Investigação dos eventos apoptóticos induzidos por chalconas sintéticas derivadas de 1-naftaldeído e 2-naftaldeído sobre linhagens de células de leucemias agudas humanas

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013.As leucemias agudas são desordens heterogêneas do sistema hematopoiético caracterizadas pela expansão clonal de uma população de células neoplásicas malignas que sofrem bloqueio maturativo quanto à sua diferenciação. O tratamento mais efetivo para as leucemias, a quimioterapia, está associado a altas taxas de recidiva e a elevados índices de morbidade e mortalidade. Estudos demonstram que as chalconas e seus derivados possuem atividade citotóxica e apresentam potencial para o desenvolvimento de novos fármacos. Assim, o objetivo do presente estudo é a busca por novos compostos a partir de três chalconas sintéticas derivadas do 1- e do 2-naftaldeído que tenham atividade contra células leucêmicas com pouco ou nenhum efeito em células normais. Entre os compostos avaliados, a chalcona A1 apresentou resultados mais promissores e foi selecionada para estudos posteriores. Para os ensaios de citotoxicidade, as células K562, Jurkat, U937, Kasumi, NB4 e CEM foram incubadas com a chalcona A1 em concentrações crescentes por 24, 48 e 72 h. A viabilidade celular foi determinada pelo método do MTT, onde se observou que o composto reduziu a viabilidade celular das seis linhagens de forma dependente da concentração e do tempo de incubação. A fim de verificar a efetividade do composto em um modelo de tumor sólido, foram utilizadas células de adenocarcinoma de cólon humano HT-29. Os resultados demonstram que a chalcona A1 também apresentou citotoxicidade de forma dependente do tempo e da concentração, porém com CI50 mais elevada em comparação às linhagens leucêmicas. Para avaliar a seletividade do composto para células tumorais, a chalcona foi incubada com fibroblastos humanos de medula óssea (JMA) e com células mononucleadas de indivíduos saudáveis. A chalcona A1 não reduziu significativamente a viabilidade celular em ambos os modelos. A apoptose foi confirmada pela observação morfológica após coloração com brometo de etídio e laranja de acridina, pelo ensaio de fragmentação do DNA e por citometria de fluxo pelo método da Anexina V. A investigação do efeito no ciclo celular mostrou que o composto A1 causou bloqueio significativo em diferentes fases nas seis linhagens avaliadas. A fim de investigar os mecanismos pelos quais o composto causou morte celular, investigou-se o efeito da chalcona A1 no potencial mitocondrial e na expressão das proteínas survivina e KI-67 nas células K562, Jurkat e Kasumi, e das proteínas Bcl-2, Bax, FasR, AIF e caspase-3 nas linhagens K562 e Jurkat. Os resultados demonstraram que o composto reduziu o potencial mitocondrial, diminuiu a expressão da proteína antiapoptótica Bcl-2 e aumentou a expressão da proteína pró-apoptótica Bax, sugerindo que o mecanismo de morte celular envolve a via intrínseca. Na linhagem Jurkat, foi observado também aumento de FasR, o que indica o envolvimento da via extrínseca. Além disso, o mecanismo de ação da chalcona A1 envolve o aumento da expressão da caspase-3 e a diminuição da expressão da proteína antiapoptótica survivina e do marcador de proliferação celular KI-67. Em experimentos ex vivo, a chalcona A1 reduziu a viabilidade de células mononucleadas de oito pacientes portadores de diferentes tipos de leucemia aguda, o que confirma os resultados de citotoxicidade encontrados in vitro <br

Investigação de diferentes mecanismos apoptóticos induzidos por compostos de origem natural e sintética em células de neoplasias hematológicas

