Identification and characterization of TNFalpha responsive genes in human breast cancer cells

One of the hallmarks of cancer is the escape of the transformed cells from apoptosis. Therefore, the identification of survival genes, allowing cancer cells to circumvent programmed cell death, could provide new diagnostic markers as well as targets for therapeutic intervention. A well known transcription factor regulating the balance between pro- and anti- apoptotic factors is NF-kappaB, which is strongly induced by tumor necrosis factor alpha (TNFalpha). When cells are stimulated by TNFalpha their response is biphasic with an initial NF-kappaB induction of survival genes which is overridden by the subsequent activation of initiator caspases triggering apoptosis. By combining gene trap mutagenesis with site specific recombination a strategy was developed, which enriches for genes induced by TNFalpha in the human breast cancer cell line MCF-7. The strategy relies on a one way gene expression switch based on Cre/loxP mediated recombination, which uncouples the expression of a marker gene from the trapped cellular promoter thereby enabling the recovery of genes that are only transiently induced by TNFalpha. The marker gene used in these experiments was a dominant negative variant of the TNFalpha-receptor associated protein FADD (dnFADD), which blocks the apoptotic branch of the TNFalpha induced signaling pathway. Initial experiments indicated that MCF-7 cells expressing high levels of dnFADD were insensitive to TNFalpha induced apoptosis and therefore suitable for the installment of a one way gene expression switch susceptible to Cre/loxP mediated recombination. A MCF-7 reporter clone harboring the recombinase dependent gene expression switch was infected with the gene trap retrovirus U3Cre, which inserts the Cre recombinase gene into a large collection of chromosomal sites. Insertion of Cre downstream of an active cellular promoter induces dnFADD expression from the gene expression switch enabling the cells to block TNFalpha triggered apoptosis. From a gene trap integration library containing approximately 2000000 unique proviral integrations, 69 unique TNFalpha inducible gene trap insertion sites were recovered in a two step selection procedure. Sequencing of the genomic regions adjacent to the insertion sites, which were obtained by inverse PCR (gene trap sequence tags, GTSTs), and data base analysis revealed that 42% of the GTSTs belonged to annotated genes, 13% to known cDNAs with open reading frames, 17% to Genscan predicted genes, 9% to ESTs, 9% to repetitive sequences and 10% to unannotated genomic sequence. Overall, 44% of the annotated genes recovered in this screen were directly or indirectly related to cancer, indicating that the gene trap strategy developed here is suitable for the identification of cancer relevant genes. Analysis of the expression patterns of the trapped and annotated genes in wild type cells revealed that 19 out of 24 genes were either up- or down- regulated by a factor of at least 1.45 by TNFalpha. A large fraction of the gene trap insertions were located upstream, in introns or in opposite orientation to annotated transcripts, indicating that the strategy efficiently recovers non-coding RNAs (ncRNAs). While the biological significance of these transcripts still needs to be elucidated, they fall into two main categories. The first category includes gene trap insertions upstream of genes, which could either represent regulatory RNAs interacting with promoter elements or transcripts driven by bidirectional promoters. The second includes inverse orientation gene trap insertions in introns of annotated genes suggesting the presence of natural antisense transcripts (NATs). Interestingly, more than 50% of all antisense integrations are located downstream of transcription start sites predicted by different algorithms supporting the existence of RNAs transcribed from the corresponding genomic regions. Intronic integrations on the coding strand could be derived from cryptic splicing, alternative promoter usage or additional, so far uncharacterized transcripts. Preliminary functional analysis of two genes recovered in this screen encoding the transcription factor ZFP67 and the FLJ14451 protein revealed that FLJ14451 but not ZFP67 inhibited anchorage independent growth in soft agar, suggesting that FLJ14451 might have some tumor suppressor functions. In summary, besides identifying a putative tumor suppressor protein, the present experiments have shown that gene trapping is useful in identifying non-coding transcripts in living cells and may turn out to be the method of choice in characterizing these transcripts whose functions are still largely unknown.Ein zentrales Charakteristikum von Krebs ist die Unterdrückung des zellulären Apoptoseprogramms in den transformierten Zellen. Daher könnte die Identifizierung von