Molecular cloning, characterization, genomic organization and promoter analysis of the α1,6-fucosyltransferase gene (fut8) expressed in the rat hybridoma cell line YB2/0

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>The rat hybridoma cell line YB2/0 appears a good candidate for the large-scale production of low fucose recombinant mAbs due to its lower expression of <it>fut8 </it>gene than other commonly used rodent cell lines. However, important variations of the fucose content of recombinant mAbs are observed in production culture conditions. To improve our knowledge on the YB2/0 fucosylation capacity, we have cloned and characterized the rat <it>fut8 </it>gene.</p> <p>Results</p> <p>The cDNAs encoding the rat α1,6-fucosyltransferase (FucT VIII) were cloned from YB2/0 cells by polymerase chain reaction-based and 5' RNA-Ligase-Mediated RACE methods. The cDNAs contain an open reading frame of 1728 bp encoding a 575 amino acid sequence showing 94% and 88% identity to human and pig orthologs, respectively. The recombinant protein expressed in COS-7 cells exhibits a α1,6-fucosyltransferase activity toward human asialo-agalacto-apotransferrin. The rat <it>fut8 </it>gene is located on chromosome 6 q and spans over 140 kbp. It contains 9 coding exons and four 5'-untranslated exons. FISH analysis shows a heterogeneous copy number of <it>fut8 </it>in YB2/0 nuclei with 2.8 ± 1.4 mean copy number. The YB2/0 <it>fut8 </it>gene is expressed as two main transcripts that differ in the first untranslated exon by the usage of distinct promoters and alternative splicing. Luciferase assays allow defining the minimal promoting regions governing the initiation of the two transcripts, which are differentially expressed in YB2/0 as shown by duplex Taqman QPCR analysis. Bioinformatics analysis of the minimal promoter regions upstream exons E-2 and E-3, governing the transcription of T1 and T2 transcripts, respectively, evidenced several consensus sequences for potential transcriptional repressors. Transient transfections of Rat2 cells with transcription factor expression vectors allowed identifying KLF15 as a putative repressor of T1 transcript in Rat2 cells.</p> <p>Conclusion</p> <p>Altogether, these data contribute to a better knowledge of <it>fut8 </it>expression in YB2/0 that will be useful to better control the fucosylation of recombinant mAbs produced in these cells.</p

Improved Innate and Adaptive Immunostimulation by Genetically Modified HIV-1 Protein Expressing NYVAC Vectors.

Attenuated poxviruses are safe and capable of expressing foreign antigens. Poxviruses are applied in veterinary vaccination and explored as candidate vaccines for humans. However, poxviruses express multiple genes encoding proteins that interfere with components of the innate and adaptive immune response. This manuscript describes two strategies aimed to improve the immunogenicity of the highly attenuated, host-range restricted poxvirus NYVAC: deletion of the viral gene encoding type-I interferon-binding protein and development of attenuated replication-competent NYVAC. We evaluated these newly generated NYVAC mutants, encoding HIV-1 env, gag, pol and nef, for their ability to stimulate HIV-specific CD8 T-cell responses in vitro from blood mononuclear cells of HIV-infected subjects. The new vectors were evaluated and compared to the parental NYVAC vector in dendritic cells (DCs), RNA expression arrays, HIV gag expression and cross-presentation assays in vitro. Deletion of type-I interferon-binding protein enhanced expression of interferon and interferon-induced genes in DCs, and increased maturation of infected DCs. Restoration of replication competence induced activation of pathways involving antigen processing and presentation. Also, replication-competent NYVAC showed increased Gag expression in infected cells, permitting enhanced cross-presentation to HIV-specific CD8 T cells and proliferation of HIV-specific memory CD8 T-cells in vitro. The recombinant NYVAC combining both modifications induced interferon-induced genes and genes involved in antigen processing and presentation, as well as increased Gag expression. This combined replication-competent NYVAC is a promising candidate for the next generation of HIV vaccines

Origine des évaporites aptiennes de l'Atlantique Sud : contraintes géochimiques dans la partie proximale de la marge du Congo

