The use of mycorrhizal fungi as a strategy to increase resistance against grapevine diseases: study of the effect of mycorrhizal symbiosis on Plasmopara viticola ability to express pathogenic effectors

Tese de mestrado, Microbiologia Aplicada, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2020Grapevine is one of the most important fruit crops worldwide. In 2019, over 7.4 million hectares of the world cultivated area were dedicated to viticulture, resulting in the production of 77.8 million tonnes of grapes (International Organisation of Vine and Wine, 2020 report). However, the cultivated species Vitis vinifera L., widely used for berry and wine production, is highly susceptible to the pathogenic oomycete Plasmopara viticola (Berk. & M.A. Curtis) Berl. & De Toni, the causal agent of the grapevine downy mildew disease. This disease is one of the most devastating causing up to 75% of grape loss in one season and important economic losses. Nowadays, the method used to control P. viticola relies on multiple applications of chemical fungicides which have a negative impact on the environment as they accumulate in the soil and water. In Europe alone, 68 thousand tonnes of fungicides were used in 2003, but recently the European Union has established a goal to lower the usage of such chemicals in viticulture. Therefore, there is a need to develop new and more sustainable strategies to control downy mildew disease. The use of beneficial microorganisms with biocontrol capabilities, such as the arbuscular mycorrhizal fungi (AMF), has been pointed out as a viable alternative. With this study we intended to investigate the effect of AMF colonization on the expression of P. viticola effectors during infection of grapevine. Grapevine plants (V. vinifera cv Cabernet Sauvignon) were inoculated with the mycorrhizal fungus Rhizophagus irregularis and root AMF colonization rate and plant growth were assessed. The percentage of root colonization was 10% and mycorrhizal grapevine plants showed a significantly higher shoot biomass compared to non-mycorrhizal plants. Four months post-mycorrhizal inoculation, plants were infected with the pathogen P. viticola. Pathogenicity effectors genes belonging to the RxLR group were analysed and their expression was investigated during the first hours of infection using quantitative real time PCR analysis. Results showed that mycorrhizal inoculation altered the expression of several P. viticola effectors, namely PvRxLR28 and PvRxLR67 that presented an expression decrease in mycorrhizal plants at the two time points post-infection tested, and PvRxLR18 and PvAVH52 that presented an expression increase. These results suggest that the pre-inoculation of grapevine with AMF may interfere with pathogen capabilities to infect the plant by pathogenicity effectors expression modulation. These results further support the hypothesis that AMF can be used to promote more sustainable agriculture, particularly viticulture, practices

O feminino em wuthering heights : análise intersemíótica

A presente dissertação pretende ser um resumo da investigação da autora em torno dos mecanismos de adaptação de uma obra literária para cinema, através da comparação de duas versões cinematográficas, com principal enfoque na vertente feminina da obra/filme, contextualizando-a através de alguns aspetos da condição da mulher nos séculos XIX e XX. A obra literária que nos propomos tratar é o romance Wuthering Heights de Emily Brontë, cuja origem se enquadra num período de alterações económico socais, retratadas ao longo do romance. A ascensão da burguesia, a queda dos pequenos proprietários rurais, a dependência e subjugação femininas perante a família ou o marido e o casamento como meio de ascensão social são algumas das temáticas abordadas por Emily Brontë. A autora conseguiu criar uma narrativa fascinante e simultaneamente repulsiva para os mais moralistas da época devido à clareza descritiva e à intensidade emocional notórias ao longo de todo o romance. Estas características literárias tão invulgares para uma autora jovem que vivia isolada dos círculos literários da época, fizeram com que Wuthering Heights não tivesse o sucesso desejado aquando da sua publicação em 1847, chegando mesmo a suspeitar-se de que a obra seria da autoria de Brandwell, irmão de Emily. De acordo com Margaret Homans (1986), na sua obra Bearing the World, “(…) the speaking or writing subject is constitutively masculine while the silent object is feminine” (p. xii). E, com base nesta perspetiva, seria duvidoso que alguém tão jovem e inexperiente fosse possuidor de um estilo tão irreverente e audaz. Apenas alguns anos mais tarde é que a obra atingiu o devido reconhecimento, e desde então tem suscitado a curiosidade e o interesse de vários críticos, tendo sido traduzida para várias línguas, dando origem a diversas adaptações cinematográficas e televisivas

Magnetic resonance spectroscopy (1H) of the intervertebral lumbar disc in the adult and its application in the imaging routine