Überlebensgenen, welche den Zellen die Umgehung des programmierten Zelltods erlauben, neue diagnostische Marker oder Zielmoleküle für therapeutische Intervention liefern. Die Balance zwischen pro- und anti-apoptotischen Signalen wird durch NF-kappaB, einen gut charakterisierter Transkriptionsfaktor reguliert, welcher wiederum durch Tumornekrosefaktor alpha (TNFalpha) induziert wird. Zellen, die mit TNFalpha stimuliert werden zeigen eine biphasische Antwort, während derer es zu einer initialen Induktion von Überlebensgenen kommt, bevor im folgenden Initiator-Caspasen aktiviert werden, die dann die Apoptose einleiten. Zur Identifizierung TNFalpha induzierbarer Gene in der menschlichen Brustkrebszellinie MCF-7 wurde eine Strategie benutzt, welche auf einer Kombination von Genfallen-Mutagenese und sequenzspezifischer Rekombination beruht. Diese Strategie macht sich einen irreversiblen molekularen Schalter zunutze, der die Expression eines Markergens von dem, die Genfalle aktivierenden, zellulären Promotor entkoppelt. Als Markergen wurde eine dominant negative Variante des TNFalpha-Rezeptor-assozierten Proteins FADD ("Fas-associated death domain protein"; dnFADD) benutzt, die den pro-apoptotische Zweig des TNFalpha-Rezeptor-Signalwegs blockiert. Ein MCF-7 Zellklon mit diesem Rekombinase-aktivierbaren, molekularen Schalter wurde mit dem Genfallen-Retrovirus U3Cre transduziert, welcher das Cre-Rekombinase-Gen in eine große Anzahl unterschiedlicher chromosomaler Loci inserieren kann. Kommt Cre dabei unter die Kontrolle eines aktiven zellulären Promoters, wird die Expression von dnFADD induziert und somit die Apoptose-Induktion durch TNFalpha verhindert. Aus einer Genfallen-Integrationsbank mit ca. 2000000 unabhängigen proviralen Integrationen wurden nach einer zweistufigen Selektion 69 Zellklone mit Genfallen-Integrationen in TNFalpha induzierten Genen erhalten. Die Sequenzierung der benachbart zu den Genfallen-Proviren liegenden, über inverse PCRs amplifizierten, genomischen Regionen und anschließende Datenbankanalysen ergaben folgende Verteilung der Genfallen-Integrationen: 42% lagen in annotierten Genen, 13% in Genen mit offenen Leserahmen unbekannter Funktion, 17% in hypothetischen Genen, 9% in ESTs ("expressed sequence tags"), 9% in repetitiven Elementen und 10% in nicht annotierten genomischen Regionen. 44% der aus diesem Screening-Verfahren erhaltenen, annotierten Gene ließen sich direkt oder indirekt mit Krebserkrankungen korrelieren. Dies ist ein Indiz dafür, dass der hier entwickelte, experimentelle Ansatz zur Identifizierung Krebs-relevanter Gene geeignet ist. Die Expressionanalyse ausgewählter, annotierter Gene in wildtypischen MCF-7 Zellen ergab eine Herauf- bzw. Herunterregulation um einen Faktor von mindestens 1.45 bei 19 von 24 untersuchten Genen. Ein großer Teil der Genfallen-Integrationen befand sich 5'-oberhalb von Genen, in Introns oder in umgekehrter Orientierung zu annotierten Transkripten, was darauf hindeutet, dass mit Hilfe der gewählten Strategie nicht-kodierende RNAs identifiziert werden können. Obwohl der Nachweis dieser Transkripte und ihrer biologischen Relevanz noch aussteht, können sie in zwei Kategorien eingeteilt werden. Die erste umfasst Integrationen 5' zu Genen, die entweder regulatorische RNAs repräsentieren, die mit Promotorelementen interagieren, oder Transkripte, welche unter der Kontrolle von bidirektionalen Promotoren stehen. Die zweite Kategorie, Insertionen auf dem nicht-kodierenden Strang innerhalb von Introns, legen das Vorkommen natürlicher antisense Transkripte (NATs) nahe. Interessanterweise liegen mehr als 50% aller antisense-Integrationen 3' zu potentiellen Transkriptionsstartstellen, die mit verschiedenen Algorithmen vorausgesagt wurden. Dies kann als Hinweis darauf gewertet werden, dass höchstwahrscheinlich RNAs existieren, die Transkripte der entsprechenden genomischen Regionen darstellen. Intronische Integrationen auf dem kodierenden Strang können als Resultat kryptischer Spleißvorgänge oder durch alternative Promotoren transkriptionell aktiviert werden; alternativ könnten es sich bei den durch die Genfalle "abgefangenen" RNAs um zusätzliche, bisher nicht charakterisierte Transkripte handeln. Vorläufige funktionelle Analysen zweier Gene, die für den Tanskriptionsfaktor ZFP67 und das Protein FLJ14451 kodieren, ergaben, dass FLJ14451, aber nicht ZFP67 das Substrat-unabhängige Wachstum von MCF-7 Zellen in Weichagar inhibieren kann. Dies weist auf eine mögliche Tumorsuppresorfunktion des Proteins hin. Die im Rahmen dieser Dissertation durchgeführten Experimente führten nicht nur zur Identifizierung eines potentiellen, neuen Tumorsuppressorgens, sondern zeigten auch, dass Genfallen ein nützliches Werkzeug bei der Suche nach nicht-kodierenden RNAs in lebenden Zellen sein können und ihr Einsatz möglicherweise die Methode der Wahl für die Identifizierung derartiger Transkripte darstellt

