Development of an indirect ELISA against Equine Herpesvirus Types 1 and 4

The equine herpesviruses are important pathogens in the animal health context, namely in the equine’s health. So far, nine types have been identified, of which herpesvirus type 1 (EHV-1) and type 4 (EHV-4) are clinically, economically, and epidemiologically the most relevant due to the pathologies associated. The main objective of this work was to develop a peptide-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for discrimination between EHV-1 and EHV-4. Selecting from the literature the immunogenic regions of both viruses, the tests were performed using a portion of glycoprotein E and a portion of glycoprotein G from each virus type. The results obtained until the conclusion of this work are promising, however, they were not conclusive. Nevertheless, they open the way for future testing, in order to make these ELISA test applicable for the detection of antibodies against EVH-1 and EHV-4.Este trabalho experimental teve como principal objetivo o desenvolvimento de um teste ELISA que permitisse detetar e diferenciar o herpesvírus equino tipo 1 (EHV-1) e o herpesvírus equino tipo 4 (EHV-4). Os herpesvírus equinos (EHVs) são vírus envelopados, com dupla cadeia de DNA que afetam todos os membros da família Equidae em todo o mundo (Wegdan et al., 2016; Slater, 2007), tendo sido, até ao momento, identificados e caracterizados nove tipos de herpesvírus. Os vírus dos tipos EHV-1, EHV-2, EHV-3, EHV-4 e EHV-5 infetam cavalos domésticos, enquanto os vírus dos tipos EHV-6, EHV-7, EHV-8 e EHV-9 estão associados a equídeos selvagens (Slater, 2007). Estes vírus possuem ciclos de vida complexos, que envolvem a infeção de múltiplos tipos celulares em diferentes tecidos e, são ainda detentores de diferentes mecanismos de evasão que lhes permite escapar à resposta imunológica do hospedeiro (Slater, 2007). Uma das ferramentas mais poderosas destes vírus é a capacidade de permanecer em latência, estado esse em que os equinos transportam o vírus de forma assintomática durante longos períodos. (Ostlound,1993; Balasuriya et al, 2015 Slater, 2007). Devido às suas características, os EHVs têm tido, a nível mundial e em todos os sectores da indústria equestre, um grande impacto económico e no bem-estar animal. (Slater, 2007; Milic et al., 2018). Contudo, de entre os EHVs, o EHV-1 e EHV-4 são do ponto de vista clínico, económico e epidemiológico os agentes patogénicos mais relevantes (Patel & Heldens, 2005; Slater, 2007). O EHV-1 é maioritariamente responsável por doenças respiratórias em animais jovens, aborto, morte neonatal e surtos extensivos de doença neurológica ou mielencefalopatia por herpesvírus equino (EHM), enquanto que o EHV-4 causa principalmente doenças respiratórias e raramente leva ao aborto (Ostlund, 1993; Balasuriya et al, 2015; Milic et al, 2018). Os vírus EHV-1 e EHV-4 foram em tempos considerados e classificados como dois subtipos do mesmo vírus (Milic et al., 2018). No entanto, a utilização da sequenciação genómica permitiu diferenciar estes dois vírus que são, contudo, geneticamente muito semelhantes (Vandekerckhove et al., 2011; Azab et al., 2012; Wegdan, 2016; Milic et al., 2018). Tendo em conta estas semelhanças entre os vírus, foram selecionadas para este trabalho, com base na literatura, duas regiões altamente imunogénicas que permitissem diferenciá-los sem que ocorresse reação cruzada. As regiões escolhidas foram uma porção do gene que codifica para a glicoproteína G (gG) e uma outra porção do gene que codifica para a glicoproteína E (gE). As glicoproteínas do herpesvírus estão presentes no envelope do vírus e têm papéis funcionais importantes na patogénese da doença (Crabb&Studdert,1990; Molinková,2012), mediando a entrada do vírus na célula hospedeira através da adsorção e penetração (Crabb & Studdert, 1990; Patel & Heldens, 2005; Slater, 2007). A maioria das diferenças entre EHV-1 e EHV-4 foram encontradas em 1993 por Crabb & Studdert na extremidade 3' do gene 70 que codifica a glicoproteína G. Comparando as sequências nucleotídicas de EHV-4 gG e EHV-1 gG, estes autores concluíram que as sequências possuíam 58% de identidade. No entanto, as regiões proteicas que incluíam os resíduos de aminoácidos 287 a 382 em EHV4 gG e 288 a 350 em EHV1 gG detinham apenas 21% de identidade. Por este motivo, esta região foi indicada como uma das mais promissoras na distinção de ambos os vírus. (Van Maanen, 2012; Thormann et al., 2012). Mais tarde, Damiani et al. (2000) examinaram mutantes de supressão do heterodímero gI/gE em EHV-4, em condições in vitro e in vivo, concluindo que os genes intactos destas glicoproteínas, gI e/ou gE, são necessários para uma transmissão eficaz do vírus através da propagação de célula a célula e, consequentemente, existe um papel importante dos genes gI e gE na virulência do EHV-4. Com base nestas descobertas, Andoh et al. (2012) identificaram e descreveram epítopos imunogénicos de EHV-1 e EHV-4 fundados em gE. Após o reconhecimento das regiões a utilizar, o presente trabalho foi desenhado de forma a obter estas proteínas recombinantes. Numa primeira fase, foram construídos dois vetores de expressão, cada um contento a porção imunogénica de gG de EHV-1 e EHV-4 para posterior transformação e expressão num organismo modelo neste caso, a bactéria Escherichia coli. E, em paralelo, o trabalho prosseguiu usando dois péptidos sintéticos de gE, um para cada um dos herpesvírus em estudo. A fase seguinte deste trabalho englobou o desenvolvimento de um teste ELISA, teste esse que tem como base reações antigénio-anticorpo detetáveis por meio de reações enzimáticas e têm sido utilizados para identificar estados de infeção e/ou vacinação de forma rápida e precisa. O ELISA desenvolvido foi do tipo indireto onde a ligação antigénio-anticorpo é detetada por um segundo anticorpo marcado o que confere uma maior especificidade e sensibilidade ao teste. No final, foi possível desenvolver e otimizar um teste ELISA indireto que permite a deteção de soros positivos e também a diferenciação de EHV-1 e EHV-4. No entanto, embora os resultados obtidos sejam promissores, trabalho futuro será necessário para testar um maior número de soros de forma a validar o teste ELISA e torná-lo apto para utilização em laboratório