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017.As leucemias agudas são neoplasias malignas do sistema hematopoiético associadas a milhares de óbitos em todo o mundo. No presente trabalho foi avaliado o efeito citotóxico de 70 novas chalconas sintéticas e do composto natural GE1, uma quinona isolada de Eugenia hiemalis; e seus mecanismos de ação foram investigados em células de leucemia aguda. Inicialmente foram selecionadas as chalconas mais citotóxicas (JA3 e JA7) e foi demonstrado, pelo método do MTT, que, assim como GE1, os compostos reduziram a viabilidade celular de diferentes linhagens tumorais de maneira dependente do tempo e da concentração. Os três compostos apresentaram altos índices de seletividade e não apresentaram citotoxicidade significativa sobre células não neoplásicas. JA3, JA7 e GE1 bloquearam o ciclo celular de células K562 e Jurkat e diminuíram a expressão do marcador de proliferação celular KI67. A morte por apoptose foi confirmada pela avaliação da morfologia celular, pelo ensaio de fragmentação do DNA e por citometria de fluxo pelo método da anexina-V. Os compostos aumentaram a produção de EROS, diminuíram a expressão das proteínas antiapoptóticas Bcl-2 e Bcl-xL e aumentaram a expressão das proteínas pró-apoptóticas Bax e Bak. Isso levou a um extenso dano mitocondrial manifestado pela perda do ??m e liberação de fatores apoptogênicos como AIF e citocromo c. Além disso, os compostos aumentaram a expressão de FasR, diminuíram a expressão de survivina e induziram a clivagem de caspase-3 e PARP. A morte celular induzida por JA3 e JA7 envolve ainda o estresse no RE e um tipo imunogênico de apoptose. A prevenção do estresse no RE ou o bloqueio da maquinaria pró-apoptótica inibiu a morte celular mediada por JA3 e JA7, assim como o bloqueio da via Fas com a superexpressão de c-FLIP ou com o inibidor de caspase 8. Finalmente, a associação dos três compostos com citarabina e vincristina aumentou o efeito antileucêmico desses fármacos quando comparado aos compostos isolados. Os resultados apresentados fornecem novas informações sobre os mecanismos de morte dos compostos JA3, JA7 e GE1 e sugerem que os mesmos possam vir a representar alternativas promissoras ao tratamento convencional para as leucemias agudas.Abstract : Acute leukemias are malignant neoplasms of the hematopoietic system associated with thousands of deaths worldwide. In this study, it was evaluated the cytotoxic effect of 70 new synthetic chalcones and of the natural compound GE1, a quinone isolated from Eugenia hiemalis, and their death mechanisms were further investigated in acute leukemia cells. Initially, the most cytotoxic chalcones (JA3 and JA7) were selected and it was demonstrated, by the MTT method, that the compounds reduced the cell viability of different tumor cell lines in a concentration and time dependent manner. The three compounds were highly selective towards acute leukemia cells and were not significantly cytotoxic to non-neoplastic cells. JA3, JA7 and GE1 blocked the cell cycle of K562 and Jurkat cells and decreased the expression of the cell proliferation marker KI-67. Apoptotic cell death was confirmed by cell morphology, by DNA fragmentation and by flow cytometry using the annexin-V method. The results demonstrated that the compounds increased ROS production, decreased the expression of anti-apoptotic proteins Bcl-2 and Bcl-xL and increased the expression of pro-apoptotic proteins Bax and Bak. This resulted in an extensive mitochondrial damage manifested by ??m loss and by the release of apoptogenic factors such as AIF and cytochrome c. In addition, the compounds increased FasR expression, which also suggests the involvement of the extrinsic pathway, decreased survivin expression and induced caspase-3 and PARP cleavage. Cell death induced by chalcones JA3 and JA7 also involves ER stress and an immunogenic type of apoptosis. Preventing ER stress or blocking the positive regulation of the pro-apoptotic machinery inhibited JA3 and JA7-induced cell death, as well as the blockage of the Fas pathway by c-FLIP overexpression or by caspase-8 inhibitor. Finally, the association of the three compounds with the drugs cytarabine and vincristine increased the antileukemic effect of these drugs when compared to the isolated compounds. The results provide novel insights about the mechanisms involved in cell death induced by JA3, JA7 and GE1 and suggest that they might represent promising alternatives to conventional treatment for acute leukemia

Identification and assessment of the attributes that influence the decision to participate in running events in Brazil