Una experiencia de enseñanza de estadística con excel en carrera de contador

El presente trabajo pretende describir la experiencia realizada con alumnos de segundo año de la Facultad de Ciencias Económicas UNCUYO que cursaron Estadística en la carrera de Contador Público Nacional y Perito Partidor de la Delegación San Rafael, desde el año 2008 al 2014 utilizando EXCEL como software soporte. El proyecto fue presentado en el año 2008 a la titular de cátedra Dra. Ángela Diblasi, la cual aceptó que realizáramos esta experiencia. Se plasmó en líneas generales, cada paso y modificación, en el informe anual de cátedraThis paper describes an experiment carried out with students from the second year of the career of Public Accountant of the Faculty of Economics, San Rafael Delegation , who studied Statistics from 2008 to 2014 using EXCEL as software support. To enable students to effectively manage this computing resource, it was due to re-plan the quarterly issuance of the course, generate new class notes and appropriate practical work, to lead to practical applications with Excel. The first years, it was implemented using computers of the Facult, and after 2012, with the increasing of availability of personal computers, it was used continuously in the classroom. Because of the number of versions of Excel available and its use in the classroom, classes were taking as adapting this program in its statistical versionAmong the results of this strategy we emphasize that for the first time advanced students decided to incorporate statistical tools in the signature Methodology and researching, Modllle II.Fil: Julián, Francisca. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias EconómicasFil: Serrano, Graciela. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Económica

Who pollutes more? Gender differences in consumptions patterns

Recent behavioral literature shows that we can identify differences between women and men in diverse domains in a general context, such as empathy, social preferences and reaction towards competitiveness, risk aversion, etc. Regarding the environment, recent studies propose that women have more knowledge and concern about the climate change than men. In this context, however, there is little evidence to what extend these behavioral differences between women and men have been translated into consumption actions more environmental friendly. Within this approach, this paper evaluates different environmental footprints of consumption patterns of women and men. As a case study, we examine Spain during the period 2008-2013. Using data from Spanish input-output tables, environmental air accounts, and household expenditure surveys for the same period, the study give evidence that gender differences take a relevant and significant position according to Weighted Least Square regression