Objetivos – Demonstrar o potencial da espetroscopia (1H) por ressonância magnética na doença degenerativa discal lombar e defender a integração desta técnica na rotina clínico‑imagiológica para a precisa classificação da involução vs degenerescência dos discos L4‑L5 e L5‑S1 em doentes com lombalgia não relacionável com causa mecânica. Material e métodos – O estudo incluiu 102 discos intervertebrais lombares de 123 doentes. Foram estudados 61 discos de L4‑L5, 41 discos de L5‑S1 e 34 discos de D12‑L1. Utilizou‑se um sistema de ressonância magnética de 1,5 T e técnica monovoxel. Obtiveram‑se os rácios [Lac/Nacetyl] e [Nacetyl/(Lac+Lípidos)] e aplicou‑se a ressonância de lípidos para avaliar a bioquímica do disco com o fim de conhecer o estado de involução vs degenerescência que o suscetibilizam para a instabilidade e sobrecarga. Avaliou‑se o comportamento dos rácios e do teor lipídico dos discos L4‑L5‑S1 e as diferenças apresentadas em relação a D12‑L1. Foi também realizada a comparação entre os discos L4‑L5, L5‑S1 e D12‑L1 na ponderação T2 (T2W), segundo a classificação ajustada (1‑4) de Pfirrmann. Resultados – Verificou‑se que os rácios e o valor dos lípidos dos discos L4‑L5‑S1 apresentaram diferenças estatisticamente significativas quando relacionados com os discos D12‑L1. O rácio [Lac/Nacetyl] em L4‑L5‑S1 mostrou‑se aumentado em relação a D12‑L1 (p=0,033 para os discos com grau de involução [1+2] e p=0,004 para os discos com grau [3+4]). Estes resultados sugerem que a involução vs degenerescência dos discos nos graus mais elevados condiciona um decréscimo do pico do Lactato. O rácio [Nacetyl/(Lac+Lip)] discrimina os graus de involução [1+2] do [3+4] no nível L4‑L5, apresentando os valores dos rácios (média 0,65 e 0,5 respetivamente com p=0,04). O rácio médio de [Nacetyl/(Lac+Lip)] dos discos L4‑L5 foi 1,8 vezes mais elevado do que em D12‑L1. O espetro lipídico em L4‑L5‑S1 nos graus mais elevados não mostrou ter uma prevalência constante quanto às frequências de ressonância. Conclusão – A espetroscopia (1H) dos discos intervertebrais poderá ter aplicação na discriminação dos graus de involução vs degenerescência e representar um contributo semiológico importante em suplemento à ponderação T2 convencional. As ressonâncias de lípidos dos discos L4‑L5 e L5‑S1, involuídos ou degenerados, devem ser avaliadas em relação a D12‑L1, utilizando este valor como referência, pois este último é o nível considerado estável e com baixa probabilidade de degenerescência.ABSTRACT - Aims – To assess the potential of magnetic resonance spectroscopy (1H‑MRS) in the diagnostic of degenerative disease of the lumbar disc and to advocate the adding of this technique in the classification of the invertebral disc involution vs degeneration (L4‑L5 and L5‑S1) in the clinical routine of lumbar pain status, not related with mechanic causes. Material and method – We studied 102 out of 123 lumbar intervertebral discs. The distribution among spaces was 61 discs at L4‑L5, 41 at L5‑S1 level and 34 at D12‑L1 level. The magnetic resonance studies were performed using a 1.5 T scanner. A single‑voxel Point Resolved Spectra Selection (PRESS) technique was used. The ratios [Lac/Nacetyl], [Nacetyl/(Lac+Lip)] and additionally the resonance of lipids were applied to evaluate the biochemistry of the discs, its involution, disc disruption and eventual susceptibility to initiate degeneration process. The ratios and the lipidic value of L4‑L5‑S1 discs were ascertained with the different behavior of D12‑L1. Furthermore, the comparison between L4‑L5, L5‑S1 and D12‑L1 discs was performed according with rating in T2 weighted (adjusted scale 1‑4 from Pfirrmann criteria). Results – Related to D12‑L1, the ratios and the lipids of L4‑L5‑S1 discs are statistically different. When used as a complementary of conventional T2 weighted, they have a good discrimination in the all degrees of disc involution vs degeneration. The ratio [Lac/Nacetyl] at L4‑L5‑S1 level was increased when compared to D12‑L1 (p=0.033 for disks with [1+2] score of involution and p=0.004 for disks with score [3+4]). These results suggest that disc degeneration vs involution in higher degrees defines a decrease in the lactate’s peak. The ratio [Nacetyl/(Lac+Lip)] provides a good discrimination of involution between scores [1+2] and [3+4] at L4‑L5 level, presenting the values of the ratios (mean 0.65 and 0.5 with p=0.04). The mean ratio of [Nacetyl/(Lac+Lip)] in the L4‑L5 disc was 1.8 times higher than that of L1‑D12. The lipid spectrum at L4‑L5‑S1 in the higher scores showed no constant prevalence in the resonance frequencies. Conclusion – The (1H) spectroscopy of intervertebral discs may contribute with a supplementary semiology to the conventional MRI. The resonances of L4‑L5 and L5‑S1 discs, involuted or degenerated, must be related with D12‑L1, which are more stable and have lower likelihood of disc degeneration

