Detecção da resistência e actividade das bombas de efluxo às fluoroquinolonas por citometria de fluxo

Fluoroquinolones are bactericidal drugs which have been widely used due to their great activity and wide spectrum namely against gram negative bacteria like Enterobacteriacea. Multidrug resistance is a rising health concern worldwide and increased AcrAB-TolC efflux pump expression has been documented in association with resistance to fluoroquinolones. The classic susceptibility methods are based on growth in the presence of antimicrobial drugs which takes at least 24 to 48 hours and empiric therapy usually is used to overcome this delayed answer. A rapid assay was created to determine the susceptibility of gram negative bacteria to ciprofloxacin and levofloxacin; facing a resistant phenotype, another protocol was developed to detect the presence of efflux pump over-expression. These are rapid and accurate protocols based on flow cytometry that demonstrated great advantages for clinical Microbiology. Sixty two resistant and susceptible clinical isolates of Enterobacteriaceae were tested for ciprofloxacin and fifty three were tested for levofloxacin, previously evaluated by Vitek2®. Genetically modified E. coli K12 with AcrAB-TolC efflux system inactivated, over-expressed and wild-type were used as efflux controls. For susceptibility profile, the cells were incubated with antimicrobial breakpoints according to CLSI, then fixed with ethanol 70% (v/v) and stained with SYBR-Green I, a nucleic acid probe. CFU assays were performed before flow cytometric analysis. For efflux activity study thirty resistant strains were tested. Bacteria were diluted in PBS supplemented with glucose and subinhibitory concentrations of ciprofloxacin and stained with Ethidium Bromide. In parallel the same strains were incubated with chlorpromazine, a pump inhibitor, and the protocol repeated. Flow cytometric analysis was performed in FL1 (520 nm) and FL3 (600 nm) for susceptibility phenotype and efflux determination, respectively. In the susceptibility test, susceptible strains showed a decrease in the fluorescence intensity compared to the control; conversely, resistant strains maintained approximate values, even after incubation with high concentrations of the drugs. Correlation between conventional CFU assay and flow cytometry was successfully achieved. In the efflux assay, a comparison between the fluorescence intensity with and without chlorpromazine was done. When it decreased there was AcrAB-TolC over-expression, if the values maintained there wasn’t. Flow cytometry demonstrated to be an excellent approach to evaluate the resistance to fluoroquinolones and the responsibility of efflux pumps on such resistance.As fluoroquinolonas são fármacos bactericidas amplamente utilizadas devido à sua elevada actividade e largo espectro nomeadamente contra bactérias gram negativo como é o caso das Enterobactereaceae. A resistência a antibacterianos é um tema preocupante a nível mundial. Os métodos de susceptibilidade clássicos baseiam-se no crescimento bacteriano na presença de antibacterianos, cujos resultados demoram pelo menos 24 a 48 horas a obter, sendo muitas vezes necessário recorrer a terapia empírica. Foi criado um teste rápido para determinar a susceptibilidade de bactérias gram negativo à ciprofloxacina e levofloxacina; no caso de fenótipos resistentes foi desenvolvido um outro protocolo para detectar a presença de sobre-expressão de bombas de efluxo, um mecanismo de defesa bacteriano bem documentado. Tratam-se de testes rápidos e precisos que utilizam a citometria de fluxo e demonstraram grandes vantagens para a Microbiologia clínica. Sessenta e dois isolados clínicos de Enterobactereaceae foram testados para a ciprofloxacina e cinquenta e três para a levofloxacina, previamente avaliados pelo sistema Vitek2®. E. coli K12 geneticamente modificadas com o sistema de efluxo AcrAB-TolC inactivado, sobre-expresso e wild-type foram utilizadas como controlos de efluxo. Para o perfil de susceptibilidade, as células foram incubadas com os breakpoints fornecidos pelo CLSI, em seguida fixadas com etanol 70% (v/v) e marcadas com SYBR-Green I, uma sonda de ácidos nucleicos. A contagem de UFC foi realizada antes da análise citométrica. Para o estudo do efluxo, trinta isolados foram estudados onde as células são diluídas em PBS suplementado com glucose e concentrações subinibitórias de ciprofloxacina e marcadas com brometo de etídio. Em paralelo, as mesmas estirpes são incubadas com clorpromazina, um inibidor de efluxo, e o protocolo repetido. A análise citométrica foi realizada em FL1 (520 nm) e FL3 (600 nm) para a avaliação de susceptibilidade e a determinação do efluxo, respectivamente. As estirpes susceptíveis incubadas com os antibacterianos demonstraram uma diminuição da intensidade de fluorescência comparando com as não tratadas. As estirpes resistentes mantiveram valores aproximados, mesmo após incubação com altas concentrações de fármaco. Verificou-se correlação entre a contagem de UFC e a citometria de fluxo. Para o ensaio de efluxo, comparou-se a intensidade de fluorescência com e sem clorpromazina. Nos casos de sobreexpressão da bomba de efluxo AcrAB-TolC a intensidade de fluorescência diminuiu. A citometria de fluxo demonstrou ser uma excelente ferramenta para avaliar a resistência às fluoroquinolonas e a responsabilidade do efluxo nessa mesma resistência

