Caracterização de enzimas em peçonhas animais : identificação de fosfolipases do escorpião Hadrurus gerstchi e atividades enzimáticas da arraia Potamotrygon falkneri

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2017.Peçonhas animais são misturas complexas de componentes cuja função está relacionada com a defesa ou captura/digestão da presa e essa composição é variável de acordo com o grupo filogenético, distribuição geográfica, ontogenia, sexo, habitat, dieta. Dentre os componentes estão proteínas com atividade enzimática ou não, peptídeos vasoativos, aminas biogênicas, aminoácidos livres, lipídeos, carboidratos, ânions e cátions. Este estudo isolou duas fosfolipases presentes na peçonha do escorpião Hadrurus gerstchi e analisou a composição enzimática da peçonha da arraia Potamotrygon falkneri com o objetivo de contribuir para o conhecimento da composição enzimática dessas peçonhas. Na peçonha de Hadrurus gerstchi foram isoladas duas fosfolipases. A primeira delas como massa molecular de 14 kDa, atividade específica de 13.529 U/mg, pH ótimo de atividade em 8,5, temperatura ótima de atividade entre 35-40ºC, com estabilidade mantida até temperatura de 30ºC. A segunda fosfolipase apresentou massa molecular de 11 kDa, atividade específica de 7.135 U/mg, pH ótimo de atividade 8,0 e estável até a temperatura de 10ºC. As duas enzimas são cálcio dependentes o que sugere pertencerem ao grupo das fosfolipase A2 e mostraram importante atividade hemolítica e edematogênica. A peçonha de P. falkneri foi testada frente às atividades enzimáticas de fosfolipase, hialuronidase, 5’nucleotidase, fosfodiesterase, L-aminoácido oxidase e atividades proteolíticas de colagenase, elastase, substratos cromogênicos de azocaseina e azoalbumina e atividade fibrinogenolítlica. A peçonha apresentou resultados positivos para a maioria dos ensaios, com exceção de fosfodiesterase, L-aminoácido oxidase e atividade fibrinogenolítica, sendo que hialuronidase foi a enzima com maior atividade, seguida das enzimas proteolíticas, indicando a participação destas enzimas na fisiopatologia do envenenamento. Desta forma pode se concluir, que apesar de componentes comuns entre as duas espécies, a função destes componentes é diferente, quando se considera a biologia do animal. As arraias possuem uma peçonha com composição aparentemente mais simples do que a dos escorpiões, no sentido de qualidade e quantidade dos componentes. As moléculas, apesar de complexas, uma vez que possuem alta massa molecular e de arranjos estruturais complexos, parecem estar voltadas apenas para a função de defesa, provocando uma sintomatologia muito específica, caracterizada por um processo inflamatório grave, porém local, enquanto que a peçonha escorpiônica, além da defesa, também é utilizada para a captura e paralisia da presa.Animal venoms are complex mixtures of components whose function is related to the defense or capture/digestion of prey and this composition is variable according to the phylogenetic group, geographic distribution, ontogeny, sex, habitat, diet. Among the components are proteins with enzymatic activity or not, vasoactive peptides, biogenic amines, free amino acids, lipids, carbohydrates, anions and cations. This study isolated two phospholipases present in the venom of the scorpion Hadrurus gerstchi and analyzed the enzymatic composition of the venom from Potamotrygon falkneri streak with the objective of contributing to the knowledge of the enzymatic composition of these venoms. In the venom of Hadrurus gerstchi two phospholipases were isolated. The first one had a molecular mass of 14 kDa, a specific activity of 13,529 U/mg, optimum activity pH of 8.5, optimal activity temperature of 35-40ºC, with a stability maintained at a temperature of 30ºC. The second phospholipase had molecular mass of 11 kDa, specific activity of 7,135 U/mg, optimum pH of activity 8.0 and stable until the temperature of 10ºC. The two enzymes are calcium dependent, suggesting that they belong to the group of phospholipase A2 and showed important hemolytic and edematogenic activity. The P. falkneri venom was tested against the enzymatic activities of phospholipase, hyaluronidase, 5'nucleotidase, phosphodiesterase, L-amino acid oxidase and proteolytic activities of collagenase, elastase, chromogenic substrates of azocasein and azoalbumin, and fibrinogenolytic activity. The venom presented positive results for most of the tests, with the exception of phosphodiesterase, Lamino acid oxidase and fibrinogenolytic activity, and hyaluronidase was the enzyme with the highest activity, followed by proteolytic enzymes, indicating the participation of these enzymes in the physiopathology of the poisoning. In this way it can be concluded that despite the common components between the two species, the function of these components is different when considering the biology of the animal. Streaks have a venom with composition apparently simpler than that of scorpions, in the sense of quality and quantity of the components. The molecules, although complex, since they have high molecular mass and complex structural arrangements, seem to be oriented only to the defense function, provoking a very specific symptomatology, characterized by a severe but local inflammatory process, while the venom scorpion, besides the defense, is also used for the capture and paralysis of the prey