Resultados preliminares de um estudo sobre os efeitos da aplicação foliar de 2,4-D e potássio sobre o calibre do fruto da clementina ‘Mioro’

As clementinas apresentam boas características organoléticas e ausência de sementes, o que é apreciado pelos consumidores e faz com que estejam entre os grupos de citrinos mais cultivados na Península Ibérica. Entre as clementinas, a cultivar ‘Mioro’ tem suscitado interesse pela sua precocidade, mas o vingamento é em alguns casos excessivo e os frutos apresentam um baixo calibre. A monda de frutos é usada para diminuir a competição e aumentar o calibre do fruto, mas é bastante dispendiosa e o seu efeito sobre o calibre das clementinas que ficam na árvore é pouco significativo, sobretudo quando é executado demasiado tarde. Em diversos países, incluindo Espanha, as auxinas são usadas vulgarmente para aumentar o calibre de clementinas e outras tangerinas. Porém, a sua aplicação não é eficaz em todas as cultivares de tangerineira. Mesmo nas cultivares em que as auxinas aumentam o calibre do fruto, a sua eficácia depende da auxina aplicada e para cada cultivar é necessário determinar o momento ótimo de aplicação e a concentração a usar. A aplicação de potássio por via foliar também tem um efeito positivo sobre o calibre do fruto, mas a sua eficácia depende do número de aplicações, do(s) momento(s) de aplicação e da concentração usada. Neste estudo foi testada a aplicação de 2,4-D a duas concentrações (10 e 30 mg L-1) e a aplicação foliar de óxido de potássio (uma e três aplicações), num desenho experimental em parcelas divididas (split-plot), com subparcelas de pelo menos 10 árvores. Os resultados obtidos até agora permitem concluir que a aplicação de 2,4-D provocou um aumento significativo do calibre do fruto, sobretudo quando aplicado a uma concentração de 30 mg L-1. A aplicação de potássio não provocou um aumento significativo do calibre do fruto, relativamente à testemunha.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Classe de Ciências

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Machine Learning techniques for energy consumption forecasting in Smart Cities scenarios

Over the past few years, the number of sensors spread across cities has significantly increased. This led to an exponential growth in data volume, which can only be treated with Big Data techniques. Having such a large amount of generated data, turns possible to apply machine learning techniques more accurately, with the goal of making data predictions over time, finding anomalies, performing classification, among other tasks. This article aims to show the application of machine learning techniques, using a variant of the Recurrent Neural Networks, the Long Short-Term Memory (LSTM), in order to predict city\u27s energy consumptions for the near future. This forecast will support municipal entities decisions, helping them to improve the managing of energy consumptions and budgets

