25 research outputs found

    Serina proteasas de Lachesis stenophrys y Bothrops asper: producción de anticuerpos mediante inmunización con ADN y subclonaje

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    Proyecto de Graduación (Bachillerato en Ingeniería en Biotecnología) Instituto Tecnológico de Costa Rica, Escuela de Biología, 2006.El veneno de vipáridos contiene componentes tóxicos de naturaleza enzimática, dentro de los cuales se destacan serina proteasas por su contribución a provocar un desbalance del sistema hemostático. La baja proporción de anticuerpos especá­ficos para neutralizar toxinas de interés dentro de los sueros antiofí­dicos producidos de forma convencional, ha llevado a la obtención de los ADN codificantes para diversas toxinas y su clonación en vectores de expresión, con el fin de producir anticuerpos específicos mediante inmunización con ADN. En esta investigación, se inmunizaron ratones ví­a intravenosa con el ADN codificante para una serina proteasa del veneno de Lachesis stenophrys clonado en el plásmido pCI, y se realizó un subclonaje de una serina proteasa del veneno de Bothrops asper en el vector de expresión eucariota: pVAX1-UbC. Tras determinar el nivel de IgGs específicas para la serina proteasa de L. stenophrys en el suero de ratones inmunizados,se determiná la ausencia de una respuesta inmune específica mediante inmunización intravenosa, lo cual evidencia la necesidad de buscar nuevas estrategias para optimizar los constructos de ADN a ser utilizados. El subclonaje realizado constituye una de ellas, con el fin de estudiar a futuro el efecto regulador de un promotor muy conservado en mamí­feros(el gen de la Ubiquitina C) sobre la expresión de la serina proteasa de B. asper

    Serina protoseas de Lachesis stenophrys y bothrops asper: Producción de anticuerpos mediante inmunización con ADN y subclonaje

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    Proyecto de Graduación (Bachillerato en Ingeniería en Biotecnología) Instituto Tecnológico de Costa Rica. Escuela de Biología, 2006.El veneno de vipéridos contiene componentes tóxicos de naturaleza enzimática, dentro de los cuales se destacan serina proteasas por su contribución a provocar un desbalance del sistema hemostático. La baja proporción de anticuerpos específicos para neutralizar toxinas de interés dentro de los sueros antiofídicos producidos de forma convencional, ha llevado a la obtención de los ADNc codificantes para diversas toxinas y su clonación en vectores de expresión, con el fin de producir anticuerpos específicos mediante inmunización con ADN. En esta investigación, se inmunizaron ratones vía intravenosa con el ADNc codificante para una serina proteasa del veneno de Lachesis stenophrys clonado en el plásmido pCI, y se realizó un subclonaje de una serina proteasa del veneno de Bothrops asper en el vector de expresión eucariota: pVAX1-UbC. Tras determinar el nivel de IgGs específicas para la serina proteasa de L. stenophrys en el suero de ratones inmunizados, se determinó la ausencia de una respuesta inmune específica mediante inmunización intravenosa, lo cual evidencia la necesidad de buscar nuevas estrategias para optimizar los constructos de ADN a ser utilizados. El subclonaje realizado constituye una de ellas, con el fin de estudiar a futuro el efecto regulador de un promotor muy conservado en mamíferos (el gen de la Ubiquitina C) sobre la expresión de la serina proteasa de B. asper

    Evaluación de briquetas elaboradas con cascarilla de arroz para el uso como combustible en hornos rosquilleros en la comunidad de Isiquí del municipio de Estelí

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    Evaluar la eficiencia energética de las briquetas elaboradas con cascarilla de arroz para reemplazar el material comburente tradicional (leña), determinar las propiedades físicas de la cascarilla de arroz a través de los cálculos de la humedad, materia seca, cenizas y granulometría, elaborar briquetas a base de arroz haciendo uso de una maquina briquetadora hidráulica, elabora rosquillas en un horno artesal utilizando briquetas elaboradas a base de cascarilla de arroz como material comburente y determinar las características sensoriales de las rosquillas a través de un análisis sensorial, determina los costos totales de producción en la elaboración de las briquetas a base de cascarilla de arroz

