CD95 recruits PLCγ1 to trigger a calcium response promoting Th17 accumulation in inflamed organs of lupus mice

CD95 ligand (CD95L) is expressed by immune cells and triggers apoptotic death. Metalloprotease-cleaved CD95L (cl-CD95L) is released into the bloodstream but does not trigger apoptotic signaling. Hence, the pathophysiological role of cl-CD95L remains unclear. We observed that skin-derived endothelial cells from systemic lupus erythematosus (SLE) patients expressed CD95L, and that after cleavage, cl-CD95L promoted T helper 17 (Th17) lymphocyte transmigration across the endothelial barrier at the expense of T regulatory cells. T cell migration relied on a direct interaction between the CD95 domain called calcium-inducing domain (CID) and the Src homology 3 domain of phospholipase Cγ1. Th17 cells stimulated with cl-CD95L produced sphingosine-1-phosphate (S1P), which promoted endothelial transmigration by activating the S1P receptor 3. We generated a cell-penetrating CID peptide that prevented Th17 cell transmigration and alleviated clinical symptoms in lupus mice. Therefore, neutralizing the CD95 non-apoptotic signaling pathway may be attractive therapeutic approach for SLE treatment

CD95-mediated calcium signaling promotes T helper 17 trafficking to inflamed organs in lupus-prone mice

CD95 ligand (CD95L) is expressed by immune cells and triggers apoptotic death. Metalloprotease-cleaved CD95L (cl-CD95L) is released into the bloodstream but does not trigger apoptotic signaling. Hence, the pathophysiological role of cl-CD95L remains unclear. We observed that skin-derived endothelial cells from systemic lupus erythematosus (SLE) patients expressed CD95L and that after cleavage, cl-CD95L promoted T helper 17 (Th17) lymphocyte transmigration across the endothelial barrier at the expense of T regulatory cells. T cell migration relied on a direct interaction between the CD95 domain called calcium-inducing domain (CID) and the Src homology 3 domain of phospholipase Cγ1. Th17 cells stimulated with cl-CD95L produced sphingosine-1-phosphate (S1P), which promoted endothelial transmigration by activating the S1P receptor 3. We generated a cell-penetrating CID peptide that prevented Th17 cell transmigration and alleviated clinical symptoms in lupus mice. Therefore, neutralizing the CD95 non-apoptotic signaling pathway could be an attractive therapeutic approach for SLE treatment

Métabolites réactifs des anti-inflammatoires non stéroïdiens : bases structurales de leurs interactions avec les cibles protéiques impliquées dans les processus inflammatoires

