O papel do complexo TCTEX1D4/PPP1 na proliferação e migração celular

Mestrado em Biomedicina MolecularProstate cancer is one of the most prevalent and incident cancer in men, being a disquieting cause of men’s death worldwide. The widespread implementation of prostate-specific antigen (PSA) screening and the improvements on prostate cancer therapy have been leading to a markedly decrease in mortality. However, PSA use is controversial since it has been leading to the diagnosis and treatment of several prostate cancer cases that would not otherwise cause symptoms or threaten man’s life. Hence, the establishment of a panel of biomarkers and the discovery of new therapeutical targets for prostate cancer is a pressing need. Changes in several cell signaling pathways have been associated with de onset, development, and progression of prostate cancer. TGFβ signaling counterbalanced the mitogenic effects of androgens, thus being one of the most prominent pathways involved in controlling prostate growth. Mediators of TGFβ signaling pathway are strictly regulated by several mechanisms, among which reversible phosphorylation. This process involves a fine equilibrium between the action of protein kinases and phosphatases. PPP1 is a major serine/threonine phosphatase that regulates numerous cellular events, including TGFβ signaling. The majority of its functions are accomplished by association with regulatory subunits, known as PPP1-interacting proteins (PIPs). Recently, a novel PIP was found: TCTEX1D4, a dynein light chain protein that was already established as an interactor of TGFβ receptors. Its functions, nevertheless, remain poorly understood. This work identified TCTEX1D4 as an anti-proliferative agent in human prostate cells. Also, TCTEX1D4 activity seems to be regulated through binding to PPP1, as the disruption of TCTEX1D4/PPP1 complex resulted in enhancement of cell proliferation inhibition. Alternatively or in addition, TCTEX1D4 may indirectly regulate PPP1 function by modulating its subcellular localization. This complex doesn´t appear to play a major role in cell migration. Given the results, TCTEX1D4/PPP1 complex may constitute a potential target for the development of new prostate cancer therapies.O cancro da próstata é um dos cancros mais prevalentes e incidentes em homens, sendo uma preocupante causa de morte a nível mundial. A ampla utilização do antigénio específico da próstata (PSA) no seu rastreio e as melhorias na sua terapêutica têm permitido uma diminuição marcada da mortalidade. No entanto, o uso do PSA é controverso uma vez que se verifica um diagnóstico excessivo e o tratamento de vários casos que, eventualmente, não representariam qualquer ameaça para a vida do individuo. Assim, o estabelecimento de novos biomarcadores e a descoberta de novos alvos terapêuticos para o cancro da próstata constitui um importante desafio na atualidade. Alterações em várias vias de sinalização têm sido relacionadas com o desenvolvimento e a progressão do cancro da próstata. A via do TGFβ é uma das vias mais proeminentes no controlo do crescimento da próstata, uma vez que contrabalança os efeitos proliferativos dos androgénios. Um dos principais mecanismos de regulação da via do TGFβ é a fosforilação reversível, executada de modo complementar por proteínas cinases e fosfatases. Uma das fosfatases envolvidas na regulação da via do TGFβ é a PPP1. A PPP1 é uma fosfatase reguladora de inúmeros eventos celulares. A maioria das suas funções envolve a sua ligação a subunidades reguladoras conhecidas como PIPs. Recentemente, foi descrita uma nova PIP, a TCTEX1D4, que já havia sido referida como interactor dos recetores da via do TGFβ. No entanto, pouco se sabe acerca da sua função. Este trabalho permitiu identificar a TCTEX1D4 como agente inibidor da proliferação em células humanas de próstata. A sua atividade parece ser modulada através da ligação à PPP1, uma vez que a disrupção do complexo TCTEX1D4/PPP1 conduziu a uma maior inibição da proliferação celular. Por outro lado, a TCTEX1D4 pode regular indiretamente a atividade da PPP1 ao modular a sua localização no interior da célula. Este complexo não parece atuar ao nível da migração celular. Tendo em conta os presentes resultados, o complexo TCTEX1D4/PPP1 parece constituir um potencial alvo para o desenvolvimento de novas terapias para o cancro da próstata

Do modelo de formação de educadoras às práticas de educação infantil em Portugal na passagem do século XIX para o XX