On the use of code mobility mechanisms in real-time systems

Applications with soft real-time requirements can benefit from code mobility mechanisms, as long as those mechanisms support the timing and Quality of Service requirements of applications. In this paper, a generic model for code mobility mechanisms is presented. The proposed model gives system designers the necessary tools to perform a statistical timing analysis on the execution of the mobility mechanisms that can be used to determine the impact of code mobility in distributed real-time applications

Incorporation of blackberry pulp as antioxidant in edible and biodegradable films of arrowroot starch

Orientadores: Rafael Augustus de Oliveira, Farayde Matta FakhouriTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia AgrícolaResumo: Embalagens de alimentos usualmente são provenientes de fontes não renováveis acarretando problemas ambientais. Uma das formas encontradas para minimizar esse impacto é o desenvolvimento de filmes biodegradáveis. O amido de araruta é uma matéria-prima potencial para elaboração desses filmes. Filmes podem servir como veículos de transporte de aditivos alimentares, como agentes antioxidantes extendendo a sua aplicabilidade como filmes antioxidantes e comestíveis. Amora preta é um fruto rico em compostos bioativos. A microencapsulação da sua polpa permite manter a estabilidade de seus compostos bioativos quando expostos a condições desfavoráveis, sendo uma tecnologia promissora para conservar sua funcionalidade, bem como aprimorar as propriedades funcionais dos filmes. Neste contexto, a primeira parte desse trabalho teve como objetivo a extração e caracterização do amido de araruta quanto às propriedades físico-quimicas, térmicas e estruturais. O amido apresentou alto teor de amilose, habilidade de gelificação e propriedades térmicas desejáveis para a sua utilização como agente encapsulante, bem como polímero na produção de filmes comestíveis e biodegradáveis. Posteriormente, avaliou-se sua capacidade como agente encapsulante em mistura com a goma arábica para a microencapsulação da polpa de amora por spray drying e freeze drying. Os polímeros apresentaram alta compatibilidade entre si e a polpa de amora, exibindo um efeito termoprotetor do ácido ascórbico e das antocianinas durante o processo de spray drying, confirmando sua adequação como agente encapsulante. Essa mistura foi capaz de tornar a polpa de amora mais estável, diminuindo a sua pegajosidade e aderência na parede da câmara de secagem e do ciclone via microencapsulação. O método de microencapsulação, a temperatura do ar de entrada e a concentração de agente encapsulante influenciaram significativamente as propriedades físico-químicas dos pós de amora. Na terceira parte desse trabalho foi avaliada a capacidade do amido de araruta como matriz formadora de filmes, bem como, veículo de transporte de polpa de amora para filmes comestíveis e antioxidantes. Os filmes preparados com amido de araruta e glicerol desprenderam das placas de suporte, eram manipuláveis, transparentes e inodoros, o que confirmam a sua aplicabilidade para esse fim. A concentração de amido e de glicerol utilizada na elaboração dos filmes afetaram significativamente a espessura e a solubilidade em água. A incorporação da amora na solução filmogênica transferiu ao filme compostos bioativos e atividade antioxidante. O tipo de incorporação, direta ou sprinkling de amora na solução filmogênica, influenciou na extração dos compostos bioativos, na capacidade antioxidante e solubilidade em água dos filmes. A espessura, a solubilidade em água, a permeabilidade ao vapor de água e a elongação aumentaram significativamente com o aumento da concentração de polpa de amora (20, 30 e 40%) nos filmes, enquanto a resistência à tração diminuiu. Houve um escurecimento dos filmes com polpa de amora após o processo de esterilização. Os filmes foram quase que totalmente