Effect of culture time and gender of nuclei donor cells on bovine development produced by nuclear transfer

Objetivou-se com este trabalho avaliar o efeito do número da passagem e do sexo das células doadoras de núcleo no desenvolvimento embrionário e fetal após transferência nuclear. Para isso, oócitos bovinos foram maturados, enucleados e reconstruídos com células somáticas de animal adulto. Após a fusão e ativação química, os zigotos reconstituídos foram cultivados em Charles Rosenkranz 2 (CR2) com monocamada de células da granulosa a 38,8ºC em atmosfera umidificada a 5% de CO2 em ar, durante sete dias, e transferidos para receptoras sincronizadas. As taxas de clivagem e desenvolvimento a blastocisto de embriões reconstruídos com células cultivadas por tempo maior foram inferiores às obtidas com os demais tempos de cultivo. Além disso, os blastocistos produzidos não resultaram no desenvolvimento de uma gestação a termo. Embora a taxa de clivagem em embriões fêmeas tenha sido maior, o número de embriões que atingiram o estádio de blastocisto foi maior nos embriões machos. No período gestacional, fêmeas apresentaram maior taxa de aborto entre 90 e 120 dias de gestação. Esses resultados indicam que células doadoras de núcleos cultivados por longos períodos dificultam a produção de blastocistos e aumentam as chances de perdas durante a gestação. Embriões clonados machos têm maior competência para se desenvolver a blastocisto e resultam em menor taxa de perda gestacional.The objective of this study was to evaluate the effects of culture time and sex of nuclei donor cells on embryo and fetal development after nuclear transfer. Thus, bovine oocytes were matured, enucleated and reconstructed with somatic cells from an adult animal. After fusion and chemical activation, the reconstituted zygotes were cultured in Charles Rosenkranz 2 (CR2) on a granular monolayer cell at 38.8ºC in a humidified atmosphere 5% CO2 in air for seven days, and transferred to synchronized receptors. Cleavage rates and development to blastocyst of embryo reconstructed with cells cultured for a longer time were lower than rates obtained with other culture times. Moreover, these produced blastocysts did not result in the development of full term pregnancy. Although cleavage rates were higher in female embryos, the number of embryos that reached blastocyst stage was higher in male embryos. During gestation period, females showed higher abortion rates from 90 to 120 days of gestation. These results indicate that cells donnors of nuclei cultured for long periods make the production of blastocysts difficult and increase the chances of losses during pregnancy. Cloned male embryos are more succesful in becoming blastocysts and result in lower gestational loss rate.À Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Resistência insulínica em portadores de hepatite crônica C não diabéticos: qual o significado?

OBJETIVOS: Em portadores de hepatite crônica C não diabéticos, verificar a prevalência de resistência insulínica (RI) e analisar a associação desta com os parâmetros laboratoriais e histológicos. SUJEITOS E MÉTODOS: Foram incluídos no estudo 82 pacientes, e amostras de sangue foram coletadas para determinação de glicose, perfil lipídico, alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), ferritina, HOMA-IR, carga viral e genótipo do VHC. HOMA-IR superior a 2,5 foi considerado resistência insulínica. RESULTADOS: RI foi observada em 27% dos pacientes e foi associada a idade, circunferência abdominal e índice de massa corpórea. Quando comparado a pacientes sem RI, aqueles com HOMA-IR superior a 2,5 apresentaram graus mais acentuados de fibrose hepática e atividade necroinflamatória, maiores níveis de aminotransferases e esteatose hepática mais frequente. CONCLUSÕES: É comum a presença de RI em portadores de hepatite crônica C e esta se associa com graus mais avançados de fibrose hepática induzida pelo vírus da hepatite C.OBJETIVOS: Em portadores de hepatite crônica C não diabéticos, verificar a prevalência de resistência insulínica (RI) e analisar a associação desta com os parâmetros laboratoriais e histológicos. SUJEITOS E MÉTODOS: Foram incluídos no estudo 82 pacientes, e amostras de sangue foram coletadas para determinação de glicose, perfil lipídico, alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), ferritina, HOMA-IR, carga viral e genótipo do VHC. HOMA-IR superior a 2,5 foi considerado resistência insulínica. RESULTADOS: RI foi observada em 27% dos pacientes e foi associada a idade, circunferência abdominal e índice de massa corpórea. Quando comparado a pacientes sem RI, aqueles com HOMA-IR superior a 2,5 apresentaram graus mais acentuados de fibrose hepática e atividade necroinflamatória, maiores níveis de aminotransferases e esteatose hepática mais frequente. CONCLUSÕES: É comum a presença de RI em portadores de hepatite crônica C e esta se associa com graus mais avançados de fibrose hepática induzida pelo vírus da hepatite C