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIBACTERIANA DO VENENO BRUTO DE Crotalus durissus terrificus

Os venenos de serpentes são reconhecidos como uma fonte promissora de substâncias farmacologicamente ativas e potencialmente úteis para o desenvolvimento de novas drogas antimicrobianas. Esse trabalho teve como objetivo investigar a atividade antimicrobiana do veneno de Crotalus durissus terrificus contra várias bactérias. A determinação da atividade antibacteriana foi realizada pelo método de microdiluição em placas e a ação na estrutura do envelope bacteriano pelo ensaio violeta de cristal. As proteínas do extrato bruto foram separadas por eletroforese e caracterizadas quanto à sua atividade proteolítica. O veneno de C. d. terrificus apresentou ação antimicrobiana frente bactérias gram-positivas e gram-negativas. Os valores de MIC foram definidos para Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (62.5 μg/ mL), Staphylococcus aureus ATCC 25923 (125 μg/mL) e Micrococcus luteus ATCC 9341 (≤ 500 μg/mL). Para Salmonella enterica serovar typhimurium ATCC 14028 e Corynebacterium glutamicum ATCC 13032, o decréscimo no crescimento bacteriano não foi detectado visualmente, mas foi estatisticamente significante. O teste do cristal violeta demonstrou que o veneno bruto aumentou a permeabilidade das células bacterianas e o perfil de proteína secretada está em consonância com relatos anteriores. Os resultados sugerem que as proteínas com atividade lítica contra bactérias no veneno de C. d. terrificus merecem atenção para uma melhor caracterização, uma vez que podem trazer reforços para o escasso arsenal terapêutico empregado para combater a multirresistência microbiana.Palavras-chave: veneno de cascavel, ação antimicrobiana, envelope celular, atividade proteolítica

DIFFUSION OF THE TECHNOLOGICAL INNOVATION e-SUS AB: ACCEPTANCE OR REJECTION?