    Improved biomass and protein production in solid-state cultures of an Aspergillus sojae strain harboring the Vitreoscilla hemoglobin

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    The biotechnological value of Aspergillus sojae ATCC 20235 (A. sojae) for production of pectinases in solid-state fermentation (SSF) has been demonstrated recently. However, a common drawback of fungal solid-state cultures is the poor diffusion of oxygen into the fungi that limits its growth and biological productivity. The bacterial Vitreoscilla hemoglobin (VHb) has favored the metabolism and productivities of various bacterial and yeast strains besides alleviating hypoxic conditions of its native host, but the use of VHb in filamentous fungi still remains poor explored. Based on the known effects of VHb, this study assessed its applicability to improve A. sojae performance in SSF. The VHb gene (vgb) under control of the constitutive Aspergillus nidulants gpdA promoter was introduced into the genome of A. sojae by Agrobacterium-mediated transformation. Successful fungal transformants were identified by fluorescence microscopy and polymerase chain reaction (PCR) analyses. In solid-state cultures, the content of protease, exo-polygalacturonase (exo-PG), and exo-polymethylgalacturonase (exo-PMG) of the transformed fungus (A. sojae vgb+) improved were 26, 60, and 44 % higher, respectively, in comparison to its parental strain (A. sojae wt). Similarly, biomass content was also 1.3 times higher in the transformant strain. No significant difference was observed in endo-polygalacturonase (endo-PG) content between both fungal strains, suggesting dissimilar effects of VHb towards different enzymatic productions. Overall, our results show that biomass, protease, and exo-pectinase content of A. sojae in SSF can be improved by transformation with VHb.Fil: Mora Lugo, Rodrigo. Jacobs University; AlemaniaFil: Madrigal, Marvin. Jacobs University; Alemania. Universidad de Costa Rica; Costa RicaFil: Yelemane, Vikas. Jacobs University; AlemaniaFil: Fernandez Lahore, Hector. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Jacobs University; Alemani

    Snake venomics of Lachesis muta rhombeata and genus-wide antivenomics assessment of the paraspecific immunoreactivity of two antivenoms evidence the high compositional and immunological conservation across Lachesis

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    We report the proteomic analysis of the Atlantic bushmaster, Lachesis muta rhombeata, from Brazil. Along with previous characterization of the venom proteomes of L. stenophrys (Costa Rica), L. melanocephala (Costa Rica), L. acrochorda (Colombia), and L. muta muta (Bolivia), the present study provides the first overview of the composition and distribution of venom proteins across this wide-ranging genus, and highlights the remarkable similar compositional and pharmacological profiles across Lachesis venoms. The paraspecificity of two antivenoms, produced at Instituto Vital Brazil (Brazil) and Instituto Clodomiro Picado (Costa Rica) using different conspecific taxa in the immunization mixtures, was assessed using genus-wide comparative antivenomics. This study confirms that the proteomic similarity among Lachesis sp. venoms is mirrored in their high immunological conservation across the genus. The clinical and therapeutic consequences of genus-wide venomics and antivenomics investigations of Lachesis venoms are discussed. Biological significance The proteomics characterization of L. m. rhombeata venom completes the overview of Lachesis venom proteomes and confirms the remarkable toxin profile conservation across the five clades of this wide-ranging genus. Genus-wide antivenomics showed that two antivenoms, produced against L. stenophrys or L. m. rhombeata, exhibit paraspecificity towards all other congeneric venoms. Our venomics study shows that, despite the broad geographic distribution of the genus, monospecific antivenoms may achieve clinical coverage for any Lachesis sp. envenoming.Ministerio de Ciencia e Innovación/[BFU2010-17373]//EspañaMinisterio de Economía y Competitividad/[BFU2010-17373]//EspañaPrograma Iberoamericano de Ciencia y Tecnología para el Desarrollo/[BIOTOX 212RT0467]/CYTED/EspañaGeneralitat Valenciana/[PROMETEO/2010/005]// EspañaFondo Especial para la Educación Superior-Consejo Nacional de Rectores//FEES-CONARE/Costa RicaUniversidad de Costa Rica/[741-B2-652]/UCR/Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP
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