desintegrados após 38 dias enterrados em compostagem orgânica, exibindo facilidade de biodesintegração. Considerando-se o conteúdo de compostos bioativos, atividade antioxidante e propriedades funcionais dos filmes de amido de araruta com polpa amora, sugerem-se a sua utilização como revestimentos coloridos para alimentos, como encapsulante e/ou embalagens modificadas como substitutos das embalagens de alimentos, intermediárias não biodegradáveis, ou ainda, para serem consumidos na forma de tiras de frutasAbstract: Food packaging usually comes from non-renewable sources, causing environmental problems. One of the ways found to minimize this impact is the development of biodegradable films. Arrowroot starch is a potential raw material for production of these films. Films can serve as transport vehicles for food additive, as antioxidants, extending their applicability as antioxidant and edible films. Blackberry is a fruit rich in bioactive compounds. The microencapsulation of its pulp allows to maintain the stability of its bioactive compounds when exposed to unfavorable conditions, becoming a promising technology to conserve its functionality, as well as to improve the functional properties of films. In this context, the first part of this work had the objective of extracting and characterizing the arrowroot starch in relation to physicochemical, thermal and structural properties. The starch had high amylose content, gelling ability and desirable thermal properties for using as encapsulating agent, as well as polymer in edible and biodegradable films production. Subsequently, its capacity as encapsulating agent in mixture with Arabic gum was evaluated for microencapsulation of blackberry pulp by spray drying and freeze drying. The polymers showed high compatibility between each other and of blackberry pulp, showing thermoprotective effect of ascorbic acid and anthocyanins during spray drying process, confirming its suitability as encapsulating agent. This mixture made blackberry pulp more stable, reducing its stickiness and adherence to the drying chamber and cyclone walls via microencapsulation. The microencapsulation method, the inlet air temperature and the encapsulating agent concentration significantly influenced physicochemical properties of blackberry powders. In the third part of this work, the capacity of arrowroot starch as film-forming matrix was evaluated, as well as carrier of blackberry pulp for edible and antioxidant films. Films prepared with arrowroot starch and glycerol detached from the support plates, were manipulable, transparent and odorless, confirming their applicability for this purpose. The concentration of starch and glycerol used in preparation of films significantly affected thickness and solubility in water. Incorporation of blackberry into the film-forming solution transferred bioactive compounds and antioxidant capacity to the films. The type of incorporation of blackberry, directly or by sprinkling, in the filmogenic solution influenced bioactive compounds extraction, antioxidant capacity and water solubility of the films. Thickness, water solubility, water vapor permeability and elongation increased significantly with increasing blackberry pulp concentration (20, 30 and 40%) in films, while tensile strength decreased. There was darkening of films with blackberry pulp after sterilization process. Films were almost completely disintegrated after 38 days buried in organic compost, exhibiting ease of biodesintegration. Considering the content of bioactive compounds, antioxidant capacity and functional properties of arrowroot starch films with blackberry pulp, it is suggested to use them as colorful food coatings, as encapsulant and/or modified packaging as substitutes for non-biodegradable intermediate food packaging, or to be consumed in the form of fruit stripesDoutoradoTecnologia Pós-ColheitaDoutora em Engenharia Agrícola01-P-3712/2017CAPE