Patologia de neonatos bovinos originados por meio da técnica de transferência nuclear de células somáticas: clonagem

Os mecanismos de morte em animais clonados a partir de células somáticas são poucos elucidados. Malformações de órgãos, alterações de tamanho e peso desses animais foram anomalias já descritas, porém em casos isolados. Desse modo, estudos nos níveis anatomo e histopatológicos são de suma importância para ajudar a compreensão dos fatores responsáveis pelos altos índices de insucessos com a utilização da TNCS (transferência nuclear de células somáticas). Assim, o presente trabalho foi realizado com o objetivo de descrever, por meio de exames anatomopatológicos, as alterações presentes em um grupo de animais gerados por TNCS, que vieram a óbito entre 1 e 19 dias de vida. Esse experimento foi realizado entre os anos de 2004 e 2008 na fazenda Tambaú, cidade de Tambaú, Estado de São Paulo. No total foram gerados 21 animais da raça Nelore (Bos indicus), sendo que 11 vieram a óbito e dez apresentaram boa evolução clínica no período perinatal. Foram realizadas as necropsias dos animais e posterior análise histopatológica de tecidos alterados. Esse estudo mostrou alta prevalência de alterações cardiopulmonares, que provavelmente foram determinantes nos mecanismos de morte dos animais. Dentre essas alterações a hipertensão pulmonar e modificações hemodinâmicas diagnosticadas através do exame histopatológico foram as mais frequentes.The death mechanisms in cloned animals are not well elucidated. There are few cases describing organ malformation, size and weight alterations in these animals. Pathologic studies are necessary to understand the high level of unsuccessful results using the NTSC (nuclear transfer somatic cell) technique. The present study was carried out to describe alterations present in a group of animals generated by NTSC technique that deceased between 0 to 19 days of life, using anatomopathologic examination. This experiment was conducted at Tambaú Farm in São Paulo State between years 2004 and 2008. Initially there were twenty one Nelore breed Bos indicus animals, but 11 of them deceased and ten survived and showed satisfactory clinical evolution in perinatal period. Animals necropsies and histopathologic analyses where performed. The results revealed a high prevalence of cardiopulmonary alterations, which were predominantly lung hypertension and hemodynamic profile changes, revealed by histopathologic analyses

Production of transgenic animals by nuclear transfer: model for biological studies

O recente progresso na clonagem animal por transferência nuclear (TN) possibilitou a produção de animais transgênicos utilizando linhagens de células doadoras de núcleo modificadas geneticamente. A possibilidade de manipulação genética, o estudo da expressão gênica e a adequada seleção da célula doadora de núcleo não somente podem garantir a presença da construção gênica em toda a prole, como também podem evitar a produção de animais portadores de modificações indesejáveis resultantes da inserção aleatória do inserto em regiões codificantes do genoma. Esta revisão tem como objetivo discutir a utilização da transferência nuclear de célula somática (TNCS) como método de escolha para a transgenia animal.Recent progress in animal cloning by nuclear transfer (NT) has made possible the production of transgenic animals using previously genetically modified cell lineages. The possibility of genetic manipulation, gene expression studies and adequate selection of the nuclei donor cell for NT not only can guarantee the presence of the gene construction in the offspring, but also can avoid the production of animals that carries undesirable characteristics, often as a result of the random insertion of transgenes in transcripted areas of the genome. This review aims to discuss the use of somatic cell nuclear transfer (SCNT) in animal transgesis