La figura del Dircom : su importancia en el modelo de comunicación integral

Este artículo aborda la función del Dircom, ejecutivo responsable de la comunicación tanto de empresas como de instituciones y su implicación en la consolidación en estos últimos años del modelo de comunicación integral. Partiendo de una visión holística de la dirección de comunicación, la figura del Dircom contribuye a gestionar de manera coherente y homogénea las tres áreas que abarca el modelo de comunicación integral: comunicación de marketing/comercial, comunicación corporativa/institucional y la comunicación interna.This article approaches the function of the Dircom, an executive responsible for the communication of both companies and institutions and his implication in the consolidation in the latter years of the model of integral communication. From a holistic point of view of the communication management, the concept/role of the Dircom helps to manage, in a coherent and homogeneous way, the three areas that involve the model of integral communication: communication marketing , institutional communication and internal communication

Estructura de la comunicación empresarial

Este artículo pretende aportar conocimiento sobre la estructura de la comunicación empresarial, tomando como referencia los modelos provenientes de fuentes secundarias y una investigación empírica de carácter cualitativo. A partir de una muestra de 22 empresas (11 de consumo y 11 de servicios) se estudia qué denominación se le proporciona al responsable de comunicación y al departamento que representa, de quién depende jerárquicamente en el organigrama de la empresa o a quién reporta, cómo definen el modelo de comunicación que implementan y qué tipos de comunicación son coordinados y gestionados por esta figura responsable de la comunicación en la empresa.This article tries to throw light on the communication management structure taking as a reference the models from secondary sources and an empirical research of qualitative character. From a sample of 22 companies (11 of consumption and 11 of services) it is studied the denomination provided to the person in charge of communication and to the department that represents, who is the person of the company she or he reports with, how they define the communication model that they implement and what types of communication are coordinated and managed by the figure in charge of the communication in the company

Professional Identity of Social Science Teachers in Training

La identidad determina nuestra forma de ser y de actuar. El objetivo de este trabajo es conocer la percepción de los estudiantes que serán, en un trabajo futuro, los profesores de la enseñanza secundaria, y cómo crean su identidad profesional en su formación inicial. Así, mediante un cuestionario, se recogieron pruebas que nos llevan a observar, entre otras cosas, que, por un lado, el grado de estudio de origen determina mucho el papel de los docentes y sus argumentos, lo que refuerza la opinión disciplinar de esta etapa. Por el otro, están recibiendo formación didáctica que les lleva a conocer más y a formar mejor su identidad profesional. Y, por último, a pesar de los requisitos administrativos, los estudiantes se sienten poco capacitados para enseñar en otro idioma.The identity determines our way of being and acting. The aim of this work is to know the students’ perception who will be teachers in secondary education on their future work, and how they create their professional identity in their initial training. Thus, using a questionnaire, we collected evidence that lead us to observe, among other things, that on the one hand, the study degree of origin determines much the role of teachers and their arguments, reinforcing the view discipline of this stage. On the other, they are receiving didactic training that leads them to learn more and better to form their professional identity. And lastly, that, despite the administrative requirements, students feel few qualified to teach in another language

Grupos de simetria en el esgrafiado segoviano

En nuestro patrimonio arquitectónico hay una enorme riqueza desde muchos puntos de vista y es indispensable un conocimiento profundo de todos los aspectos -histórico, artístico, cultural- para su mantenimiento y adecuada conservación. En este trabajo nos centraremos en el análisis geométrico de los paramentos ornamentales conocidos como esgrafiados, que recubren los muros de muchos edificios de la provincia de Segovia, y más concretamente en los esgrafiados obtenidos por la repetición de un motivo inicial. A principios del siglo XX surgió la noción matemática de grupo de transformaciones, que ha sido muy eficaz en el estudio de las simetrías de una figura. Gracias a los trabajos del cristalógrafo ruso E.S. Fedorov en 1891 y de los matemáticos G. Pólya y P. Niggli en 1924 sabemos que solo existen 17 grupos cristalográficos planos, es decir, que todas las formas de recubrir un plano mediante la repetición regular de un motivo dado pueden clasificarse, atendiendo a sus simetrías,en 17 clases distintas. A finales del siglo XX, en la Alhambra de Granada se encontraron modelos concretos de todos los grupos de simetría, y posteriormente también en el mudéjar aragonés. Es admirable que los artesanos musulmanes y mudéjares tuvieran la intuición y el conocimiento geométrico necesarios para aplicar todas las posibles simetrías en los revestimientos de sus muros, dejándonos un legado cuya relevancia ha sido destacada por los matemáticos varios siglos después. Los esgrafiados objeto de este estudio son revocos realizados con diferentes técnicas, muy frecuentes en Cataluña y en distintas provincias astellanas,especialmente en Segovia. Su origen, historia, tipologías y formas de ejecución han sido recientemente objeto de análisis exhaustivo, y ello nos ha facilitado la tarea de recopilación de los distintos patrones. Aquí tratamos de averiguar cuántos de los mencionados grupos de simetría se encuentran en los esgrafiados segovianos, pues estos “encajes de cal y arena” forman parte de nuestro patrimonio y merecen ser transmitidos, sin perder un ápice de la diversidad de sus formas, a las generaciones futuras