A cidade do Porto e as suas Escolas Normais, masculina e feminina, tiveram um papel preponderante na afirmação do modelo fröebeliano de educação infantil em Portugal no final do século XIX e início do XX. O objetivo deste trabalho é apresentar o modelo de formação das educadoras e das crianças, que se foi afirmando e divulgando através das escolas de formação de professores e dos jardins de infância, sem esquecer formas mais populares de educação, que existiram em concomitância. O trabalho baseia-se na pesquisa que as autoras têm realizado sobre o espólio das antigas Escolas Normais do Porto e no currículo das Jardineiras de Infância, designação atribuída a esta nova categoria profissional. Recorreu-se também à história oral, em particular no concelho de Murça, no Nordeste transmontano, para identificar outras formas de educação popular infantil e as suas características. Tendo como referente teórico Chartier (2002), procuramos interligar as representações que o modelo de formação faz da infância e seu desenvolvimento com as práticas no jardim de infância, através de um caderno de uma educadora e com práticas populares de cuidado e educação de crianças

A ruthenium(II)-trithiacyclononane curcuminate complex: synthesis, characterization, DNA-interaction, and cytotoxic activity

The coordination of ruthenium(II) complexes to anionic oxygen-based donors are very rare. This study describes a simple, one-pot method for obtaining [ruthenium(II)(trithiacyclononane)(curcumin)(S-DMSO)]Cl (1) in 37% yield. The structural characterization of complex 1 by elemental analysis, FT-IR, 1-D and 2-D NMR, ESI+-MS as well as UV–vis and fluorescence spectroscopies are presented. The DNA-melting temperature (Tm) assay shows that salmon sperm DNA (smDNA) in the presence of complex 1 has a higher melting temperature, with ΔTm = 7.4 °C, while in the presence of curcumin the melting temperature remains unaltered. The in vitro cytotoxic activities of curcumin and complex 1 were investigated using the tumor human prostate cell line, PC-3, and the healthy cell line, PNT-2. Complex 1 is innocuous toward normal prostate epithelial cells and, whereas curcumin is toxic, with inhibition rates of ca. 35 and 65% at 50 and 80 μM, respectively. On the tumor cell line PC-3, complex 1 did not cause viability changes, whereas curcumin exhibited dose-dependent inhibition, with ca. 73% inhibition at the highest concentration tested, i.e. 80 μM. This study suggests that coordination with the trithiacyclononane ruthenium(II) scaffold stabilizes the photochemical properties of curcumin and strongly changes its biologic activity.publishe

Phosphoprotein Phosphatase 1 isoforms alpha and gamma respond differently to prodigiosin treatment and present alternative kinase targets in melanoma cells

Reversible protein phosphorylation is a central regulatory mechanism of cell function. Deregulation of the balanced actions of protein kinases and phosphatases has been frequently associated with several pathological conditions, including cancer. Many studies have already addressed the role of protein kinases misregulation in cancer. However, much less is known about protein phosphatases influence. Phosphoprotein Phosphatase 1 (PPP1) is one of the major serine/threonine protein phosphatases who has three catalytic isoforms: PPP1CA, PPP1CB, and PPP1CC. Its function is achieved by binding to regulatory subunits, known as PPP1-interacting proteins (PIPs), which may prefer a catalytic isoform. Also, some inhibitors/enhancers may exhibit isoform specificity. Here we show that, prodigiosin (PG), a molecule with anticancer properties, promotes the formation of PPP1CA-AKT complex and not of PPP1CC-MAPK complex. Both, AKT and MAPK, are wellknown PIPs from two pathways that crosstalk and regulate melanoma cells survival. In addition, the analysis performed using surface plasmon resonance (SPR) technology indicates that PPP1 interacts with obatoclax (OBX), a drug that belongs to the same family of PG. Overall, these results suggest that PG might, at least in part, act through PPP1C/PIPs. Also, this study is pioneer in demonstrating PPP1 isoform-specific modulation by small molecules.publishe

Estudo do interatoma da proteína fosfatase 1: pesquisa de biomarcadores e potenciais alvos terapêuticos para o cancro da próstata