The scant bibliography of sports marketing; the practical obstacles encountered in the field of sports management in Brazil; the sport s role in the development of society and its special moment in the country; and the specific case of running races as social&cultural phenomenon they all motivate the conducting of a study that can contribute with more professional sports management actions, oriented to the consumers. The number of running events has grown sharply in recent years, and the trend is to continue growing and developing. The increased competitiveness suggests that understading the consumer s decision process is important to the organizers, so they can promote events more synchronized with consumer s desires. This study aims to identify and assess the attributes of running events that influence the participants decision process. The research is fundamentally descriptive, with exploratory characteristics. The questionary is developed in the following steps: participant-observation of running events; discussion with focus group; and literature related to sports marketing, motivation for participating in sports events and event management. The instrument for data collection characterize the runner considering social and demographical characteristics, connection status with the sport, level of interest and participation in running events, and motivation to participate in these events. The sample is held for convenience and formed by 496 runners. The study identifies that the majority of Brazilian runners are classified in the attachement stage, characterized by a strong emotional connection and the self-identification as a runner; that these runners are motivated to participate in running events specially by two dimensions fitness and skill mastery; and that 58 attributes influence the decision process to participate in running events, being distance, date and price the three most influent. The 58 attributes are submitted to factor analysis, resulting in nine factors: safety, entertainment, physical characteristics, registration process, accessibility, information, reward, differentials, and basics. Significant differences of the influence generated by these attributes in the decision process are found when ANOVA is performed considering the division of runners in groups such as age, number of events concluded by year, connection stage, and degree of interest for various running events. Knowing the specifics of the behavior of diverse running groups is critical to ensure the organization of events that meet the consumers desires.A escassa bibliografia da área de marketing esportivo no Brasil, as dificuldades práticas observadas no campo da gestão esportiva, o papel do esporte no desenvolvimento da sociedade e seu momento no país, e o caso específico das corridas pedestres como fenômeno sociocultural contemporâneo, motivam a realização de estudo que contribua com uma gestão esportiva mais profissional e focada no consumidor. Os eventos de corrida pedestre cresceram de maneira acentuada nos últimos anos, e a tendência é que continuem se desenvolvendo. A maior competitividade sugere que conhecer o processo de decisão de participação é importante para que organizadores promovam eventos mais sintonizados com os desejos dos consumidores. O objetivo desta pesquisa consiste em identificar e avaliar os atributos de eventos de corrida pedestre que influenciam o processo de decisão de participação nesses eventos. O estudo é fundamentalmente descritivo, com características exploratórias. As perguntas para a elaboração do questionário são desenvolvidas em etapas: observação participante de eventos de corrida pedestre; discussão com grupo focal; e revisão da literatura de marketing esportivo, motivação para participação em eventos esportivos e gerenciamento de eventos. O instrumento de coleta caracteriza o corredor pedestre quanto a aspectos sociodemográficos, nível de participação e interesse nos eventos de corrida pedestre, estado de ligação com a corrida pedestre, e motivação para participação nos eventos. A amostra é realizada por conveniência e formada por 496 indivíduos. Identifica-se que a maior parte dos corredores se encontra no estado de ligação com a corrida, caracterizado por forte componente emocional e auto-identificação do indivíduo como corredor; que esses corredores são motivados especialmente por duas dimensões, a melhora da condição física e o domínio das habilidades de corrida; e que 58 atributos causam influência no processo de decisão de participação, sendo a distância do evento, o preço e a data de realização do mesmo os mais influentes. Os 58 atributos são submetidos à análise fatorial, que resulta em nove fatores: segurança, entretenimento, características físicas, processo de inscrição, acessibilidade, informações, recompensa, diferenciais e básicos. Diferenças significativas da influência desses atributos no processo de decisão são encontradas quando se realiza análise de variância, considerando divisão dos corredores em grupos de idade, número de eventos concluídos por ano, estágio de ligação, e interesse por diferentes eventos. Conhecer as particularidades de comportamento dos diversos grupos de corredores é fundamental para proporcionar eventos orientados a garantir a satisfação dos desejos dos consumidores.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

Efeito imediato do ortostatismo em pacientes internados na unidade de terapia intensiva de adultos

OBJETIVO: Analisar o nível de consciência, efeitos pulmonares e hemodinâmicos em pacientes intensivos durante a posição ortostática. MÉTODOS: Estudo realizado de abril de 2008 a julho de 2009 na unidade de terapia intensiva adulto do HC-UNICAMP. Foram incluídos quinze pacientes que estiveram mecanicamente ventilados por mais de sete dias; traqueostomizados; em nebulização intermitente; pressão inspiratória máxima inferior a -25cmH2O; índice de Tobin inferior a 105; drive ventilatório preservado, ausência de sedativos; pressão parcial de oxigênio arterial maior que 70mmHg; saturação de oxigênio maior que 90% e estabilidade hemodinâmica. Os parâmetros avaliados, nas inclinações de 0º, 30º e 50º, foram o nível de consciência; reflexo de blinking; cirtometria tóraco-abdominal; capacidade vital; volume corrente; volume minuto ; força da musculatura respiratória e sinais vitais. RESULTADOS: Não houve alteração do nível neurológico. A freqüência respiratória (f) e V E reduziram-se em 30º com posterior aumento em 50º, no entanto, essas alterações não foram estatisticamente significativas. A cirtometria abdominal e a pressão expiratória máxima apresentaram aumento, novamente sem significância estatística. Em relação à pressão inspiratória máxima e a capacidade vital observou-se aumento estatisticamente significante na comparação entre as angulações 50º e 0º. Já o volume corrente aumentou ao longo do tempo, na comparação entre as angulações 30º e 0º, e entre 50º e 0º. A pressão arterial média sofreu incremento somente na comparação entre 50º e 0º. A freqüência cardíaca elevou-se ao longo do tempo e quando comparada entre 30ºe 0º, 50º e 0º, e 50º e 30º. CONCLUSÃO: O ortostatismo passivo proporcionou melhora do volume corrente, capacidade vital , pressão inspiratória máxima, e aumento da frequência cardíaca e pressão arterial média em pacientes críticos