Gastrointestinal parasite risk in dog parks in the Lisbon area

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaDog parks may pose a risk for the transmission of parasitic zoonotic agents via the faeces and soil contact. This is the first study to investigate gastrointestinal infections in park-attending dogs in Lisbon. The research was carried out under the frame of a field study including both parasitological and a survey approach. 369 faecal and 18 soil samples were collected from three dog parks in the Lisbon area and analysed for parasite eggs. 102 questionnaires were filled. The overall prevalence for positive faecal samples was 33%. Ancylostomatidae represent 17%, Cryptosporidium spp. 12%, Giardia spp. 11%, Toxascaris leonina and Cystoisospora spp. 1% each, Toxocara spp. 0.5% and Sarcocystis spp. 0.3%. From soil samples, 28% were contaminated with only Ancylostomatidae eggs. In the last 12 months 94% of the dogs were observed by a veterinarian. 90% were dewormed in the previous six months, from which 28% at least four times a year. Additionally, 26% of the dogs share the house with at least one dog, 50% visit the park daily, and 75% were always allowed to be off-leash. Also, 1% was fed with raw meat. Despite 94% of the owner’s claimed faecal collection of their pets, it was common to see 10-20 faecal samples on the environment of every dog space on sampling days. Regarding the pet-owner relationship, 76% of the dogs were allowed to lick their owners’ faces, 82% to be in their bedroom and 43% to sleep in their bed. Approximately one third of faecal samples of dogs in canine parks was infected with gastrointestinal parasites, some with potential zoonotic risk. Less than a quarter of the dogs were dewormed following the recommended schedule (at least 4 times a year). The majority of the owners have close physical contact with their dogs, increasing the transmission risk of zoonoses. Public awareness about potential risks and preventive procedures is therefore advised.RESUMO - Risco parasitário gastrointestinal em parques caninos na área de Lisboa - Os parques caninos podem representar um risco para a transmissão de agentes parasitários zoonóticos através do contato com fezes e solo. Este é o primeiro estudo a investigar infeções gastrointestinais em cães que frequentam parques caninos em Lisboa. O estudo foi realizado sob a estrutura de um estudo de campo, incluindo tanto uma abordagem parasitológica como um questionário. 369 amostras fecais e 18 amostras de solo foram recolhidos de três parques caninos na área da Grande Lisboa e analisadas para ovos de parasitas. 102 inquéritos foram preenchidos. A prevalência global de amostras fecais positivas foi de 33%. A presença de Ancylostomatidae representa 17%, Cryptosporidium spp. 12%, Giardia spp. 11%, Toxascaris leonina e Cystoisospora spp. 1% cada, Toxocara spp. 0.5% e Sarcocystis spp. 0.3%. Das amostras de solo, 28% estavam contaminadas apenas com ovos de Ancylostomatidae. Nos últimos 12 meses 94% dos cães foram observados por um veterinário. 90% foram desparasitados nos seis meses anteriores, dos quais 28% pelo menos quatro vezes por ano. Além disso, 26% dos cães partilha a casa com, pelo menos um cão, 50% visita o parque diariamente, e 75% foi sempre autorizado a estar solto. Além disso, 1% era alimentado com comida crua. Apesar de 94% dos proprietários alegar a colheita das fezes dos seus animais de estimação, era comum ver 10-20 amostras fecais em cada espaço canino nos dias de amostragem. Tendo em conta o relacionamento do animal de estimação com o dono, 76% dos cães eram autorizados a lamber as caras dos donos, 82% a estar no seu quarto e 43% a dormir na sua cama. Aproximadamente um terço das amostras fecais de cães de parques caninos estava infectado com parasitas gastrointestinais, alguns com potencial risco zoonótico. Menos de um quarto dos cães eram desparasitados seguindo o esquema recomendado (pelo menos 4 vezes por ano). A maioria dos proprietários tem contato físico com os seus cães, aumentando o risco de transmissão de zoonoses. A sensibilização do público sobre os riscos potenciais e os procedimentos de prevenção é, portanto, aconselhável

Pollination Services Provided by Melipona quadrifasciata Lepeletier (Hymenoptera: Meliponini) in Greenhouses with Solanum lycopersicum L. (Solanaceae)

