A replication study confirms the association of TNFSF4 (OX40L) polymorphisms with systemic sclerosis in a large European cohort

<p><b>Objectives</b> The aim of this study was to confirm the influence of TNFSF4 polymorphisms on systemic sclerosis (SSc) susceptibility and phenotypic features.</p> <p><b>Methods</b> A total of 8 European populations of Caucasian ancestry were included, comprising 3014 patients with SSc and 3125 healthy controls. Four genetic variants of TNFSF4 gene promoter (rs1234314, rs844644, rs844648 and rs12039904) were selected as genetic markers.</p> <p><b>Results</b> A pooled analysis revealed the association of rs1234314 and rs12039904 polymorphisms with SSc (OR 1.15, 95% CI 1.02 to 1.31; OR 1.18, 95% CI 1.08 to 1.29, respectively). Significant association of the four tested variants with patients with limited cutaneous SSc (lcSSc) was revealed (rs1234314 OR 1.22, 95% CI 1.07 to 1.38; rs844644 OR 0.91, 95% CI 0.83 to 0.99; rs844648 OR 1.10, 95% CI 1.01 to 1.20 and rs12039904 OR 1.20, 95% CI 1.09 to 1.33). Association of rs1234314, rs844648 and rs12039904 minor alleles with patients positive for anti-centromere antibodies (ACA) remained significant (OR 1.23, 95% CI 1.10 to 1.37; OR 1.12, 95% CI 1.01 to 1.25; OR 1.22, 95% CI 1.07 to 1.38, respectively). Haplotype analysis confirmed a protective haplotype associated with SSc, lcSSc and ACA positive subgroups (OR 0.88, 95% CI 0.82 to 0.96; OR 0.88, 95% CI 0.80 to 0.96; OR 0.86, 95% CI 0.77 to 0.97, respectively) and revealed a new risk haplotype associated with the same groups of patients (OR 1.14, 95% CI 1.03 to 1.26; OR 1.20, 95% CI 1.08 to 1.35; OR 1.23, 95% CI 1.07 to 1.42, respectively).</p> <p><b>Conclusions</b> The data confirm the influence of TNFSF4 polymorphisms in SSc genetic susceptibility, especially in subsets of patients positive for lcSSc and ACA.</p&gt

Causes and predictors of mortality in systematic sclerosis at a tertiary Southern Gauteng Hospital

A research report submitted to the Faculty of Health Sciences, University of the Witwatersrand, Johannesburg, in partial fulfilment of the requirements for the degree of Master of Medicine in the branch of Internal Medicine. Johannesburg, 2018.Background Systemic sclerosis (SSc) is a chronic systemic autoimmune disease primarily affecting skin and internal organs. It is characterized by excessive fibrosis, vasculopathy and chronic inflammation. The disease is associated with increased morbidity and mortality, but to date, there have been no studies on causes of death and predictors thereof in Sub-Saharan Africa. Objective To determine the spectrum of causes of death in SSc patients attending the Connective Tissue Disease Clinic at the Chris Hani Baragwanath Academic Hospital. Methods A retrospective record review of patients meeting the ACR/EULAR (full criteria attending the Connective Tissue Disease Clinic at Chris Hani Baragwanath Academic Hospital between Jan 1990 to Dec 2015). Results Of the 282 records reviewed, 174 patients met the inclusion criteria. The majority of patients were Black African (92.5%), with a female to male ratio of 7:1. The mean (SD) age at diagnosis and follow up period were 41.8 (13.1) years and 65.8 (66.4) months respectively at last visit. Only 53 were known to be alive at the end of the study, 63 were lost and/or could not be found during follow-up, and there were 58 known deaths. The major known causes of death were disease-related: cardiopulmonary in 24 (41.4%) and SRC in 1 patient (1.7%). The disease-unrelated causes included infection in 5 patients (8.6%) and malignancy in 2 patients (3.5%). Predictors of mortality included serositis, renal dysfunction, digital ulcers, proteinuria, and a raised C-reactive protein (CRP). The estimated survival rates were 56.3% at 5 years and 35.8% at 10 years – censored for patients lost to follow up. Conclusion In the present study, SSc was associated with a high morbidity and mortality especially cardiorespiratory complications. The cause of death in our study was predominantly disease related, which is in accordance with that reported in other studies. Cardiopulmonary causes remain the leading causes of death in our population comparable to that reported in studies done in other countries.LG201