The importance of protein corona for cancer therapy: interactions between albumin and carbon nanotubes

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019O cancro é uma das causas mais comuns de morte nos países desenvolvidos. Infelizmente, a maioria das terapêuticas contra o cancro tem inúmeros e graves efeitos adversos, como citotoxicidade e danos nos tecidos saudáveis. Mesmo depois do tratamento, existem casos de resistência e recorrência. Contudo, a investigação nesta área está a tentar desenvolver terapêuticas que apresentem menos consequências e, o uso de nanopartículas (NPs) para a veiculação de fármacos, parece ser uma boa alternativa. Devido às suas propriedades físico-químicas excecionais, os nanotubos de carbono de paredes múltiplas (MWCNTs) estão a ser bastante utilizados na terapêutica anticancerígena. Têm a capacidade de veicular os fármacos diretamente aos tecidos tumorais por transporte passivo ou ativo, aumentando o potencial terapêutico, melhorando a segurança e biodisponibilidade dos fármacos administrados e diminuindo, significativamente, os efeitos adversos da quimioterapia. Após a injeção de MWCNTs na corrente sanguínea, estes circulam até chegarem ao tecido-alvo. Uma vez em contacto com fluidos biológicos, proteínas e outras biomoléculas ligam-se à superfície dos MWCNTs, formando a proteína corona (PC). Os nanotubos de carbono conseguem alcançar as células tumorais pois os ligandos que estão na sua superfície reconhecem os seus recetores específicos que estão sobre-expressos nos tumores. Embora seja difícil simular as condições in vivo, nesta experiência in vitro juntámos nanotubos de carbono à albumina sérica bovina (BSA), originando complexos MWCNTs-BSA. Estes ganharam muita importância como transportadores para a veiculação direcionada de fármacos pois conseguem aumentar a estabilidade e o tempo de semi-vida dos antineoplásicos, prolongando o seu tempo na circulação, e regular a biodistribuição. É crucial para a maioria das aplicações clínicas das nanopartículas saber controlar a formação da PC. Para determinar a farmacocinética dos fármacos antes de serem aplicados na terapêutica antineoplásica, é necessário conhecer como a PC afeta a distribuição, metabolismo e eliminação dos MWCNTs. As interações entre os nanotubos de carbono e a albumina são essenciais para o comportamento da PC no corpo humano. Está provado que parâmetros experimentais como concentração de MWCNTs e albumina, tempo de incubação e temperatura podem influenciar a formação da proteína corona, sendo que o seu impacto precisa de continuar a ser investigado.Cancer is one of the most common cause of human death in developed countries. Unfortunately, most cancer therapies have numerous and serious side effects, such as cytotoxicity and damage to healthy tissues. Even after treatment, there are still cases of resistance and recurrence. However, cancer research is trying to develop therapies that have fewer consequences and the use of nanoparticles (NPs) for drug delivery seems to be a good alternative. Due to their exceptional physicochemical properties, multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) are widely used in anticancer therapy. They have the ability to deliver drugs directly to tumor tissues by passive or active targeting, increasing therapeutic potential, enhancing the safety and bioavailability of the administrated drugs and significantly decreasing the side effects of chemotherapy. After injection of MWCNTs into bloodstream, they circulate until reaching the targeted tissue. Once into biological fluids, proteins and other biomolecules bind to the MWCNTs surface, forming the protein corona (PC). Carbon nanotubes can reach the tumors cells because the ligands on its surface recognize its specific receptor that are overexpressed in tumor tissues. Although it is difficult to simulate in vivo conditions, in this in vitro experiment carbon nanotubes were added to bovine serum albumin (BSA), originating MWCNTs-BSA complexes. These complexes have gained importance as carriers for targeted drug delivery because they can increase stability and half-time of anticancer drugs, prolonging the blood circulation time, and regulate biodistribution. It is crucial for most clinical uses of nanoparticles knowing how to control the PC formation. To discover what will be the pharmacokinetics of the drugs before it is applied in anticancer therapy, it is necessary to find out how PC affects the distribution, metabolism and elimination of MWCNTs. The interactions between carbon nanotubes and albumin to form PC are essential for their behaviour in a biological system, moreover, understanding the impact of the PC on biological response is crucial. Thus, it is proved that experimental parameters as concentration of MWCNTs and albumin, incubation time and temperature can influence the formation of protein corona and its impact needs to be further investigated.Universitas Veterinaria et Pharmaceutica Brunensis, Brno, Czech Republic; Farmácia Joleni; Hospital Curry Cabra