International audienc

Nantes (44), Château des Ducs de Bretagne, étude du bâti du parement interne de la courtine de Loire: Rapport Final d'Opération d'Archéologie Préventive

L’intervention archéologique préventive réalisée d’octobre 2019 à juillet 2020 au château des ducs de Bretagne à Nantes (Loire-Atlantique) a porté sur une emprise de 150 m2 concernée par le projet de restauration de la face sur cour du rempart. Ce projet était conduit par Nantes Métropole. L’opération s’est intéressé à deux fronts de défense du château. Le premier, celui qui a été l’objet principal de la prescription du service régional de l’Archéologie, concernait la face interne de la courtine de Loire ; tandis que le second secteur étudié portait sur la courtine nord, et plus particulièrement sur le remplacement de deux consoles de mâchicoulis. Leur étude a été réalisée conjointement à la réalisation des travaux de restauration menés par l’entreprise Lefèvre.Sur la courtine de Loire, l’analyse des maçonneries a mis en évidence trois états de construction compris entre 1466 (date de démarrage de la construction du château actuel par François II) et la période contemporaine. La majeure partie de l’élévation concerne le premier état de la courtine. Elle a été mise en place sous François II jusqu’à une altitude d’environ 13 m NGF au cours de deux phases de chantier distinctes. La première phase correspond à l’édification de la base du rempart comprenant la première ligne de feu et la poterne de Loire. Par la suite, peu de temps après, la courtine est rehaussée jusqu’à atteindre la hauteur précédemment mentionnée. Un second niveau de canonnières est alors mis en place. Dans cette seconde phase de chantier, un changement de matériaux de construction a été observé sur le parement interne du rempart et ce dernier a également été aminci pour atteindre 2,50 m de large (contre 3,70 m à sa base). En partie supérieure de la courtine, un aménagement de type hourd ou galerie a été mis en œuvre, vraisemblablement pour assurer une protection supplémentaire de la poterne de Loire et des quais qui la desservaient à cette époque.Dans un second temps, le roi François Ier opère des transformations sur la partie sommitale du rempart en mettant en place des mâchicoulis sur consoles portant des linteaux ornés de ses armes. En l’état actuel de nos connaissances, il est difficile de déterminer si cette modification résulte de destructions violentes du rempart (lors du siège de 1487) ou bien s’il s’agit d’une restauration souhaitée par le souverain dans le but d’imposer sa marque sur cet édifice emblématique. Au revers de la courtine, la construction du Petit Gouvernement et le rehaussement de la cour, travaux également attribués à François Ier, occultent une grande partie des canonnières de ce front. Un peu plus tard au cours de la période moderne, d’autres bâtiments sont accolés à la courtine ainsi que le grand escalier menant au chemin de ronde. Les ancrages des charpentes et certaines fondations de ces bâtiments ont été mises au jour par l’archéologie.Enfin, au cours de la période contemporaine, des plaques commémoratives sont accrochées sur le parement interne de la courtine. Elles occasionnent des reprises ponctuelles des maçonneries. D’autres reprises du parement ont également été mises en évidence au cours de notre étude et témoignent d’un état dégradé de la maçonnerie au cours des périodes moderne et contemporaine. Elles témoignent de travaux réalisés à l’économie attestant l’absence de programme de restauration d’ampleur menés sur le parement depuis la construction de la courtine

Planification des retours à domicile après la naissance: évaluation clinique et économique du suivi d’un million de dyades mère–enfant pendant un an

