Cryoprotectant role of exopolysaccharide ID1 in the vitrification/in-straw warming of in vitro-produced bovine embryos

Acord transformatiu CRUE-CSICThe cold-adapted bacterium Pseudomonas sp. ID1 produces the extracellular exopolysaccharide ID1 (EPS ID1) with cryoprotective activity. This study was designed to optimize the vitrification/in-straw warming protocol of in vitro-produced (IVP) blastocysts by adding EPS ID1 to the vitrification media. Day 7-expanded blastocysts were vitrified/warmed using the VitTrans device after the addition of 0 or 100 μg/mL EPS ID1 to the vitrification media. Blastocysts vitrified by the Cryotop method and fresh non-vitrified blastocysts served as controls. Outcomes were assessed in the warmed embryos in terms of survival rates and mRNA relative abundances of BAX, BCL2, GPX1, and CDX2 genes. No differences in survival rates were observed at 3 h post-warming between vitrification treatments. At 24 h post-warming, the addition of EPS prior to vitrification with the VitTrans device produced similar survival rates to Cryotop-vitrified embryos and similar hatching rates to fresh non-vitrified or Cryotop-vitrified embryos. No differences emerged in BCL2 gene expression. Lower BAX (p <.05) and higher GPX1 (p <.05) and CDX2 (p <.1) gene expression were observed in expanded and/or hatched blastocysts derived from VitTrans-EPS-vitrified embryos when compared to those from the non-supplemented group. In conclusion, addition of EPS not only promoted blastocyst survival and hatching after VitTrans vitrification/warming but also modified the expression of genes associated with better embryo quality

Estudio comparativo y evaluación de diferentes técnicas cromatográficas en el análisis de residuos de corticosteroides en muestras biológicas

Se evalúa el comportamiento cromatográfico de los corticosteroides y se optimizan las condiciones adecuadas para la extracción y purificación en muestras biológicas. Se comparan distintos cartuchos de extracción por fase sólida (C18, Sílica, OASIS, Bond Elut) con diferentes condiciones de lavado y elución. Los mejores resultados se obtuvieron con cartuchos OASIS con recuperaciones por encima del 90%. Se realizó un estudio del disolvente con el cual se extraen mejor los corticosteroides, siendo el éter dietílico para pH 3 y 7 y el acetato de etilo para pH 11. Se llevo a cabo un estudio de separación de los corticosteroides en diferentes columnas cromatográficas con variaciones en el pH, temperatura, composición de la fase móvil, etc, evaluando los Tr en función del Tr de la dexametasona. Los mejores resultados se obtuvieron con una columna Phenomenex Synergi Max RP 80A C12 a 40ºC y con una columna NovaPak C18 (4.6 x 250mm) 4 mm, con una fase móvil compuesta por acetonitrilo/agua (30/70),.El tiempo de incubación de orinas, hígado y riñón para la deconjugación de los corticosteroides se optimizó en 24 horas para orina y 4 horas para tejidos, a pH 4.8 y a una temperatura de 37ºC ± 2ºC. Esta hidrólisis se realiza con la enzima Helix Pomatia. Los resultados de este estudio pueden ser aplicados al desarrollo de métodos analíticos. Se optimizaron técnicas de detección como son HPTLC como método criba, HPLC y GC-MS como método de confirmación para la detección de los corticosteroides. Para GC-MS se desarrolló un método de detección que incluye una derivatización con clorocromatopiridina. La detección, identificación y cuantificación de los residuos de los corticosteroides, se llevó a cabo con GC-MS en modo NCI, permitiendo la determinación de los corticosteroides a niveles de 0.2 ppb para orina y 1 ppb para hígado y riñón

Concentraciones de PCBs en suero de la población adulta española

Este proyecto ha sido financiado por el Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino, y por el Instituto de Salud Carlos III, mediante los proyectos EG042007 y SEG 1251/07