A hybrid heuristic for a stochastic production-inventory-routing problem

We consider a stochastic single item production-inventory-routing problem with a single producer and multiple clients. At the clients, demand is allowed to be backlogged incurring a penalty cost. Demands are considered uncertain. A recourse model is presented where the production and routing decisions are taken before the scenario is known, and the quantities to deliver to the clients and the inventory levels are adjustable to the scenario. Valid inequalities are introduced and a hybrid heuristic that combines ideas from the sample average approximation method and from relax-and-fix approaches is proposed. Preliminary tests based on randomly generated instances are reported showing that the hybrid heuristic performs better than the classical sample approximation algorithm for hard instances.publishe

CityMii - An integration and interoperable middleware to manage a Smart City

Modern cities are supported by multiple heterogeneous IT systems deployed and managed by distinct agents. In general, those systems use old, dependent and non-standardized technologies, which make them legacy and incompatible systems. As smart cities are moving toward a fully centralized management approach, the lack of integration among systems raises several problems. Since they are independent, it is not easy to correlate information from different systems and put it together to work in order to achieve application goals. The collaboration among different systems enables an agent to offer new functionalities (services or just information about the city) that cannot be provided by any of these systems working as individual entities. The goal of this paper is to propose an integration middleware to support the management of Smart Cities in a dynamic, transparent and scalable way. The proposed middleware intends to support interoperability among different systems operating in a city.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Interdisciplinary working practices: can creative dance improve math?

This study is integrated in the field of Dance in Education, focusing on the instrumentalist aspect of art. We focused on creative dance as a catalyst to learn Mathematics’ contents. This interdisciplinary work can enhance the learning, as far as the understanding of Mathematics’ concepts is achieved through the body and revealed by expressive and creative movement. The main purpose of the investigation, quasi-experimental, was to analyze the impact of creative dance in the learning of Mathematics’ concepts in children (7/8 year old) in primary education, in two Portuguese schools. The sample included 8 classes, 117 children in total, of both genders. The intervention has taken place in two groups (experimental group and control group), with four sessions of creative dance in the experimental group. Both groups were assessed on three different occasions (pre-test, post-test and retest). The statistical techniques used for processing the data were the analysis of variance of mixed plans and the Student’s t test for paired samples. The conclusions showed that the students who consolidated the knowledge in the creative dance classes, exhibited significant differences in their learning gains in Mathematics, as compared to the control group.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Criação, produção e divulgação online de um curso de Meteorologia

Este artigo apresenta, fundamenta e valoriza o Curso de Meteorologia em linha, desenvolvido e editado na plataforma Versal por uma equipa multidisciplinar da Universidade de Évora e financiado pelo Projeto 92/ID/2014 FCT. A formação invertida foi o contexto orientador para a produção deste curso que se constitui como Recurso Digital Aberto

Materiais do tipo SBA-15 contendo titânio: Síntese, caracterização e avaliação da estabilidade hidrotérmica

Neste trabalho apresentam-se os estudos de preparação, caracterização e estabilidade hidrotérmica de materiais Ti-SBA15. Para o efeito, desenvolveu-se um novo método de síntese, processo hidrótermico por via directa, que permitiu a obtenção de materiais com elevado teor de Ti e de acordo com as razões molares de síntese, Si/Ti, pré-definidas. Os materiais foram caracterizados por DRX e adsorção de N2 a 77K o que permitiu verificar que todas as amostras com razão molar Si/Ti10 apresentam uma estrutura hexagonal mesoporosa, regular e uniforme. Por outro lado, os ensaios de estabilidade hidrotérmica, realizados por imersão das amostras em água à temperatura de 373,15K e durante 24 horas, revelaram que os materiais em causa exibem uma boa estabilidade hidrotérmica

Lagrangian duality for robust problems with decomposable functions: the case of a robust inventory problem

We consider a class of min-max robust problems in which the functions that need to be “robustified” can be decomposed as the sum of arbitrary functions. This class of problems includes many practical problems, such as the lot-sizing problem under demand uncertainty. By considering a Lagrangian relaxation of the uncertainty set, we derive a tractable approximation, called the dual Lagrangian approach, that we relate with both the classical dualization approximation approach and an exact approach. Moreover, we show that the dual Lagrangian approach coincides with the affine decision rule approximation approach. The dual Lagrangian approach is applied to a lot-sizing problem, in which demands are assumed to be uncertain and to belong to the uncertainty set with a budget constraint for each time period. Using the insights provided by the interpretation of the Lagrangian multipliers as penalties in the proposed approach, two heuristic strategies, a new guided iterated local search heuristic, and a subgradient optimization method are designed to solve more complex lot-sizing problems in which additional practical aspects, such as setup costs, are considered. Computational results show the efficiency of the proposed heuristics that provide a good compromise between the quality of the robust solutions and the running time required in their computation.publishe