Protein kinases G as downstream mediators of the antifibrotic effects of stimulators of soluble guanylate cyclase

Hintergrund und Ziele. Die Systemische Sklerose (SSc) ist eine prototypische fibrosierende Erkrankung, gekennzeichnet durch hohe Morbidität und Mortalität. Effektive antifibrotische Therapien sind bis jetzt für die klinische Anwendung nicht vorhanden. Stimulatoren der löslichen Guanylylcyclase (lGC, englisch sGC) werden derzeit in klinischen Studien für die Behandlung von Fibrose in SSc untersucht. Ziel dieser Arbeit war die Untersuchung der Rolle von Proteinkinasen G (PKG) als nachgeschaltete Mediatoren der sGC und des cyclischen Guanosinmonophosphat (cGMP) sowie die Charakterisierung der Fehlregulierung dieses Signalweges in SSc. Methoden. Zur Bestimmung der Expression von Proteinkinasen G 1 und 2, von sGC und von p-VASP und VASP wurden Immunfluoreszenz und/oder Western Blot eingesetzt, zur Bestimmung des Spiegels von intrazellulärem cGMP wurde ein ELISA Kit verwendet. Die Spiegel der oben genannten Proteine und Mediatoren in der Haut oder in kultivierten dermalen Fibroblasten bei gesunden Spendern wurden mit denen bei SSc Patienten verglichen. Kultivierte Fibroblasten von gesunden Spender, SSc Patienten oder PKG1 und 2 – Doppel-Knockout Mäusen wurden mit TGF-β1 und/oder dem sGC-Stimulator BAY 41-2272, oder dem PKG-Inhibitor KT5823 behandelt. Bei den behandelten Fibroblasten wurde die Bildung von Stressfasern und die Menge von α-Smooth- 7 Muscle-Actin (α-SMA) Protein, von Col1a1 mRNA und Kollagen Typ 1 Protein untersucht. Bei knockout Mäusen für PKG1 und 2 oder für sGC wurde Bleomycin appliziert, und diese anschließend mit BAY 41-2272 behandelt. Um die Fibrosebildung bei diesen Mäusen zu bestimmen, wurde die Hautdicke vermessen, der Hydroxyprolingehalt bestimmt und die Myofibroblastenanzahl quantifiziert. Ergebnisse und Beobachtungen. Wir stellten eine Fehlregulierung des Signalwegs sGC-cGMP-PKG1 und 2 bei den Patienten mit SSc fest, die auf die erhöhten TGF-β1-Spiegel zurückzuführen zu sein scheint. sGC und cGMP sind bei SSc Patienten herunterreguliert. PKG1 und PKG2 sind hochreguliert, am ehesten als frustraner Kompensationsversuch. Die Fibroblastenaktivierung wird durch sGC Stimulierung und darauffolgende Hemmung der TGF-β1-induzierten ERK-Phosphorylierung gehemmt, wobei die Hemmung oder der Knockout der PKG1 und 2 den Effekt von sGC Stimulierung aufhebt. Behandlung mit sGC Stimulatoren schützt Wildtyp-Mäuse, aber nicht die PKG 1 und 2 Doppel-Knockout Mäuse vor der durch Bleomycin-induzierten Fibrose. Schlussfolgerungen. Aus unseren Daten können wir schließen, dass PKG 1 und 2 wesentliche nachgeschaltete Mediatoren der durch Hemmung der TGF-β1-induzierten ERK-Phosphorylierung hervorgerufenen antifibrotischen Effekte von sGC Stimulatoren sind. Wir zeigen außerdem eine geringere Aktivität des antifibrotischen sGC – cGMP – PKG 1 und 2 Signalwegs in SSc, die wahrscheinlich von TGF-β1 induziert wird.Background and objectives. Systemic sclerosis (SSc) is a prototypical fibrotic disease with high morbidity and mortality. Effective antifibrotic therapies are not currently available for clinical practice. Stimulators of soluble guanylate cyclase (sGC) are currently evaluated in clinical trials for the treatment of fibrosis in SSc. We aimed in this work to evaluate the role of protein kinases G (PKG) as potential downstream mediators of sGC and of cyclic guanosine monophosphate (cGMP) and to characterize the dysregulation of this signaling pathway in SSc. Methods. Immunofluorescence and/or Western Blot were used to determine the expression levels of PKG 1 and 2, of sGC and of p-VASP and VASP. An ELISA kit was used to determine the levels of intracellular cGMP. The expression levels of the molecules above in human skin or in cultured fibroblasts was compared between healthy donors and SSc patients. Cultured fibroblasts from healthy donors, SSc patients or PKG 1 and 2 – double knockout mice were stimulated with TGF-β1 and/or treated with the sGC stimulator BAY 41-2272 or the PKG inhibitor KT5823. Stress fibers formation, the levels of α-smooth muscle actin (α-SMA) protein, of Col1a1 mRNA and type 1 collagen protein were evaluated in treated cultured fibroblasts. Knockout mice for PKG1 and 2 were challenged with bleomycin and subsequently treated with BAY 41-2272. Skin thickness, hydroxyproline content and myofibroblast counts were determined to evaluate the fibrotic remodeling in these mice. Observations and results. We observed a dysregulation of the signaling pathway sGC-cGMP-PKG1 and 2 in SSc patients, for which the elevated levels of TGF-β1 could be responsible. sGC and cGMP are downregulated in SSc patients, whereas PKG1 and 2 and upregulated, most likely as a futile compensatory mechanism. Fibroblast activation is inhibited by sGC stimulation by blocking TGF-β1-induced ERK activation, whereas inhibition or knockout of PKG 1 and 2 renders sGC stimulation ineffective. 6 Treatment with sGC stimulators protects wildtype mice, but not PKG1 and 2 – double knockout mice from bleomycin-induced fibrosis. Conclusions. We can conclude from our data that PKG 1 and 2 are essential downstream mediators of the antifibrotic effects of sGC stimulators, effects mediated by blocking TGF-β1-induced activation of ERK. We show moreover a reduced activity of the sGC-cGMP-PKG signaling pathway in SSc, likely induced by TGF-β1