The influence of social identity on meat consumption reduction

Dissertation presented as the partial requirement for obtaining a Master's degree in Information Management, specialization in Marketing IntelligenceRecently, societies have witnessed a widespread shift in consumer behavior, with the adoption of healthier and more sustainable consumption habits, such as the case of meat consumption reduction. To provide a deeper understanding of this consumption trend, this research draws from social identity theory to investigate how meat reduction intentions vary depending on the type of consumer (standard consumer, meat reducer, or abstainer). Results from two experimental studies (total N = 260) show that when consumers are in the presence of a non‐meat consumer, they have higher willingness to reduce meat intake (Study 1) and that individuals belonging to a reducer or abstainer social identity are more inclined to make a consumption reduction, compared to standard meat consumers (Study 2). The underlying mechanism behind it is that people see non‐meat consumers as individuals with higher esteem and status, and therefore as people with a more positive and desired social identity. Additionally, when a descriptive or healthrelated social norm is used, the meat reduction intentions are strengthened. These findings allow us to realize that the desire to obtain pride and status as a positive social identity and to follow social norms, act as drivers in reducing meat consumption

Expressões de Comunicação: O Desenho de uma Linha de Investigação

p. 21-26O que se pretende com este artigo é delinear, de uma forma genérica e abrangente, o traçado para a Linha de Investigação: Expressões de Comunicação que envolve um conjunto de interesses científicos pedagógicos e artísticos, de forma a melhor contextualizar e caracterizar um destes projectos em desenvolvimento. Como a efectivação desta Linha de Investigação está em contínua progressão, não é possível determinar já categoricamente o seu percurso. Assim, no presente, esta linha de investigação caracteriza-se por acolher um conjunto de áreas do saber relacionadas com as expressões artísticas, mais concretamente a expressão plástica, a expressão oral e escrita, a expressão musical, a expressão dramática e a expressão corporal. Concebida no âmbito do contexto formativo da ESEPAF, esta linha pretende ir ao encontro das grandes problemáticas actuais que envolvem esta área do saber, orientando a sua prática para os interesses dos diferentes cursos ministrados nesta escola. Apresentam-se, como principais objectivos da linha, analisar, aprofundar e reflectir sobre as diversas expressões de comunicação em contextos associados à Educação de Infância, Educação Social e Ensino Básico (1.º Ciclo)

Export promotion agency for the Portuguese olive oil sector : a boost in exports of branded olive oil

Portugal is one of the main players on the olive oil sector. The production methods used, as the products’ quality, have been recognized by specialists. However, the difficult access to distribution channels abroad, the expensive distribution costs and lack of notoriety of olive oil and of Portuguese brands are some of the barriers on the export of branded olive oil, leading producers to sell branded olive oil mainly in Portugal and export in bulk. Exporting branded olive oil increases the reputation of the Portuguese products and exports in value. This thesis aims to fill a gap in the literature applying the theory on Export Promotion Agencies to this sector. An Agency to the olive oil sector in Portugal should be developed to boost the export of branded olive oil and help companies tackle these barriers, being beneficial for the sector that Casa do Azeite takes lead. The creation of an umbrella brand for high-quality Portuguese olive oils is suggested to increase the reputation and sales of branded olive oils. It is also suggested that Casa do Azeite creates export support programs and offers them to companies according to the export barriers they face and to their stage of export. With this collective effort, there are marketing cost-savings, customers perceive less risk when they buy a new product under the umbrella, brands that have less notoriety benefit from the reputation of stronger ones on the same umbrella and consumers still have the brand to conclude about the quality of the product.Portugal é um dos principais players do setor do azeite. Os métodos de produção adotados assim como a qualidade do produto são reconhecidos por especialistas. Contudo, a dificuldade de acesso aos canais de distribuição, os elevados custos de transporte, a falta de notoriedade do azeite e das marcas portuguesas apresentam-se como barreiras à exportação do azeite de marca, levando os produtores a vender azeite de marca sobretudo em Portugal e a exportar a granel. Exportar azeite de marca melhora a reputação do azeite e aumenta as exportações em valor. Esta tese aplica a teoria das Export Promotion Agencies a este setor em concreto. É necessária uma entidade que ajude as empresas deste setor a combater as barreiras à exportação, sendo vantajoso para o setor que seja a Casa do Azeite a assumir este papel. Sugere-se a criação de uma umbrella brand para os azeites portugueses de elevada qualidade de modo a aumentar a reputação e vendas dos azeites de marca. Sugere-se ainda que a Casa do Azeite crie programas de apoio à exportação e os ofereça às empresas em função das barreiras à exportação sentidas e do estágio de exportação em que se encontram. Com este esforço coletivo, há economia de custos relativos ao marketing, reduz-se o risco sentido pelos clientes ao comprarem um novo produto sobre a umbrella, as marcas com menor notoriedade beneficiam da reputação das mais fortes e os consumidores podem utilizar a marca como indicador da qualidade do produto