Objetivo: analisar a difusão da inovação tecnológica “estratégia e-SUS AB” em uma equipe de saúde da família do oestede Minas Gerais. Método: estudo de caso único de abordagem qualitativa à luz da Teoria da Difusão da Inovação e doModelo de Aceitação de Tecnologia. A coleta de dados compreendeu entrevista e observação direta do cotidiano detrabalho de uma equipe. Os dados foram sistematizados no software Atlas ti e analisados através da Análise de Conteúdo.Resultados: a inovação proporciona suporte no planejamento da assistência por dispor de dados individualizados, alémde aprimorar o cotidiano de trabalho. Entretanto, sua difusão tem gerado, predominantemente, sobrecarga de trabalhoe outras dificuldades que se conformam como limitadores de sua aceitação pelos profissionais de saúde. Conclusão: adifusão da estratégia e-SUS AB como uma inovação tecnológica tem apresentado situações potencializadoras de suaaceitação, porém predominaram situações que podem conduzir à sua rejeição.Objetivo: analizar la difusión de la innovación tecnológica “estrategia e-SUS AB” en un equipo de salud de la familia del oeste de Minas Gerais.Método: estudio de caso único con enfoque cualitativo a la luz de la Teoría de Difusión de Innovaciones y del Modelo de Aceptación de Tecnología.Para recolectar los datos se llevaron a cabo entrevista y observación directa del trabajo cotidiano de un equipo. Los datos fueron sistematizadosen el software Atlas ti y analizados a través del Análisis de Contenido. Resultados: la innovación provee apoyo en la planificación de la atenciónpor disponer de datos individualizados, además de perfeccionar el trabajo cotidiano. Sin embargo, su difusión ha generado predominantementesobrecarga de trabajo y otras dificultades que representan limitadores de su aceptación por los profesionales de salud. Conclusión: la difusión de laestrategia e-SUS AB como una innovación tecnológica ha presentado situaciones que potencializan su aceptación, pero predominaron situacionesque pueden llevar a su rechazo.Objective: analyze the diffusion of the technological innovation “e-SUS AB strategy” in a Family health team in the West of Minas Gerais. Method:single case study with a qualitative approach in the light of the Innovation Diffusion Theory and the Technology Acceptance Model. The datacollection included an interview and direct observation of a team’s daily work. The data were systemized in the software Atlas ti and analyzed throughContent Analysis. Results: the innovation supports the care planning because it makes individualized data available and improves the daily work.Nevertheless, its diffusion has predominantly produced a work overload and other difficulties that limit its acceptance by the health professionals.Conclusion: the diffusion of the e-SUS AB strategy as a technological innovation has presented situations that strengthen its acceptance, but situationsthat can lead to its rejection were predominant

Innovation of Textiles through Natural By-Products and Wastes

Nowadays, the competitiveness of the textile industry and the consumers’ interest have been increasing the demand for innovative and functional textiles. Allied to this, sustainable developments are playing an increasingly important role in the textile industry. Such concerns led to a new development strategy based on the valorization of bio-based wastes and by-products of different industries, inserting this in the circular economy paradigm. These bio-based wastes and by-products come from several industries, as the agri-food industry. These resources present an enormous potential for valorization in the textile finish due to their intrinsic properties (antimicrobial, prebiotic, antioxidant activity, among others). This chapter will review the latest innovation and textile product development through different by-products and wastes, their main properties and characteristics and the advantages that they offer to the textile industry

SARS-CoV-2 introductions and early dynamics of the epidemic in Portugal

Genomic surveillance of SARS-CoV-2 in Portugal was rapidly implemented by the National Institute of Health in the early stages of the COVID-19 epidemic, in collaboration with more than 50 laboratories distributed nationwide. Methods By applying recent phylodynamic models that allow integration of individual-based travel history, we reconstructed and characterized the spatio-temporal dynamics of SARSCoV-2 introductions and early dissemination in Portugal. Results We detected at least 277 independent SARS-CoV-2 introductions, mostly from European countries (namely the United Kingdom, Spain, France, Italy, and Switzerland), which were consistent with the countries with the highest connectivity with Portugal. Although most introductions were estimated to have occurred during early March 2020, it is likely that SARS-CoV-2 was silently circulating in Portugal throughout February, before the first cases were confirmed. Conclusions Here we conclude that the earlier implementation of measures could have minimized the number of introductions and subsequent virus expansion in Portugal. This study lays the foundation for genomic epidemiology of SARS-CoV-2 in Portugal, and highlights the need for systematic and geographically-representative genomic surveillance.We gratefully acknowledge to Sara Hill and Nuno Faria (University of Oxford) and Joshua Quick and Nick Loman (University of Birmingham) for kindly providing us with the initial sets of Artic Network primers for NGS; Rafael Mamede (MRamirez team, IMM, Lisbon) for developing and sharing a bioinformatics script for sequence curation (https://github.com/rfm-targa/BioinfUtils); Philippe Lemey (KU Leuven) for providing guidance on the implementation of the phylodynamic models; Joshua L. Cherry (National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, National Institutes of Health) for providing guidance with the subsampling strategies; and all authors, originating and submitting laboratories who have contributed genome data on GISAID (https://www.gisaid.org/) on which part of this research is based. The opinions expressed in this article are those of the authors and do not reflect the view of the National Institutes of Health, the Department of Health and Human Services, or the United States government. This study is co-funded by Fundação para a Ciência e Tecnologia and Agência de Investigação Clínica e Inovação Biomédica (234_596874175) on behalf of the Research 4 COVID-19 call. Some infrastructural resources used in this study come from the GenomePT project (POCI-01-0145-FEDER-022184), supported by COMPETE 2020 - Operational Programme for Competitiveness and Internationalisation (POCI), Lisboa Portugal Regional Operational Programme (Lisboa2020), Algarve Portugal Regional Operational Programme (CRESC Algarve2020), under the PORTUGAL 2020 Partnership Agreement, through the European Regional Development Fund (ERDF), and by Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT).info:eu-repo/semantics/publishedVersio

