The mycobacterial DNA-binding protein 1 (MDP1) from Mycobacterium bovis BCG influences various growth characteristics

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Pathogenic mycobacteria such as <it>M. tuberculosis</it>, <it>M. bovis </it>or <it>M. leprae </it>are characterised by their extremely slow growth rate which plays an important role in mycobacterial virulence and eradication of the bacteria. Various limiting factors influence the generation time of mycobacteria, and the mycobacterial DNA-binding protein 1 (MDP1) has also been implicated in growth regulation. Our strategy to investigate the role of MDP1 in mycobacterial growth consisted in the generation and characterisation of a <it>M. bovis </it>BCG derivative expressing a MDP1-antisense gene.</p> <p>Results</p> <p>The expression rate of the MDP1 protein in the recombinant <it>M. bovis </it>BCG containing the MDP1-antisense plasmid was reduced by about 50% compared to the reference strain <it>M. bovis </it>BCG containing the empty vector. In comparison to this reference strain, the recombinant <it>M. bovis </it>BCG grew faster in broth culture and reached higher cell masses in stationary phase. Likewise its intracellular growth in mouse and human macrophages was ameliorated. Bacterial clumping in broth culture was reduced by the antisense plasmid. The antisense plasmid increased the susceptibility of the bacteria towards Ampicillin. 2-D protein gels of bacteria maintained under oxygen-poor conditions demonstrated a reduction in the number and the intensity of many protein spots in the antisense strain compared to the reference strain.</p> <p>Conclusion</p> <p>The MDP1 protein has a major impact on various growth characteristics of <it>M. bovis </it>BCG. It plays an important role in virulence-related traits such as aggregate formation and intracellular multiplication. Its impact on the protein expression in a low-oxygen atmosphere indicates a role in the adaptation to the hypoxic conditions present in the granuloma.</p

The Polyketide Synthase Pks13 Catalyzes a Novel Mechanism of Lipid Transfer in Mycobacteria

SummaryMycolate-containing compounds constitute major strategic elements of the protective coat surrounding the tubercle bacillus. We have previously shown that FAAL32-Pks13 polyketide synthase catalyzes the condensation reaction, which produces α-alkyl β-ketoacids, direct precursors of mycolic acids. In contrast to the current biosynthesis model, we show here that Pks13 catalyzes itself the release of the neosynthesized products and demonstrate that this function is carried by its thioesterase-like domain. Most importantly, in agreement with the prediction of a trehalose-binding pocket in its catalytic site, this domain exhibits an acyltransferase activity and transfers Pks13’s products onto an acceptor molecule, mainly trehalose, leading to the formation of the trehalose monomycolate precursor. Thus, this work allows elucidation of the hinge step of the mycolate-containing compound biosynthesis pathway. Above all, it highlights a unique mechanism of transfer of polyketide synthase products in mycobacteria, which is distinct from the conventional intervention of the discrete polyketide-associated protein (Pap)-type acyltransferases

Unexpected Modulation of Recall B and T Cell Responses after Immunization with Rotavirus-like Particles in the Presence of LT-R192G

LT-R192G, a mutant of the thermolabile enterotoxin of E. coli, is a potent adjuvant of immunization. Immune responses are generally analyzed at the end of protocols including at least 2 administrations, but rarely after a prime. To investigate this point, we compared B and T cell responses in mice after one and two intrarectal immunizations with 2/6 rotavirus-like particles (2/6-VLP) and LT-R192G. After a boost, we found, an unexpected lower B cell expansion measured by flow cytometry, despite a secondary antibody response. We then analyzed CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells (Tregs) and CD4+CD25+Foxp3− helper T cells after in vitro (re)stimulation of mesenteric lymph node cells with the antigen (2/6-VLP), the adjuvant (LT-R192G) or both. 2/6-VLP did not activate CD4+CD25+Foxp3− nor Foxp3+ T cells from non-immunized and 2/6-VLP immunized mice, whereas they did activate both subsets from mice immunized with 2/6-VLP in the presence of adjuvant. LT-R192G dramatically decreased CD4+CD25+Foxp3+ T cells from non-immunized and 2/6-VLP immunized mice but not from mice immunized with 2/6-VLP and adjuvant. Moreover, in this case, LT-R192G increased Foxp3 expression on CD4+CD25+Foxp3+ cells, suggesting specific Treg activation during the recall. Finally, when both 2/6-VLP and LT-R192G were used for restimulation, LT-R192G clearly suppressed both 2/6-VLP-specific CD4+CD25+Foxp3− and Foxp3+ T cells. All together, these results suggest that LT-R192G exerts different effects on CD4+CD25+Foxp3+ T cells, depending on a first or a second contact. The unexpected immunomodulation observed during the recall should be considered in designing vaccination protocols