Non disponible / Not availableLe mode d'action principal des anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) est l'inhibition des cyclooxygénases (COX), enzymes majeures de la synthèse des prostaglandines. La découverte de deux isoformes de COX n'a permis d'expliquer qu'en partie l'absence de corrélation entre les effets observés in vitro et l'effet pharmacologique in vivo. Une explication possible à ces divergences est l'implication de métabolites des AINS, tels les dérivés glucuroniques ou les thioesters de coenzyme A formés lors de l'inversion chirale. La réactivité de ces métabolites pour certaines protéines a en effet été mise en évidence récemment. Elle est supposée responsable d'effets indésirables, mais pourrait aussi conduire à des inhibitions enzymatiques impliquées dans l'activité thérapeutique des AINS. Cette étude est donc fondée sur deux hypothèses: celle d'une participation des métabolites conjugués au mode d'action des AINS, et celle de l'existence d'autres cibles protéiques que COX pour ces médicaments ou leurs métabolites. Nous avons dans un premier temps mis au point une synthèse chimique de l'acyt-CoA des 2 énantiomères du kétoprofène (KPF), ainsi que cette d'un analogue non hydrolysable et non acylant de ce métabolite. A l'aide de modèles cellulaires, nous avons montré que nos métabolites conjugués sont inhibiteurs de la production de prostaglandines. Les IC50 mesurées sont environ 10 fois supérieures à celle de la motécule parent, mais restent compatibles avec une participation des métabolites à l'effet du médicament. En revanche, la nature de l'inhibition les distingue du KPF, puisque le glucuronide est inhibiteur partiellement irréversible, et l'acyl-CoA totalement irréversible de COX-2 et essentiellement réversible de COX-1. L'utilisation d'enzymes purifiées a permis de confirmer une inhibition directe des COX, ainsi que l'irréversibilité de l'inhibition due à l'acyl-CoA. Elle révèle également que cette inhibition s'accompagne d'une formation d'adduits du KPF. Une acylation sélective de COX-2 par rapport à COX-1 a pu être montrée au niveau cellulaire, ce qui suggère que l'irréversibilité de l'inhibition est due à l'acylation. L'action particulièrement intéressante de l'acyl-CoA du médicament suggère qu'elle puisse constituer, pour des dérivés endogènes, une voie de régulation physiologique de l'activité de COX-2. Nous avons donc défini le profil d'expression des enzymes produisant les acyl-CoA endogènes, en réponse à un stimulus inflammatoire et parallèlement à COX-2. L'expression coordonnée de ces enzymes tend à confirmer cette possibilité. Plusieurs protéines autres que COX-2 constituent des cibles du métabolite, comme nous l'avons constaté par la formation d'adduits. Nous avons cherché à les caractériser en examinant s'il existait un domaine commun, et en utilisant l'albumine comme protéine modèle. Un domaine de fixation des acyl-CoA, conservé chez de nombreuses protéines palmitoylées in vivo, a ainsi été mis en évidence. La détection théorique de ce domaine a alors été utilisée comme outil de prédiction de la sensibilité d'une protéine aux acyl-CoA. Parmi les protéines impliquées dans les processus inflammatoires, nous avons ainsi identifié ACS-1, Cav-1, iPLA2 et iNOS comme cibles; nous avons confirmé leur acylation in situ. Ces études ont donc montré in vitro l'importance des métabolites d'AINS dans leur activité pharmacologique, en particulier par fixation irréversible des acyl-coA sur des cibles protéiques. Elles permettent ainsi une meilleure connaissance des mécanismes moléculaires expliquant les effets anti-inflammatoires, et peuvent apporter des éléments pour la recherche de thérapeutiques articulaires plus efficaces et mieux tolérées

Métabolites réactifs des anti-inflammatoires non stéroïdiens (bases structurales de leurs interactions avec les cibles protéiques impliquées dans les processus inflammatoires)

Le mode d'action principal des anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) est l'inhibition des cyclooxygénases (COX), enzymes majeures de la synthèse des prostaglandines. La découverte de deux isoformes de COX n'a permis d'expliquer qu'en partie l'absence de corrélation entre les effets observés in vitro et l'effet pharmacologique in vivo. Une explication possible à ces divergences est l'implication de métabolites des AINS, tels les dérivés glucuroniques ou les thioesters de coenzyme A formés lors de l'inversion chirale. La réactivité de ces métabolites pour certaines protéines a en effet été mise en évidence récemment. Elle est supposée responsable d'effets indésirables, mais pourrait aussi conduire à des inhibitions enzymatiques impliquées dans l'activité thérapeutique des AINS. Cette étude est donc fondée sur deux hypothèses: celle d'une participation des métabolites conjugués au mode d'action des AINS, et celle de l'existence d'autres cibles protéiques que COX pour ces médicaments ou leurs métabolites. Nous avons dans un premier temps mis au point une synthèse chimique de l'acyt-CoA des 2 énantiomères du kétoprofène (KPF), ainsi que cette d'un analogue non hydrolysable et non acylant de ce métabolite. A l'aide de modèles cellulaires, nous avons montré que nos métabolites conjugués sont inhibiteurs de la production de prostaglandines. Les IC50 mesurées sont environ 10 fois supérieures à celle de la motécule parent, mais restent compatibles avec une participation des métabolites à l'effet du médicament. En revanche, la nature de l'inhibition les distingue du KPF, puisque le glucuronide est inhibiteur partiellement irréversible, et l'acyl-CoA totalement irréversible de COX-2 et essentiellement réversible de COX-1. L'utilisation d'enzymes purifiées a permis de confirmer une inhibition directe des COX, ainsi que l'irréversibilité de l'inhibition due à l'acyl-CoA. Elle révèle également que cette inhibition s'accompagne d'une formation d'adduits du KPF. Une acylation sélective de COX-2 par rapport à COX-1 a pu être montrée au niveau cellulaire, ce qui suggère que l'irréversibilité de l'inhibition est due à l'acylation. L'action particulièrement intéressante de l'acyl-CoA du médicament suggère qu'elle puisse constituer, pour des dérivés endogènes, une voie de régulation physiologique de l'activité de COX-2. Nous avons donc défini le profil d'expression des enzymes produisant les acyl-CoA endogènes, en réponse à un stimulus inflammatoire et parallèlement à COX-2. L'expression coordonnée de ces enzymes tend à confirmer cette possibilité. Plusieurs protéines autres que COX-2 constituent des cibles du métabolite, comme nous l'avons constaté par la formation d'adduits. Nous avons cherché à les caractériser en examinant s'il existait un domaine commun, et en utilisant l'albumine comme protéine modèle. Un domaine de fixation des acyl-CoA, conservé chez de nombreuses protéines palmitoylées in vivo, a ainsi été mis en évidence. La détection théorique de ce domaine a alors été utilisée comme outil de prédiction de la sensibilité d'une protéine aux acyl-CoA. Parmi les protéines impliquées dans les processus inflammatoires, nous avons ainsi identifié ACS-1, Cav-1, iPLA2 et iNOS comme cibles; nous avons confirmé leur acylation in situ. Ces études ont donc montré in vitro l'importance des métabolites d'AINS dans leur activité pharmacologique, en particulier par fixation irréversible des acyl-coA sur des cibles protéiques. Elles permettent ainsi une meilleure connaissance des mécanismes moléculaires expliquant les effets anti-inflammatoires, et peuvent apporter des éléments pour la recherche de thérapeutiques articulaires plus efficaces et mieux tolérées.NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocSudocFranceF

CD95 Structure, Aggregation and Cell Signaling

International audienceCD95 is a pre-ligand-associated transmembrane (TM) receptor. The interaction with its ligand CD95L brings to a next level its aggregation and triggers different signaling pathways, leading to cell motility, differentiation or cell death. This diversity of biological responses associated with a unique receptor devoid of enzymatic property raises the question of whether different ligands exist, or whether the fine-tuned control of CD95 aggregation and conformation, its distribution within certain plasma membrane sub-domains or the pattern of post-translational modifications account for this such broad-range of cell signaling. Herein, we review how the different domains of CD95 and their post-translational modifications or the different forms of CD95L can participate in the receptor aggregation and induction of cell signaling. Understanding how CD95 response goes from cell death to cell proliferation, differentiation and motility is a prerequisite to reveal novel therapeutic options to treat chronic inflammatory disorders and cancers

The Prins reaction using ketones: rationalization and application toward the synthesis of the portentol skeleton.

International audienceWe report a TMSI-promoted Prins cyclization reaction with ketones as carbonyl partners to prepare polysubstituted chiral spirotetrahydropyrans. In the presence of racemic 2-methylcyclohexanone a dynamic kinetic resolution occurred affording one stereoisomer. The observed enantiospecificity has been rationalized by DFT calculation

Corrigendum to “Synthesis of new mixed phenol/heterocyclic derivatives and studies of their activity as inhibitors of Bax/Bcl-xL interaction” [Tetrahedron 70 (2014) 301–311]

International audienceno abstrac

Design, synthesis and biological evaluation of new inhibitors of Bax/Bcl-xL interaction in cancer cells.

International audienceWe describe the synthesis of a series of new molecules containing phenol and triazoles moieties, compounds which have been evaluated for their ability to inhibit Bax/Bcl-xL interactions in cancer cells, by using BRET assays, and to induce cell death. Several derivatives exhibit a very promising activity, being more potent than the reference compounds acylpyrogallol A and ABT-737. These preliminary results demonstrate that derivatives of this family can be attractive to develop new molecules with potent anticancer activity

Synthesis of new mixed phenol/heterocyclic derivatives and studies of their activity as inhibitors of Bax/Bcl-xL interaction

International audienc

The Prins Reaction Using Ketones: Rationalization and Application toward the Synthesis of the Portentol Skeleton

We report a TMSI-promoted Prins cyclization reaction with ketones as carbonyl partners to prepare polysubstituted chiral spirotetrahydropyrans. In the presence of racemic 2-methylcyclohexanone a dynamic kinetic resolution occurred affording one stereoisomer. The observed enantiospecificity has been rationalized by DFT calculation