International audienceObjectifÉvaluer l’impact du PRADO, un programme systématique de planification du suivi postnatal à domicile des mères en bonne santé et des enfants nés à terme, sur les issues cliniques et économiques à un an.DesignÉtude rétrospective de cohorte appariée par score de propension.PopulationSystème national de données d’assurance maladie couvrant plus de 99 % de la population française.ParticipantsAu total, 1 297 646 dyades mères–enfants en bonne santé ayant accouché en France entre le 1er janvier 2017 et le 31 décembre 2019.Critères de jugementsMortalité maternelle, mortalité néonatale, réadmissions maternelles et néonatales à l’hôpital, consultations aux urgences, consultations de psychiatres et coûts globaux d’un point de vue sociétal au cours de la première année du post-partum. Nous avons comparé les résultats entre les femmes incluses dans ce programme (groupe PRADO) et les femmes qui n’ont pas été assistées dans la planification de leurs soins (groupe témoin), selon un ratio 1/1 en utilisant un score de propension.RésultatsDans cette population à faible risque, les ratios de mortalité maternelle n’étaient pas statistiquement différents avec 9 (n = 41) et 6 (n = 29) décès pour 100 000 mères à un an du post-partum dans les groupes PRADO et témoin, respectivement. Les taux de mortalité néonatale n’étaient pas statistiquement différents avec 3,5 et 4,2 décès pour 100 000 nourrissons à 28 jours du post-partum. Les mères et les enfants bénéficiant du programme PRADO étaient respectivement 14,4 % et 6,28 % moins souvent réhospitalisés au cours du premier mois. Les mères étaient également moins susceptibles de recourir à des soins psychiatriques. Globalement, le programme d’aide à la prise de rendez-vous avant la sortie de l’hôpital a permis d’économiser 123€ par dyade mère–enfant d’un point de vue sociétal à un an du post-partum.ConclusionsLa mise en œuvre d’un programme systématique de prise de rendez-vous avant la sortie de l’hôpital a été associée à une réduction concomitante des réhospitalisations, tant pour la mère que pour l’enfant. Les facteurs contribuant à l’efficacité de la prévention devraient d’avantages être explorés pour sécuriser le post-partum

Yield behaviour of a melt-compounded polyethylene-intercalated montmorillonite nanocomposite

The yield behaviour of a series of melt-mixed polyethylene-modified montmorillonite nanocomposites has been studied as a function of temperature and strain rate and compared to the behaviour of the base polymer. The processing conditions used gave an intercalated structure as assessed by X-ray diffraction. Although there was a modest improvement in stiffness with clay content, the yield behaviour was insensitive to the addition of the clay. Both the base polymer and the nanocomposites showed double yield points. These were analysed as activated rate processes, with the activation energies consistent with the low strain yield point being associated with the alpha(2) molecular relaxation and the higher strain yield point with W axis slip. (C) 2003 Society of Chemical Industry

Phytomanagement of a metal(loid)-contaminated agricultural site using aromatic and medicinal plants to produce essential oils: analysis of the metal(loid) fate in the value chain.

International audiencePhytomanagement uses plants and soil conditioners to create value on contaminated land while minimizing environmental risk. This work was carried out on a metal(loid)-contaminated site and aimed at assessing the suitability of Salvia sclarea L. (sage) and Coriandrum sativum L. (coriander) combined with an arbuscular mycorrhizal fungus (AMF) inoculant to immobilize metal(loid)s and produce essential oils (EO). The effect of the inoculant on the transfer of metal(loid)s (ML, i.e., Cd, Cu, Pb, Zn, As, Ni, and Sb) to plants and the ML soil mobility were investigated. The ML concentrations in EO from both plant species and the valorization options for the distillation residues (soil conditioner, animal fodder, and anaerobic digestion) were studied. Sage was a suitable candidate for this value chain because it presents an excluder phenotype and the residues of oil extraction could be used as a soil conditioner. The metal concentrations in the sage EO were similar to those obtained from plants cultivated on an uncontaminated soil. These results indicate the suitability of sage harvested on the contaminated soil according to the ML fate in the whole value chain. Like the EO of sage, ML concentrations in the coriander EO did not differ from those in the commercial EO that were obtained from plants grown on uncontaminated soil. However, the use of distillation residues of coriander was limited by their relatively elevated Cd concentrations. The use of a mycorrhizal inoculum did not decrease the Cd mobility in soil for the coriander

S ‐nitrosoglutathione inhibits cerebrovascular angiotensin II‐dependent and ‐independent AT 1 receptor responses: A possible role of S ‐nitrosation

International audienc