CICATRIZAÃ?Ã?O DE FERIDAS INDUZIDAS POR PEÃ?ONHA DE BOTHROPS MOOJENI PELO EXTRATO DE CROTON URUCURANA

Resumo: com o objetivo de avaliar a ação cicatrizante do extrato etanólico da casca de Croton urucurana em feridas cutâneas de camundongos, induzidas pelo veneno de Bothrops moojeni, realizamos um experimento com 60 ratos da linhagem Swiss distribuídos em cinco grupos. As feridas apresentam um processo de cicatrização mais acelerado promovendo neoformação dos folículos pilosos e reparação fibrosa, comprovando a ação angiogênica do produto Palavras-chave: Croton urucurana. Cicatrização. Angiogênese. Bothrops moojen

Chapter Innovation of Textiles through Natural By-Products and Wastes

Nowadays, the competitiveness of the textile industry and the consumers’ interest have been increasing the demand for innovative and functional textiles. Allied to this, sustainable developments are playing an increasingly important role in the textile industry. Such concerns led to a new development strategy based on the valorization of bio-based wastes and by-products of different industries, inserting this in the circular economy paradigm. These bio-based wastes and by-products come from several industries, as the agri-food industry. These resources present an enormous potential for valorization in the textile finish due to their intrinsic properties (antimicrobial, prebiotic, antioxidant activity, among others). This chapter will review the latest innovation and textile product development through different by-products and wastes, their main properties and characteristics and the advantages that they offer to the textile industry

UPLC-MS-ESI-QTOF Analysis and Antifungal Activity of Aqueous Extracts of Spondias tuberosa

This study aimed to identify the chemical composition of the Spondias tuberosa aqueous leaf and root extracts (EALST and EARST) and to evaluate their effect, comparatively, against opportunistic pathogenic fungi. Ultra-Performance Liquid Chromatography Coupled to a Quadrupole/Time of Flight System (UPLC-MS-ESI-QTOF) was employed for chemical analysis. Candida albicans and C. tropicalis standard strains and clinical isolates were used (CA INCQS 40006, CT INCQS 40042, CA URM 5974, and CT URM 4262). The 50% Inhibitory Concentration for the fungal population (IC50) was determined for both the intrinsic action of the extracts and the extract/fluconazole (FCZ) associations. The determination of the Minimum Fungicidal Concentration (MFC) and the verification of effects over fungal morphological transitions were performed by subculture in Petri dishes and humid chambers, respectively, both based on micro-dilution. UPLC-MS-ESI-QTOF analysis revealed the presence of phenolic and flavonoid compounds. The association of the extracts with fluconazole, resulted in IC50 values from 2.62 µg/mL to 308.96 µg/mL. The MFC of the extracts was ≥16,384 µg/mL for all tested strains, while fluconazole obtained an MFC of 8192 µg/mL against C. albicans strains. A reduction in MFC against CA URM 5974 (EALST: 2048 µg/mL and EARST: 1024 µg/mL) occurred in the extract/fluconazole association