients aged 65-74years with multimorbidity (≥3 chronic diseases) and polypharmacy (≥5 drugs prescribed in ≥3months). Sample size: n=400 (200 per study arm). Intervention: complex intervention based on the implementation of the Ariadne principles with two components: (1) FP training and (2) FP-patient interview. Outcomes: MAI score, health services use, quality of life (Euroqol 5D-5L), pharmacotherapy and adherence to treatment (Morisky-Green, Haynes-Sackett), and clinical and socio-demographic variables. Statistical analysis: primary outcome is the difference in MAI score between T0 and T1 and corresponding 95% confidence interval. Adjustment for confounding factors will be performed by multilevel analysis. All analyses will be carried out in accordance with the intention-to-treat principle. Discussion: It is essential to provide evidence concerning interventions on PC patients with polypharmacy and multimorbidity, conducted in the context of routine clinical practice, and involving young-old patients with significant potential for preventing negative health outcomes. Trial registration: Clinicaltrials.gov, NCT02866799Publisher PDFPeer reviewe

Role of age and comorbidities in mortality of patients with infective endocarditis

[Purpose]: The aim of this study was to analyse the characteristics of patients with IE in three groups of age and to assess the ability of age and the Charlson Comorbidity Index (CCI) to predict mortality. [Methods]: Prospective cohort study of all patients with IE included in the GAMES Spanish database between 2008 and 2015.Patients were stratified into three age groups:<65 years,65 to 80 years,and ≥ 80 years.The area under the receiver-operating characteristic (AUROC) curve was calculated to quantify the diagnostic accuracy of the CCI to predict mortality risk. [Results]: A total of 3120 patients with IE (1327 < 65 years;1291 65-80 years;502 ≥ 80 years) were enrolled.Fever and heart failure were the most common presentations of IE, with no differences among age groups.Patients ≥80 years who underwent surgery were significantly lower compared with other age groups (14.3%,65 years; 20.5%,65-79 years; 31.3%,≥80 years). In-hospital mortality was lower in the <65-year group (20.3%,<65 years;30.1%,65-79 years;34.7%,≥80 years;p < 0.001) as well as 1-year mortality (3.2%, <65 years; 5.5%, 65-80 years;7.6%,≥80 years; p = 0.003).Independent predictors of mortality were age ≥ 80 years (hazard ratio [HR]:2.78;95% confidence interval [CI]:2.32–3.34), CCI ≥ 3 (HR:1.62; 95% CI:1.39–1.88),and non-performed surgery (HR:1.64;95% CI:11.16–1.58).When the three age groups were compared,the AUROC curve for CCI was significantly larger for patients aged <65 years(p < 0.001) for both in-hospital and 1-year mortality. [Conclusion]: There were no differences in the clinical presentation of IE between the groups. Age ≥ 80 years, high comorbidity (measured by CCI),and non-performance of surgery were independent predictors of mortality in patients with IE.CCI could help to identify those patients with IE and surgical indication who present a lower risk of in-hospital and 1-year mortality after surgery, especially in the <65-year group

The Changing Landscape for Stroke\ua0Prevention in AF: Findings From the GLORIA-AF Registry Phase 2

Background GLORIA-AF (Global Registry on Long-Term Oral Antithrombotic Treatment in Patients with Atrial Fibrillation) is a prospective, global registry program describing antithrombotic treatment patterns in patients with newly diagnosed nonvalvular atrial fibrillation at risk of stroke. Phase 2 began when dabigatran, the first non\u2013vitamin K antagonist oral anticoagulant (NOAC), became available. Objectives This study sought to describe phase 2 baseline data and compare these with the pre-NOAC era collected during phase&nbsp;1. Methods During phase 2, 15,641 consenting patients were enrolled (November 2011 to December 2014); 15,092 were eligible. This pre-specified cross-sectional analysis describes eligible patients\u2019 baseline characteristics. Atrial fibrillation&nbsp;disease characteristics, medical outcomes, and concomitant diseases and medications were collected. Data were analyzed using descriptive statistics. Results Of the total patients, 45.5% were female; median age was 71 (interquartile range: 64, 78) years. Patients were from Europe (47.1%), North America (22.5%), Asia (20.3%), Latin America (6.0%), and the Middle East/Africa (4.0%). Most had high stroke risk (CHA2DS2-VASc [Congestive heart failure, Hypertension, Age&nbsp; 6575 years, Diabetes mellitus, previous Stroke, Vascular disease, Age 65 to 74 years, Sex category] score&nbsp; 652; 86.1%); 13.9% had moderate risk (CHA2DS2-VASc&nbsp;= 1). Overall, 79.9% received oral anticoagulants, of whom 47.6% received NOAC and 32.3% vitamin K antagonists (VKA); 12.1% received antiplatelet agents; 7.8% received no antithrombotic treatment. For comparison, the proportion of phase 1 patients (of N&nbsp;= 1,063 all eligible) prescribed VKA was 32.8%, acetylsalicylic acid 41.7%, and no therapy 20.2%. In Europe in phase 2, treatment with NOAC was more common than VKA (52.3% and 37.8%, respectively); 6.0% of patients received antiplatelet treatment; and 3.8% received no antithrombotic treatment. In North America, 52.1%, 26.2%, and 14.0% of patients received NOAC, VKA, and antiplatelet drugs, respectively; 7.5% received no antithrombotic treatment. NOAC use was less common in Asia (27.7%), where 27.5% of patients received VKA, 25.0% antiplatelet drugs, and 19.8% no antithrombotic treatment. Conclusions The baseline data from GLORIA-AF phase 2 demonstrate that in newly diagnosed nonvalvular atrial fibrillation patients, NOAC have been highly adopted into practice, becoming more frequently prescribed than VKA in&nbsp;Europe and North America. Worldwide, however, a large proportion of patients remain undertreated, particularly in&nbsp;Asia&nbsp;and North America. (Global Registry on Long-Term Oral Antithrombotic Treatment in Patients With Atrial Fibrillation [GLORIA-AF]; NCT01468701