Molecular features of sexual steroids on cartilage and bone

In Brazil, the increase in the reported cases of degenerative diseases of articular cartilage is 20% per year, meaning that 200,000 Brazilians develop degenerative joint diseases every year, which have a negative impact on bone mass. This study shows evidence that hormone production of sexual steroids (estrogens, progestogens, and androgens) have an influence on cartilage quality, as well as on bone mass. Therefore, this review aimed to analyze literature data on the molecular and genic action of sexual steroids on hyaline cartilage and bone physiology, as well as osteoarthritis interference on the quality of these structures

Concentration of glycosaminoglycan in ovariectomized mice uterus after treatment with ovarian steroids

The aim of this study was to evaluate the amount of non-and sulfated glycosaminoglycans in the ovariectomized mice uterus, after treatment with ovarian steroids. For this purpose, 50 adult female mice were divided into five groups with 10 animals/each: control group: CG (ovary intact), and ovariectomized groups: OG (vehicle), EG (estradiol), PG (progesterone) and EPG (estradiol combined to progesterone). The treatments started 30 days after ovariectomy. All the animals were treated for 50 consecutive days. These hormones were administered in a sterile oily solution via gavage. Twenty-four hours after the last treatment, all animals were euthanized, removing the uterine horn for biochemical analyses. To quantify, the hyaluronic acid (HA) used ELISA-like fluorometric assay, and the sulfated glycosaminoglycans (GAGs) used agarose gel electrophoresis. The amount of HA was significantly higher in the group treated with progesterone (PG) compared to the others groups (p < 0.05), and in the group treated with estradiol (EG), the amount of chondroitin/dermatan sulfate was significantly higher compared to the others groups (p < 0.05), and in the group treated with progesterone (PG), the amount of heparan sulfate was significantly lower compared to the others groups, except to control group (p < 0.05). Our results showed that the estroprogestative therapy after long time (50 days) profoundly affected the amount of glycosaminoglycans in uterine. These changes may be indicative of uterine pathology such as the development of tumor.Foundation for Research Support of Sao Paulo (FAPESP) [2009/52758-9]Univ Fed Sao Paulo, Dept Gynecol, Sao Paulo, SP, BrazilUniv Fed Sao Paulo, Dept Morphol & Genet, Sao Paulo, SP, BrazilUniv Sao Paulo, Fac Med, Hosp Clin, Dept Obstet & Gynecol,Gynecol Div, Sao Paulo, BrazilUniv Fed Sao Paulo, Div Mol Biol, Dept Biochem, Sao Paulo, SP, BrazilUniv Fed Sao Paulo, Dept Gynecol, Sao Paulo, SP, BrazilUniv Fed Sao Paulo, Dept Morphol & Genet, Sao Paulo, SP, BrazilUniv Fed Sao Paulo, Div Mol Biol, Dept Biochem, Sao Paulo, SP, BrazilFAPESP: 2009/52758-9Web of Scienc

A novel thiosemicarbazone as a promising effective and selective compound for acute leukemia

Acute leukemias are a heterogeneous group of aggressive malignant neoplasms associated with severe morbidities due to the nonselectivity of current chemotherapeutic drugs to nonmalignant cells. The investigation of novel natural and synthetic structures that might be used for the development of new drugs with greater efficiency and selectivity to leukemic cells is mandatory. In this context, thiosemicarbazones have been well described in the literature by their several biological properties and their reaction is known as versatile, low-cost, and highly chemoselective. With this perspective, this study aimed to investigate the cytotoxic effect and the main death mechanisms of a novel thiosemicarbazone (LAP17) on acute leukemia cell lines K562 and Jurkat. The results show that the strong cytotoxic effect of LAP17 to leukemic cells is due to apoptosis induction, which resulted in caspase-3 activation and DNA fragmentation. Intrinsic apoptosis seems to be related to the inversion of Bax/Bcl-2 expression, Delta psi(m) loss, and AIF release, whereas extrinsic apoptosis was initiated by FasR. Gene-expression profiling of HL-60 cells treated with LAP17 by the microarray technique revealed a significant enrichment of gene sets related to cell cycle arrest at G2/M. Accordingly, K562 and Jurkat cells treated with LAP17 revealed a clear arrest at G2/M phase. Taking into consideration that LAP17 was not cytotoxic to nonhematological cells (peripheral blood mononuclear cell and erythrocytes), these results suggest that LAP17 is a promising new compound that might be used as a prototype for the development of new antileukemic agents308828837CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQCOORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPESnão temnão te