Morphology and functionality of the type II pneumocytes and their variation in relation to bovine gestational age

Este estudo objetivou caracterizar a presença de pneumócitos tipo II e o início da produção de lipoproteína surfactante em bovinos, correlacionando a idade gestacional com a síntese de surfactante durante o desenvolvimento fetal. Pulmões de fetos com quatro meses de idade gestacional estavam na fase canalicular de desenvolvimento, sem a presença de pneumócitos tipo II ou bandas eletroforéticas compatíveis com a presença de proteínas surfactante. No 5° mês gestacional, os pulmões dos fetos encontravam-se em fase de saculação terminal, com a presença de alvéolos por epitélio cúbico, com áreas formadas por pneumócitos I e II. Nesse período ainda não foi possível identificar proteína surfactante nos pulmões. Esses órgãos em fetos com seis meses de idade gestacional estavam em fase de saco terminal, com presença de pneumócitos tipo I e II. Nessa fase a análise para determinação protéica do surfactante de feto bovino (SDS - PAGE) demonstrou presença de bandas entre 26 e 36kDa, confirmando produção de SP - A, proteína surfactante encontrada em maior quantidade. A partir do 7° mês gestacional, a fase de saco terminal é mais evidente e complexa, com desenvolvimento de intensa vascularização. O pneumócito tipo I apresentava aspecto mais pavimentoso, e o tipo II apresentava aspecto mais globoso. Na análise SDS - PAGE do lavado bronco - alveolar, bandas de proteína surfactante com aspecto similar ao de animais recém-nascidos foram encontradas. Em recém-nascidos, pulmões na fase alveolar foram observados com pneumócitos tipo I e II característicos. O perfil das bandas do lavado bronco-alveolar dos recém-nascidos foi igual ao de animais adultos. Esses achados sugerem que um animal nascido precocemente, a partir dos sete meses de gestação, teria sua sobrevivência garantida devido a uma possível funcionalidade do sistema respiratório do feto, pois o pulmão possuiria as características necessárias para a síntese de proteínas surfactantes. Entretanto, mais estudos clínicos sobre a funcionalidade do sistema respiratório abrem novas fronteiras de experimentos sobre fisiologia respiratória em recém-nascidos bovinos.The aim of this study was to characterize the presence of type II pneumocyte and the beginning of the surfactant protein production in bovines to the correlated gestational age. Lungs of fetuses at 4 months gestational age were found to be in the canalicular development phase, without presence of type II pneumocytes or appearance of electrophoretic bands compatible with the presence of the surfactant protein. In fetuses at 5 months of gestational age, the lungs were at the terminal sac phase, with the presence of primitive alveolus, formed by cubical epithelium and areas formed by pneumocytes I and pneumocytes II. No electrophoretic bands compatible to the surfactants proteins were identified. In contrast, lungs of fetuses at 6 months of gestational age showed, development of terminal sac phase, with the presence of type I and type II pneumocytes. In this phase, proteic determination for the SDS - PAGE analysis showed the presence of bands between 26 to 36kDa, demonstrating SP - A production, which is the surfactant protein found in highest amount. From the 7th gestational month on, the phase of terminal sac is more evident and complex, with intense sprouting vascularization. The type I pneumocyte had a more squamous aspect and type II pneumocyte were more globular. In the SDS - PAGE analysis of the bronchial - alveolar wash, surfactant protein bands had been observed with a profile similar to that of the newborn animals. In newborn animals, lungs in alveolar phase showed the development of type I and II pneumocytes. The profile of the bronchial - alveolar wash from the newborn was similar to an adult animal, presenting the same bands in triplets. These results suggest that early born fetuses, from 7 months of pregnancy could have a guarantee of surviving due to possible functionality of respiratory system because the lung presented all necessary features for surphactant protein syntheses. However, new clinical studies related to respiratory system functionality open new venues for newborn bovine's experiments respiratory physiology

Intervención pedagógica de la fluidez y de la comprensión lectora en el 2º grado de primaria a través de talleres de mediación entre pares

