5 research outputs found
Modulation of cardiac sodium channel variants by Fyn tyrosine kinase
SpannungabhĂ€ngige NatriumkanĂ€le sind sehr groĂe Membranproteine. In SĂ€ugetieren werden sie von zehn Genen kodiert. NatriumkanĂ€le spielen eine wichtige Rolle in erregbaren Zellen und sie sind deshalb ein wichtiger Angriffspunkt fĂŒr Arzneistoffe und Toxine. NaV1.5 ist der spannungsabhĂ€ngige Natriumkanal im Herzen, wo er fĂŒr die rasche Depolarisationsphase im Aktionspotential verantwortlich ist und auch an der Reizweiterleitung beteiligt ist. Von den neun SpleiĂvarianten von NaV1.5 sind vier funktionell. Die SpleiĂvariante ÎQ1077 und die Q1077Present Variante des kardialen Natriumkanals sind in 45% bzw. 25% der Bevölkerung anzutreffen. Kardiale NatriumkanĂ€le werden durch unterschiedliche intrazellulĂ€re Proteine moduliert. Tyrosinkinasen sind eine der potenten Modulatoren verschiedener IonenkanĂ€le. Fyn, das zur Src Tyrosinkinase-Familie gehört, moduliert verschiedene Natriumkanal-Isoformen auf unterschiedliche Weise. Die mit den Q1077Present und ÎQ1077 Varianten erhaltenen Ergebnisse zeigten unterschiedliche Inaktivierung in Gegenwart katalytisch aktiver FynCA. WĂ€hrend die Q1077Present Variante die Inaktivierungskurve in die depolarisierende Richtung verschob, trat die halbmaximale Inaktivierung bei ÎQ1077 bei negativeren Potentialen auf, Ă€hnlich wie beim neuronalen Natriumkanal NaV1.2. Die durch FynCA bedingte Verschiebung der Inaktivierungskurve in der Q1077Present Variante war vergleichbar mit der durch FynCA hervorgerufenen Modulation in der hH1 polymorphen kardialen Natriumkanal-Variante. Mit der Kinase-toten Mutante FynKD kam es weder bei ÎQ1077 noch bei Q1077Present zu einer Verschiebung der Inaktivierungskurven. Weiters konnte in beiden Varianten die durch FynCA bedingte Verschiebung der Inaktivierungskurven durch den Src Tyrosinkinase-Hemmer PP2 aufgehoben werden. Die Aktivierungkurven beider Varianten, Q1077Present und ÎQ1077, wurden durch FynCA nicht beeinflusst. Eine Sequenzanalyse aller Natriumkanal-Isoformen zeigte, dass Glutamin in Position 1077 in einer der drei fĂŒr NaV1.5 einzigartigen Sequenzen in der intrazellulĂ€ren Schleife liegt, die die DomĂ€nen DII und DIII verbindet und die "Natriumionentransport-assoziierte" Region bildet. Eine Punktmutation in Position 1077 von Glutamin zu Alanin, Lysin, Tyrosin oder Prolin verschob die Inaktivierungskurven in Gegenwart von FynCA zu negativeren Potentialen. Es konnte eine lineare Korrelation zwischen dem AusmaĂ der Verschiebung der Inaktivierungskurven durch FynCA und der hydrophoben Eigenschaft der AminosĂ€uren-Seitenketten beobachtet werden. Mögliche SH2 und SH3 Bindungsstellen fĂŒr Fyn im kardialen Natriumkanal wurden ebenfalls identifiziert. FĂŒnf spezifische, prolinreiche Motive, die als SH3 Bindungsstelle fĂŒr Fyn im kardialen Natriumkanal fungieren könnten, wurden aufgefunden. Mögliche SH2 Bindungsmotive fĂŒr Fyn wurden im C-Terminus von NaV1.5 identifiziert.