The prostate is an important accessory gland of the male reproductive system. Its genesis, development and function are strictly regulated by cell signaling pathways. Understanding such pathways is important to better understand the molecular and cellular events that underlie two frequently diagnosed diseases in men over 50—benign prostate hyperplasia and prostate cancer (PCa). PCa remains one of the most common malignancies in men worldwide and, despite recent advances in PCa diagnosis and treatment, clinical management is still challenging. Reversible phosphorylation is one of the key cellular mechanisms for regulating the activation state of proteins and, consequently, their downstream signaling cascade(s). Protein phosphatase 1 (PP1)—one of the most relevant serine/threonine phosphatases—participates in several cellular processes, from cell cycle to cytoskeleton dynamics. Its activity, or deregulation, has also been associated with the development and progression of various diseases, including cancer. In PCa, PP1 is known to promote the androgen receptor (AR) activity—a central player in PCa development and progression and the main target of clinically-approved pharmacological interventions for the management of the disease at early castration-naïve stages. However, few studies have addressed PP1 in PCa. Therefore, this study aimed to characterize the expression of PP1 in PCa and to identify its interactome for a better understanding of its function and identification of potential new biomarkers and/or therapeutic targets. To that end, we analyzed the expression of the PP1 catalytic isoforms in normal and tumoral conditions of the prostate and found them to be differentially expressed. In addition, our results provide evidence for potential isoform specific roles, emphasizing the need for isoform-dedicated studies. We then proceed our study with the characterization of the PP-1G's (gamma isoform) interactome in PCa, using a combination of biochemical and bioinformatics approaches. This allowed us to highlight particularly relevant interactors that would be of interest to further address in future studies. Finally, we designed and synthesized cell-penetrating peptides based on the PP1-docking motifs present in the AR's amino acid sequence. The peptides were successfully internalized by PCa cells and decreased the viability of both androgen dependent and castration-resistant PCa cells when used in combination.A próstata é uma importante glândula acessória do sistema reprodutor masculino. A sua génese, desenvolvimento e função são estritamente reguladas por vias de sinalização celular, cujo conhecimento permite uma melhor compreensão dos eventos moleculares e celulares subjacentes ao desenvolvimento de duas doenças frequentemente diagnosticadas em homens com mais de 50 anos: a hiperplasia benigna da próstata e o cancro da próstata (CaP). O CaP continua a ser uma das neoplasias malignas mais comuns em homens em todo o mundo e, apesar dos avanços recentes no seu diagnóstico e tratamento, a sua gestão clínica continua a ser desafiante. A fosforilação reversível é um dos principais mecanismos de regulação do estado de ativação das proteínas e, consequentemente, das cascatas de sinalização celular por elas mediadas. A proteína fosfatase 1 (PP1)—um dos principais catalisadores celulares de reações de desfosforilação em resíduos de serina e treonina—participa em inúmeros processos celulares, desde o ciclo celular à dinâmica do citoesqueleto. A sua atividade, ou desregulação da mesma, tem sido também associada ao desenvolvimento e progressão de várias doenças, como o cancro. No CaP, sabe-se que a PP1 promove a atividade do recetor de androgénios (AR)—um fator de transcrição central na carcinogénese da próstata e o principal alvo das intervenções farmacológicas clinicamente aprovadas para o tratamento da doença em estadios iniciais. Contudo, são escassos os estudos dedicados à PP1 no CaP. Assim, este estudo surge com o objetivo de caracterizar a expressão da PP1 no CaP e de identificar o seu interatoma para uma melhor compreensão da sua função e identificação de potenciais novos biomarcadores e/ou alvos terapêuticos para a doença. Neste sentido, analisamos a expressão das isoformas catalíticas PP1 em condições normais e tumorais da próstata e descobrimos que eram diferencialmente expressas. Além disso, os nossos resultados apontam para a existência de funções específicas de cada isoforma. Prosseguimos com a caracterização do interatoma da isoforma gama, PP-1G, no CaP, usando uma combinação de abordagens bioquímicas e bioinformáticas. Isto permitiu-nos identificar interatores particularmente relevantes para investigação detalhada em estudos futuros. Por último, desenhamos e sintetizamos péptidos derivados dos motivos de ligação à PP1 presentes na sequência de aminoácidos do AR, que mostramos serem internalizados por modelos celulares de CaP e diminuírem a viabilidade celular, mesmo em células resistentes à castração, quando usados em combinação.Programa Doutoral em Bioquímic

CONEXIONES PEDAGÓGICAS TRANSATLÁNTICAS ENTRE PORTUGAL Y BRASIL (MEDIADOS DEL SIGLO XIX HASTA LA DÉCADA DE 1930)