Tours et détours en bibliothèque. Carnet de voyage

Une bibliothèque pour faire quoi ? 19 écrivains et 1 plasticienne répondent, à leur manière – pour faire un tour, pour regarder un film, pour donner RDV, pour se mettre au chaud, pour lire, pour mettre le feu, pour parler de Flaubert, pour photographier le chantier, pour faire le ménage, pour être seul avec d'autres, pour travailler, pour dormir... Dans des styles différents, entre récits, nouvelles ou témoignages, les auteurs ont composé un portrait à multiples facettes de ce lieu public, et de ses passagers. Leurs textes reflètent aussi les grandes tendances de la littérature contemporaine, tournés pour certains vers le politique ou le social, pour d'autres vers le poétique ou le biographique. De son côté, en photographe, Aurélie Pétrel donne un ancrage visuel à ce Carnet de voyage

Tours et détours en bibliothèque. Carnet de voyage

Une bibliothèque pour faire quoi ? 19 écrivains et 1 plasticienne répondent, à leur manière – pour faire un tour, pour regarder un film, pour donner RDV, pour se mettre au chaud, pour lire, pour mettre le feu, pour parler de Flaubert, pour photographier le chantier, pour faire le ménage, pour être seul avec d\u27autres, pour travailler, pour dormir... Dans des styles différents, entre récits, nouvelles ou témoignages, les auteurs ont composé un portrait à multiples facettes de ce lieu public, et de ses passagers. Leurs textes reflètent aussi les grandes tendances de la littérature contemporaine, tournés pour certains vers le politique ou le social, pour d\u27autres vers le poétique ou le biographique. De son côté, en photographe, Aurélie Pétrel donne un ancrage visuel à ce Carnet de voyage

Characteristics of Acacia mangium shoot apical meristems in natural and in vitro conditions in relation to heteroblasty

PDF version of the authors can be published in January 2013International audienceMorphological and histocytological characteristics of Acacia mangium shoot apical meristems (SAMs) were assessed in natural and in vitro conditions in relation to heteroblasty. In the natural environment, SAMs with a mature-phyllode morphology were much bigger, contained more cells with larger vacuolated area, or vacuome, and lower nucleoplasmic ratios than those from the juvenile type (Juv). In these latter, nuclei appeared more voluminous, evenly and lightly stained, with clearly distinguishable nucleolei and less abundant chromocenters. In vitro, where reversions from mature to juvenile morphological traits do occur unpredictably, heteroblasty was less obvious in the SAM characteristics examined. In vitro SAMs corresponding to the juvenile and mature types showed similarities with outdoor Juv SAMs, but could be distinguished from these latter by a much larger vacuome that might be induced by the culture conditions. These findings encourage pursuing the investigations at the chromatin and nucleolus level in SAM zones where heteroblasty-related differences have been detected

VIH et grossesse (évolution de la prise en charge de la grossesse séropositive à l'Hôtel Dieu de Lyon de 1990 à 2000)

LYON1-BU Santé (693882101) / SudocSudocFranceF

Candida albicans interaction with enterocytes : impact on tight junction integrity

Candida albicans est une levure dimorphique, commensale des muqueuses digestives, orales et/ou vaginales, la plus fréquemment isolée chez l’Homme. Les différences observées dans le mode d’invasion tissulaire de C. albicans, sont dues en partie à la structure des épithéliums oraux et digestifs. Ce dernier se présente en couche monocellulaire imperméable grâce à différentes jonctions telles que les jonctions serrées (tight junctions, TJ) dont les protéines fonctionnelles sont localisées au niveau membranaire. L’objectif de ce travail est de déterminer si l’infection des cellules entérocytaires Caco-2 par C. albicans entraine une modification de la structure des TJ. Tout d’abord, l’étude de la perméabilité tissulaire (analyse du passage para-cellulaire de molécules fluorescentes (Lucifer Yellow)) de monocouches de cellules Caco-2 cultivées en insert, infectées ou non par C. albicans, démontre une action modulatrice de la levure avec l’augmentation progressive de cette perméabilité tissulaire. Ensuite, l’analyse de l’expression protéique par NanoLC-MSMS ou par western blot de différentes protéines constitutives des TJ documentent une modification de leur structure, avec une diminution de ces protéines au niveau membranaire. Enfin l’étude de la localisation cellulaire de l’occludine, une protéine transmembranaire jouant un rôle clé dans l’intégrité des TJ, est réalisée par microscopie à fluorescence. Cet immunomarquage révèle la présence de doubles membranes, signe d’une perte de l’intégrité des TJ, et semble mettre en évidence une probable relocalisation cytoplasmique de cette protéine de la membrane vers le cytoplasme. Au final, ces données suggèrent qu’à fort inoculum, C. albicans pourrait faciliter son invasion au niveau des cellules entérocytaires en induisant une diminution de l’imperméabilité tissulaire, suite à l’altération de l’intégrité des TJ