Stingless bees are considered particularly promising for use as commercial pollinators, but studies testing the effectiveness of these bees in pollinating grape tomatoes in greenhouses have not yet been made. This study aimed to analyse the floral biology of the grape tomato and evaluate whether additional pollination performed by Melipona quadrifasciata Lepeletier, 1836 generates an effective increase in production and improves the quality of this variety of tomato when grown in greenhouses. The research was conducted in two greenhouses located in Araguari, Minas Gerais state, Brazil. In one, we only used a mechanical method of pollination and, in the other, pollination by the mechanical method was associated with pollination performed by the bees. The productivity of the greenhouses was compared by recording the number of flowers and fruits formed on different branches, and the quality of the tomatoes was assessed by analysing their size, weight, number of seeds and total sugar content. Tomatoes originating from flowers visited by M. quadrifasciata workers produced about 47% more seeds and their concentration of sugar was approximately 14% higher. These results suggest that using M. quadrifasciata for tomato pollination shows promise, since positive effects were generated on fruit quality

Cellular interplay in pulmonary arterial hypertension: Implications for new therapies

AbstractPulmonary arterial hypertension (PAH) is a complex and multifactorial disease characterized by vascular remodeling, vasoconstriction, inflammation and thrombosis. Although the available therapies have resulted in improvements in morbidity and survival, PAH remains a severe and devastating disease with a poor prognosis and a high mortality, justifying the need of novel therapeutic targets. An increasing number of studies have demonstrated that endothelial cells (ECs), smooth muscle cells (SMCs) and fibroblasts of the pulmonary vessel wall, as well as platelets and inflammatory cells have a role in PAH pathogenesis. This review aims to integrate the interplay among different types of cells, during PAH development and progression, and the impact of current therapies in cellular modulation. The interplay among endothelial cells, smooth muscle cells and fibroblasts present in pulmonary vessels wall, platelets and inflammatory cells is regulated by several mediators produced by these cells, contributing to the pathophysiologic features of PAH. Current therapies are mainly focused in the pulmonary vascular tone and in the endothelial dysfunction. However, once they have not been effective, novel therapies targeting other PAH features, such as inflammation and platelet dysfunction are emerging. Further understanding of the interplay among different vascular cell types involved in PAH development and progression can contribute to find novel therapeutic targets, decreasing PAH mortality and morbidity in the future

Corporate social responsibility in islamic financial institutions

Classificação: M14; N25The evolution of the concept of Corporate Social Responsibility has created a lot of debate in the modern world. In the financial world, the engagement in social responsible activities, such as, providing guidelines on sustainability, environmental impact reduction, donations to charitable causes or supporting communities have become a common practice for the vast majority of financial institutions. Islamic Financial Institutions, due to its religious bond, are bound to operate in a system that places social goals at the same level, or even above, of financial goals. Actually, the ethical system and values of Islam, alongside the Shari‘ah law, provide a natural framework of social responsibility for Islamic Financial Institutions. Besides the most common characteristics of Corporate Social Responsibility, there are some singular and unique to the Islamic Financial Institutions, for instance, the collection and distribution of Zakat, the establishment of Qard-Hassan and distribution policy (for social reasons) and the management of Waqf properties on behalf of clients. The unique characteristics of these institutions are present in their everyday activities with a strong focus of the prohibition of interest (riba), prohibited (haram) activities and avoidance of uncertainty/speculation (gahrar) and, on the other hand, the offer of products that are Shari‘ah compliant, notably, profit-andloss sharing arrangements. To understand if the literature concerning Islamic Corporate Social Responsibility matches the actual practices of Islamic Financial Institutions, a study of four published surveys, by renowned authors, was undertaken and the conclusions and implications for the future of Islamic Financial Institutions were drawn.A evolução do conceito de Responsabilidade Social das Empresas criou um grande debate no mundo moderno. Na área financeira, o compromisso com actividades de responsabilidade social, como a criação de linhas orientadoras para a sustentabilidade, redução do impacto ambiental, acções filantrópicas ou apoios à comunidade, tornaram-se comuns para a maior parte das instituições financeiras. As instituições financeiras Islâmicas, devido à sua ligação religiosa, estão sujeitas a actuar num sistema que coloca os objectivos sociais no mesmo patamar, ou mesmo acima, dos objectivos financeiros. O sistema ético e valores do Islão, bem como da lei Shari‘ah, proporcionam uma delineação natural de responsabilidade social para as instituições financeiras Islâmicas. Além das características mais comuns da responsabilidade social das empresas, existem outras singulares e únicas que são inerentes às instituições financeiras Islâmicas, por exemplo, a recolha e distribuição do zakat, a criação de fundos Qard-Hassan e respectiva política de distribuição e gestão de propriedades Waqf em benefício dos clientes. As características únicas destas instituições estão presentes nas suas actividades diárias com especial atenção na proibição da usura, actividades proibidas (haram) e afastamento de incerteza/especulação (gahrar), bem como a oferta de produtos que respeitam a lei Shari‘ah, por exemplo, oportunidades de investimento sob o ideal de partilha de lucros e perdas. Para perceber se a literatura respeitante à responsabilidade social das empresas Islâmicas vai ao encontro das práticas actuais destas instituições, foi conduzido um estudo de quatro inquéritos de autores de renome, e foram tiradas conclusões e implicações para o futuro destas instituições financeiras