Diese Daten tragen zum VerstĂ€ndnis der Rolle des Q1077 und den angrenzenden AminosĂ€uren bei. Die intrazellulĂ€re Schleife LDII-DIII des kardialen Natriumkanals, die sich wesentlich von der anderer Natriumkanal-Isoformen unterscheidet, bildet eine der "Natriumionentransport-assoziierten" Regionen. Deshalb spielt LDII-DIII eine wichtige Rolle bei der Bindung intrazellulĂ€rer SignalmolekĂŒle an den Natriumkanal.Voltage-gated sodium channels are very large membrane proteins. They are encoded by ten genes in mammals. Sodium channels are a crucial component of excitable tissues; hence, they are a target for various drugs and toxins. NaV1.5 is the cardiac voltage-gated sodium channel involved in the rapid depolarizing phase of the cardiac action potential. This isoform is also involved in the propagation of electrical impulses in the heart. Out of nine Nav1.5 splice variants, four of them were functional. The splice variant âQ1077 and Q1077Present variant of NaV1.5 are present in 45% and 25 % of human population, respectively. Cardiac sodium channels are modulated by different intracellular proteins. Tyrosine kinases are one of the potent intracellular modulators of ion channels. Fyn, a member of the Src tyrosine kinase family, modulates sodium channel isoforms distinctly.
Results on the Q1077Present and the ÎQ1077 variants show different steady-state inactivation in presence of catalytic active FynCA. While the Q1077Present variant shifted the inactivation curve to more depolarizing potentials, the ÎQ1077 variant shifted the inactivation curve to more hyperpolarizing potentials, similar to neuronal sodium channel NaV1.2. The Fyn-induced shift in inactivation of Q1077Present was similar to the modulation observed in the hH1 polymorphic cardiac sodium channel variant with Fyn. The Src tyrosine kinase inhibitor PP2 reversed back the shifts caused by FynCA in both Q1077Present and ÎQ1077 cardiac sodium channel variants. Moreover, the kinase dead mutant FynKD did not shift both the ÎQ1077 and Q1077Present inactivation curves. The activation curves of both Q1077Present and ÎQ1077 were not affected by active Fyn. Sequence analysis of all the sodium channel isoforms reveal that the Q1077glutamine is present in one the three unique sequences in the intracellular loop connecting the domain DII and DIII, which forms the âsodium ion transport associatedâ region. Point mutation at position 1077 from glutamine to alanine, lysine, tyrosine and proline shifted the inactivation curves to more hyperpolarizing potentials with FynCA. Linear correlation was observed between the hyperpolarizing shift caused by FynCA and the hydrophobicity of the amino acidsâ side chains. Putative SH2 and SH3 binding sites for Fyn in the cardiac sodium channel were also determined. Five unique proline-rich motifs were identified, which are potential SH3 binding sites for Fyn in the cardiac sodium channel. Putative SH2 binding motifs for Fyn were found in the C-terminal of Nav1.5.
These data will be pertinent in understanding the role of Q1077 and its surrounding amino acids. The intracellular loop LDII-DIII, which is distinct in cardiac sodium channels from other sodium channel isoforms, forms one of the âsodium ion transport associatedâ regions. Thus, LDII-DIII plays a pivotal role in regulating cardiac sodium channel binding to various intracellular signaling molecules
Cyclodepsipeptides from Marine Sponges: Natural Agents for Drug Research
A number of natural products from marine sponges, such as cyclodepsipeptides, have been identified. The structural characteristics of this family of cyclic peptides include various unusual amino acid residues and unique N-terminal polyketide-derived moieties. Papuamides are representatives of a class of marine sponge derived cyclic depsipeptides, including callipeltin A, celebesides A and B, homophymine A, mirabamides, microspinosamide, neamphamide A and theopapuamides. They are thought to have cytoprotective activity against HIV-1 in vitro by inhibiting viral entry. Jasplakinolide, a representative member of marine sponge-derived cyclodepsipeptides that include arenastatin A, geodiamolides, homophymines, spongidepsin and theopapuamides, is a potent inducer of actin polymerization in vitro. Although actin dynamics is essential for tumor metasasis, no actin targeting drugs have been used in clinical trials due to their severe cytotoxicity. Nonetheless, the actin cytoskeleton remains a potential target for anti-cancer drug development. These features imply the use of cyclodepsipeptides as molecular models in drug research