Resumen: En este trabajo pretendemos sobre todo resaltar, en el proceso de circulación internacional de ideas y proyectos para la protección y normalización de los niños marginados y su escolarización, el papel de los viajes de profesores y otros tutores entre Portugal y Brasil a mediados del siglo XIX. siglo hasta los años 1990. 1930.. Destacaremos las visitas de estudio de profesores brasileños a Portugal y Europa y de portugueses a países europeos y Brasil, y su importancia para la formación de profesores. Partimos de fuentes primarias y legislación, así como de algunos materiales icónicos en el ámbito educativo, concluimos que los casos presentados son sólo algunos de los que se conocen y han sido estudiados, pero creemos que otros “transmisores” de ideas se han movido a ambos lados del Atlántico.   Palabras clave: Circulación de ideas; Brasil – Portugal; Historia de la Educación; Viajes pedagógicos.  Abstract: In this work we seek above all to highlight, in the process of international circulation of ideas and projects for the protection and normalization of marginalized children and their schooling, the role of travel by teachers and other guardians between Portugal and Brazil in the mid-19th century until the 1990s. 1930.. We will highlight the study visits of Brazilian teachers to Portugal and Europe and of Portuguese to European countries and Brazil, and their importance for the training of teachers. We start from primary sources and legislation, as well as some iconic material in the educational field. We conclude that the cases presented are just some of those that are known and have been studied, but we believe that other “passers” of ideas have moved on both sides of the Atlantic.   Key words: Circulation of ideas; Brazil – Portugal; History of Education; Pedagogical trips.Neste trabalho procuramos sobretudo salientar, no processo de circulação internacional de ideias e projetos de proteção e normalização da infância à margem e sua escolarização, o papel das viagens de docentes e outros responsáveis entre Portugal e o Brasil nos meados do século XIX até  à década de 1930.. Salientaremos as visitas de estudo de professores/as brasileiros/as a Portugal e à Europa e de portugueses a países europeus e ao Brasil, e sua importância para a formação do professorado. Partimos de fontes primárias e de legislação, assim como de algum material icónico no campo educativo.Concluimos que os casos apresentados são apenas alguns dos que se conhecem e têm sido estudados, mas acreditamos que outros “passadores” de ideias se tenham movimentado nos dois lados do Atlântico.   Palavras- chave: Circulação de ideias; Brasil – Portugal; História da Educação; Viagens pedagógicas. &nbsp

TGF-β cascade regulation by PPP1 and its interactors -impact on prostate cancer development and therapy

Protein phosphorylation is a key mechanism by which normal and cancer cells regulate their main transduction pathways. Protein kinases and phosphatases are precisely orchestrated to achieve the (de)phosphorylation of candidate proteins. Indeed, cellular health is dependent on the fine-tune of phosphorylation systems, which when deregulated lead to cancer. Transforming growth factor beta (TGF-β) pathway involvement in the genesis of prostate cancer has long been established. Many of its members were shown to be hypo- or hyperphosphorylated during the process of malignancy. A major phosphatase that is responsible for the vast majority of the serine/threonine dephosphorylation is the phospho-protein phosphatase 1 (PPP1). PPP1 has been associated with the dephospho-rylation of several proteins involved in the TGF-β cascade. This review will discuss the role of PPP1 in the regulation of several TGF-β signalling members and how the subversion of this pathway is related to prostate cancer development. Furthermore, current challenges on the protein phosphatases field as new targets to cancer therapy will be addressed

Copper Supported on Mesoporous Structured Catalysts for NO Reduction

Nitrogen oxides (NOx) are one of the pollutants of greatest concern in terms of atmospheric contamination and, consequently, human health. The main objective of this work, is the synthesis of structured carbon catalysts, introducing on their surface metals and nitrogen groups, catalytically active in NO reduction. Structured catalysts represent an attractive alternative to powder catalysts because they have better thermal stability and lower pressure drop. The catalysts were synthesized by coating a melamine foam using precursor solutions of carbon xerogels with and without nitrogen (using melamine and urea as precursors), and impregnated with transition metals (Fe, Ni and Cu). The introduction of nitrogen and metals modified the textural properties of the materials. Samples synthesized with melamine presented the highest amount of nitrogen, while the highest content of copper, found to be the most active transition metal for NO reduction, was found in structured catalysts impregnated with urea. The presence of transition metals in catalysts is essential for the reduction of NO to N2 and the introduction of nitrogenous precursors makes this evident. The synthesis and application of carbon-supported structured catalysts containing transition metals for NO reduction is demonstrated in this work for the first time, as well as the study of the factors influencing their performance