Modelo de tres clases latentes del impacto psicosocial en el desempleo en habitantes de las ciudad de Cauquenes, Pelluhue y el balneario de Tongoy

59 p.El desempleo es un problema mundial que se acrecienta con el pasar de los años, según la Organización Internacional del Trabajo, en América Latina y Caribe la tasa de desempleo se ha incrementado en los últimos 10 años llegando a 8,1 % (OIT, 2016). Debido a este crecimiento, es que existe la necesidad de investigar el desempleo, específicamente en esta investigación es el Impacto Psicosocial del Desempleo, de forma que exista registro científico del tema. Ahora bien, el Impacto Psicosocial del Desempleo es definido como un proceso dinámico de cambio que se produce ante un evento difícil, estresante o potencialmente traumático (Leiva-Bianchi, Ahumada, Araneda & Botella, 2015). Esta investigación tiene por objetivo evaluar los tipos de Impacto Psicosocial del Desempleo que se pueden observar en habitantes de Cauquenes, Pelluhue y el Balneario de Tongoy. El diseño es no experimental, transversal y descriptivo-correlacional. La muestra estuvo conformada por 321 personas. El instrumento utilizado es la Escala de Impacto Psicosocial del Desempleo (SPSI-UE). Los resultados se obtuvieron a través del análisis de clases latentes en el programa Mplus versión 7, donde se confirma la existencia de un modelo de 3 tipos de clases de personas con Impacto Psicosocial: grupo Salud-Disrupción, grupo sin Impacto Psicosocial del Desempleo y grupo Exposición-Protección. En conclusión podemos decir que las clases latentes analizadas presentan elementos que han sido revisados por autores en investigaciones anteriores acerca de impacto psicosocial y de desempleo, que nos entregan sustento teórico para caracterizarlas. Palabras claves: Impacto psicosocial, desempleo, respuesta traumática, respuesta saludable, exposición, análisis de clases latentes

Cuenca: su crecimiento urbano y paisajístico desde 1950-2008

Cuenca: su crecimiento urbano y paisajístico en los años de 1950- 2008 es un trabajo que busca plasmar los cambios ocurridos en la configuración urbana de Cuenca a largo de su historia, partiendo desde la concepción de ciudad para ir abordando los sucesos más relevantes de la historia urbana de la ciudad de Cuenca. Los momentos de la ocupación humana en su territorio hace que se plasman cambios sean en la infraestructura física (calles, veredas, alcantarillados, plazas), en la organización de la ciudad, en los tipos de uso del suelo, etc., referentes que ponen en manifiesto la constante intervención de diversos actores sociales. Y sin dejar de lado el crecimiento demográfico de la ciudad vemos que estos aspectos conllevan a cambios en el paisaje y en la proyección de Cuenca como ciudad. Dichos cambios en el paisaje permite conocer los trabajos realizados por ordenar el uso de suelo en la ciudad como también por controlar el desarrollo de Cuenca para hacer de ella una ciudad deseable para ser habitada e incluso ordenada de tal manera, que permita a sus habitantes acceder a los distintos servicios que presta y abastecer a la población de los servicios básicos requeridos. Esta tesis, muestra el rostro urbano y paisajístico de la ciudad de Cuenca desde su fundación hasta la actualidad.Licenciada en Ciencias de la Educación. Especialidad Historia y GeografíaCuenc