Analysis of SIGLEC1 as a surrogate marker for a type I interferon signature in autoimmune congenital heart block and primary Sjögren’s syndrome

Interferon-α (IFN-α), belonging to the family of type I interferons, is a cytokine involved in the pathogenesis of many autoimmune diseases, including systemic lupus erythematosus (SLE) and primary Sjögren’s syndrome (pSS). As there are no standardised tests for the direct measurement of IFN-α, the expression of the myeloid cell surface receptor SIGLEC1 on CD14+ monocytes was examined as potential biomarker for a type I interferon signature. While several studies have analysed the SIGLEC1 expression in SLE patients, further research is required into other autoimmune diseases, including pSS and congenital heart block (CHB). It was therefore the aim of this study to analyse the expression of SIGLEC1 on CD14+ monocytes, and how it is influenced by certain immunomodulatory medication, in pSS patients and in females with a CHB pregnancy complication. It was found that patients with pSS had an increased expression of SIGLEC1 compared to healthy individuals, with levels comparable to those found in SLE patients. PSS patients with a systemic or extraglandular disease manifestation (n = 16) had a significantly higher expression of SIGLEC1 compared to patients where the disease was restricted to the glandular organs (n = 15; p = 0.0001, Mann-Whitney U test (MWU)). A total of 9 pregnant females were included in the study whose children developed CHB in utero, and were compared to 14 pregnant at-risk females with anti-Ro autoantibodies who bore unaffected children. We found a significantly higher expression of SIGLEC1 and significantly higher plasma concentrations of IFN-α in the affected group compared to the unaffected group (p = 0.0034 and p = 0.0135, respectively, MWU), while there was no significant difference for plasma concentrations of interferon-γ induced protein 10 (IP10; p = 0.14, MWU). The expression of SIGLEC1 was reduced in patients with SLE, pSS, and females with a CHB pregnancy complication upon introduction of glucocorticoids and hydroxychloroquine. In summary, this study highlights a potential clinical use of the biomarker SIGLEC1 as a biomarker indicative of a more severe disease manifestation in patients with pSS, for dose titration and monitoring treatment response to hydroxychloroquine and glucocorticoids, as well as to other medication still in development, and for risk evaluation in pregnant females with anti-Ro antibodies. Further studies are needed to fully understand the pathogenetic and clinical implications of an increased SIGLEC1 expression, reflecting an activated type I interferon system, for patients with autoimmune diseases.Das Zytokin Interferon-α (IFN-α) aus der Familie der Typ-I-Interferone ist am Pathomechanismus vieler Autoimmunerkrankungen beteiligt, wie z.B. dem systemischen Lupus Erythematodes (SLE) und dem primären Sjögren-Syndrom (pSS). Dennoch gibt es keine standardisierten Testverfahren zur direkten Messung von IFN-α, sodass die Expression des auf Myelozyten exprimierten Oberflächenmoleküls