Con el objetivo de generar mejoras en la fluidez (precisión, velocidad lectora, prosodia y automatización de la lectura) y la comprensión lectora en estudiantes, a través de un diseño cuasi experimental pre test post test con grupo control. Se realizó una intervención pedagógica basada en Talleres de Mediación Entre Pares en una muestra de estudiantes de 2º grado de Primaria de Lima (grupo experimental = 127, y grupo control = 169). Los instrumentos de medición aplicados fueron: la Rúbrica de Lectura Oral RELO (fluidez y la comprensión lectora en la lectura oral) de Medina (2013) y la Prueba de Complejidad Lingüística Progresiva Nivel 2 (comprensión lectora silenciosa) de Alliende, Condemarín y Milicic (2001). Las medidas de comparativas de post test señalan una mejora significativa (p<.001) tras la intervención en la fluidez lectora, la precisión, la automaticidad de la lectura; muy significativa (p<.01) en la prosodia, y ningún efecto significativo sobre la velocidad lectora. No obstante, se aprecian incrementos en los promedios de comprensión lectora en la lectura oral, y en la comprensión a nivel literal y a nivel reorganizativo, estos no alcanzan a ser significativos, sin embargo, los análisis sí señalan que la intervención mejoró la comprensión en el nivel inferencial (p<.001) y en el nivel crítico (p<.01); la comprensión lectora a nivel de la lectura silenciosa no observó una mejora significativa. Este estudio muestra la importancia y el impacto de la mediación entre pares para enriquecer los procesos de aprendizaje de la lectura en las primeras etapas, en especial en realidades con menor avance en el aprendizaje de la fluidez y de la comprensión lectora

Proliferação Celular em Gestações Naturais e de Conceptos Bovinos Transgênicos Clonados, que Expressam Proteína Fluorescente Verde / Cell proliferation in pregnancies natural and transgenic conceptos cattle cloned, expressing green fluorescent protein

Neste estudo, foi avaliada a ocorrência de proliferação celular em placentônios de conceptos bovinos transgênicos clonados e de inseminação artificial, nos períodos de 60 e 90 dias de gestação. As amostras foram recortadas e fixadas em solução de paraformoldeído a 4% em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4, para realização da técnica de imuno-histoquímica. Os resultados obtidos foram comparados entre bovinos clonados transgênicos e de inseminação artificial. Em todos os grupos e períodos gestacionais, o epitélio fetal apresentou marcação positiva para proliferação celular. Aos 60 dias a marcação positiva no epitélio uterino das gestações manipuladas foi pouco evidente em relação às de gestações naturais. Por sua vez aos 90 dias a imunorreatividade dos placentônios dos conceptos clonados, foi intensa não só no epitélio mas também no tecido conjuntivo fetal, fato não observado na gestação natural, onde a reação positiva foi pouco evidente no tecido conjuntivo fetal. Neste estudo foi demonstrado possível desequilíbrio nos padrões de proliferação celular nos conceptos bovinos clonados transgênicos, pois aos 60 dias, apresentaram menor atividade proliferativa e aos 90 dias aumento. Desse modo os resultados são importantes para a compreensão de possíveis falhas no desenvolvimento gestacional em técnicas avançadas de manipulação embrionárias

Pharmacological properties of specioside from the stem bark of Tabebuia aurea

Iridoids are secondary metabolites with several biological activities. They are often found in species of the genus Tabebuia Gomes ex A.P. de Candolle. Tabebuia aurea (Silva Manso) Benth. & Hook. F. ex S. Moore, Bignoniaceae, is used to treat snake bites in traditional medicine. This study aimed to isolate the specioside - an the iridoid glycoside - from T. aurea, as well as investigate its potential biological properties, including anti-inflammatory, antibacterial, antibiofilm, cytotoxic, anti-Trichomonas vaginalis and antitrypanosomal activities. Specioside inhibited leucocyte recruitment into the peritoneal cavity in mice injected with carrageenan, data that demonstrated its anti-inflammatory potential. However, the additional evaluated biological properties were negligible