As marcas de uso regionais em dicionários bilíngues escolares português/espanhol

IX Congresso Brasileiro de Hispanistas realizado nos dias 22 a 25 agosto 2016As marcas de uso diatópicas indicam restrições do tipo geográfico para o uso de uma determinada unidade lexical. No caso específico da língua espanhola, a confecção de dicionários bilíngues parece não dar real relevância à variação linguística. Considerando a falta de reflexão mais profunda sobre a diversidade linguística do espanhol, no âmbito da lexicografia, este trabalho discute a necessidade de normalização de marcas de uso dialetais em dicionário bilíngues e descreve como tais marcas estão inseridas em dicionários bilíngues escolares do espanhol. As análises, ainda em andamento, nos permitem entender que algumas marcas de uso se apresentam, nos dicionários analisados, de forma ambígua e incoerente, tanto no que se refere à sustentação quanto à pertinência da classificação adotada pelo lexicógrafo. Concluímos, portanto, que esta imprecisão dos dados se deu, em parte, devido à falta de uma explicitação de proposta lexicográfica quanto ao tratamento da variação linguística no espanhol nos verbetes das obras consultadasUNILA­-UNIOEST

Esclerose tuberosa com envolvimento pulmonar

AbstractTuberous sclerosis (TS) is a rare, sporadic or autosomal dominant disease characterized by the triad of seizures, mental retardation and angiofibromas. Lungs are rarely involved in TS, and pulmonary involvement is almost always found in females. We report the case of a 52 year-old female, nonsmoker, with a history of seizures in childhood and renal angiomyolipomas. She presented no complaints and her physical exam was normal. Chest CT performed for the evaluation of the disease detected thin-walled pulmonary cysts in both lungs. Lung function tests were normal. Cortical tubers and calcified subependymal nodules were seen in cerebral magnetic resonance. Tuberous sclerosis was diagnosed (lymphangioleiomyomatosis, cortical tubers, calcified subependymal nodules and angiomyiolipomas). The authors present this case because of its rarity and the existence of pulmonary involvement, while still asymptomatic.Rev Port Pneumol 2010; XVI (2): 339-34

Network of Bee-plant Interactions and Recognition of Key Species in Semideciduous Forest

Bees are the most effective pollinators of native plants, contributing to forest maintenance. Obtaining information about networks of bee-plant interactions is critical for conservation and habitat management of native pollinators. This study aimed to determine the richness of flower-visiting bees in a fragment of Semideciduous Forest (SF) in Uberlândia-MG, identify the plants visited by them and build a network of bee-plant interactions in this fragment. The study was conducted between October 2010 and September 2011 in a transect of 200 meters on the edge of the forest, with monthly collections performed from 8:00 am to 2:30 pm. We constructed the network of bee-plant interactions and calculated the NODF index and betweenness centrality. We collected 70 bee species and 25 plant species. The network of interactions was nested (NODF = 10.97, P = 0:03). Apis mellifera Linnaeus and Merremia macrocalyx (Ruiz & Pav.) O'Donell showed the highest centrality. The nestedness of the network of bee-plant interactions gives it stability, demonstrating its importance to the fragment’s conservation. It is suggested that M. macrocalyx is a key species in this network, since this plant attracted the highest number of bee species and showed the highest centrality, contributing to network cohesion