SIGLEC1 als potentieller Biomarker für eine Typ-I-Interferon-Signatur untersucht wurde. Während vorherige Studien die Expression von SIGLEC1 in Patienten mit SLE untersucht haben, besteht weiterhin Forschungsbedarf in anderen Autoimmunerkrankungen, wie beispielsweise dem pSS und dem kongenitalen Herzblock (CHB). Es war daher das Ziel dieser Studie, in Patienten mit pSS und Frauen mit einer CHB-Schwangerschaftskomplikation sowohl die Expression von SIGLEC1 auf CD14+-Monozyten, als auch deren Beeinflussung durch immunmodulierende Medikamente zu untersuchen. Die Studie ergab, dass Patienten mit pSS gegenüber gesunden Kontrollprobanden eine erhöhte Expression von SIGLEC1 aufwiesen, die vergleichbar war zu der Expression in Patienten mit SLE. PSS-Patienten mit einer systemischen bzw. extraglandulären Krankheitsmanifestation (n = 16) hatten eine signifikant höhere Expression als Patienten, bei denen das Krankheitsgeschehen auf das Drüsengewebe begrenzt war (n = 15; p = 0.0001, Mann-Whitney-U-Test (MWU)). Es wurden 9 schwangere Frauen in die Studie eingeschlossen, deren Kinder im Uterus einen Herzblock entwickelten und mit 14 schwangeren Frauen verglichen, die mit Anti-Ro-Antikörpern zwar ein Risikoprofil aufwiesen, jedoch gesunde Kinder gebaren. Hier fanden wir ebenfalls eine signifikant höhere SIGLEC1-Expression, wie auch signifikant höhere IFN-α-Konzentrationen bei den betroffenen Frauen (p = 0.0034 und p = 0.0135, MWU), während die Konzentrationen von Interferon-γ-induziertem Protein 10 (IP-10) sich zwischen den beiden Gruppen nicht signifikant unterschieden (p = 0.14, MWU). Die Expression von SIGLEC1 konnte bei Patienten mit SLE und pSS, sowie bei Frauen mit einer CHB-Schwangerschaftskomplikation durch Glukokortikoide und durch Hydroxychloroquin gesenkt werden. Zusammenfassend erweitert diese Studie den potentiellen klinischen Nutzen von SIGLEC1, sowohl als Biomarker, der auf einen schwereren Krankheitsverlauf bei Patienten mit pSS hindeuten kann, zur Dosisfindung und Therapiekontrolle einer Therapie mit Glukokortikoiden und Hydroxychloroquin, bzw. auch von Medikamenten, die sich derzeit noch in der Entwicklung befinden, sowie zur Risikoevaluation bei schwangeren Frauen mit anti-Ro-Antikörpern. Weitere Studien sind erforderlich, um die vollständige pathogenetische und klinische Bedeutung einer erhöhten SIGLEC1-Expression als Indikator eines aktivierten Typ-I-Interferonsystems für Patienten mit Autoimmunerkrankungen zu verstehen

Polymorphisms in the interleukin 4, interleukin 13 and corresponding receptor genes are not associated with Systemic Sclerosis and do not influence gene expression

1 página.-- Póster presentado al 5º European Workshop on Immune-Mediated Inflammatory Diseases celebrado en Sitges (Barcelona, Españ) del 1 al 3 de Diciembre de 2010.-- et al.Peer reviewe

Variants of PBEF predispose to systemic sclerosis and pulmonary arterial hypertension development

2 páginas.-- Póster presentado al 5º European Workshop on Immune-Mediated Inflammatory Diseases celebrado en Sitges (Barcelona, España) del 1 al 3 de Diciembre de 2010.-- et al.Peer reviewe