Addressing the effects of short-term exposure to TiO2 nanoparticles in fish gills: An ex-vivo approach

With the fast increase of world-wide consumption and lack of legislation of engineered nanomaterials (ENMs), it is expected an increase of artificial production and consequently, an increase of the number of nanoparticles (NPs) that are released into the environment. Most nanoparticles present in the aquatic environment, such as those of titanium oxide nTiO2, have effects on histopathological alterations on fish, creating several implications on their health, and, consequently influencing aquatic environment status. The effects caused by the exposure to two realistic concentrations of nTiO2 (20 and 200 μgL-1, plus controls) were evaluated in gills of fish (S. senegalensis), through a short-term ex vivo approach, meaning that exposure was accomplished after dissection of gills from the animals. Alterations in gills were analysed, such as the formation of metal deposits and the specific alterations to gas-exchange epithelial and chloride cells. Standard histological techniques were coupled with fluorescent techniques to assess aforesaid alterations. Quantitative ad semi-quantitative approaches were employed. Overall, the main alterations observed in gill exposed to nTiO2 treatments were epithelial lifting, chloride cells autolysis and goblet cell hypertrophy. Higher severity and dissemination of alterations was observed for gills exposed to the highest concentration (200 μg nTiO2 L-1). In accordance, the gill global histopathological condition indice (Ih) increased with the increase of nTiO2 concentration in water at T2 and T4. The number of CC (Chloride cells) and GC (Goblet cells) per interlamellar space also increased with the exposure to nTiO2, at T2, however without a clear relationship with the concentration. Metal deposits were found in gill macrophages, distributed consistently trough all treatments, failing to demonstrate any cause-effect relation between concentrations and time of exposure. Overall, the present study indicates that under ecologically-relevant concentrations of nTiO2 caused moderately histopathological lesions in gills of S. senegalensis. Although, the alterations in mucocytes indicated responses to the challenge, the exposure to TiO2 promoted osmotic imbalance. The present ex vivo study significantly contributed to define further procedures to nanotoxicity studies

Wittgenstein's Tractatus deranged : a metaphilosophical story

Taking off from some the more recent discussions regarding the puzzling character of Ludwig Wittgenstein’s Tractatus Logico-Philosophicus, this dissertation aims at four main points, mostly negative ones, all closely related when considered from a Wittgensteinian angle: an exegetical, a metaphilosophical, a linguistic, and an ethical point. [1] Serving as a background illuminating the remaining three, the exegetical point is concerned with the particular modes of philosophical criticism Wittgenstein’s works ask for, favouring the idea that it is impossible to expound them as something finished, and so than even the Tractatus shall prove more profitable when taken as a collection of remarks, not as a system. [2] Arguably as pivotal, the metaphilosophical point expounds a non-metaphysical view of philosophy, aware of its own mutable, given its contiguity with all our other activities, and practical character: philosophy, we hold, following Wittgenstein, is the art of (dis)solving intellectual puzzles, a contribution to understanding, not to knowledge. [3] The linguistic point is somewhat made manifest by the former: the ways of doing philosophy here adopted, relying as much on hinting (often through the deliberate employment of figurative modes of expression or even nonsense) as on argument, end up indirectly drawing attention to the untenability of the idea that language might be a somewhat self-sufficient and clearly defined structure, asking for definitive explanations of its workings. [4] As for the ethical point, a complaint against prevailing contemporary approaches to ethics and aesthetics, and alongside the more or less subtle hints already provided by the other three, silence has been the chosen method to intimate it. Though mostly focused on the Tractatus, the present dissertation, tendentially favourable to the spirit of the “New Wittgenstein”, is meant to serve as a kind of window, even if a tiny one, to the Philosophical Investigations as well.Partindo de algumas das mais recentes discussões em torno do carácter enigmático do Tractatus Logico-Philosophicus de Ludwig Wittgenstein, esta dissertação procura desenvolver quatro pontos principais (exegético, metafilosófico, linguístico e ético), maioritariamente negativos, e de estreita relação entre si quando considerados de um ponto de vista wittgensteiniano. [1] Funcionando como uma espécie de pano de fundo elucidativo dos restantes três, o ponto exegético visa as formas de crítica filosófica requeridas pela obra de Wittgenstein, privilegiando a ideia de que é impossível tratá-la como algo acabado, pelo que até o Tractatus se poderá revelar mais proveitoso quando tomado como um conjunto de observações, não como um sistema. [2] Não menos central, o ponto metafilosófico desenvolve uma visão não metafísica da filosofia, consciente da sua própria natureza mutável, dada a sua contiguidade com todas as nossas restantes actividades, e essencialmente prática: a filosofia, defendemos, na senda de Wittgenstein, é a arte de resolver (ou antes dissolver) enigmas do pensamento, uma contribuição para a compreensão, não para o conhecimento. [3] O ponto linguístico é de certa maneira tornado manifesto pelo anterior: recorrendo tanto a estratégias sugestivas (entre as quais o emprego deliberado de enunciados figurados ou até absurdos) como a argumentos, o modo de fazer filosofia aqui adoptado acaba por chamar indirectamente a atenção para a insustentabilidade da ideia de que a linguagem se trata de uma estrutura claramente definida e em larga medida auto-suficiente, cujo funcionamento seria passível de explicações definitivas. [4] Quanto ao ponto ético, uma queixa contra as abordagens à ética e à estética de maior prevalência nos nossos dias, e a par das pistas mais ou menos subtis já fornecidas pelos outros três pontos, optou-se pelo silêncio como forma de o insinuar. Embora centrada sobretudo no Tractatus, a presente dissertação, tendencialmente favorável ao “Novo Wittgenstein”, procura também funcionar como uma espécie de janela, ainda que estreita, para as Investigações Filosóficas

The monetary transmission mechanism in the Euro Area : has it changed with the EMU?

Mestrado em Economia Monetária e FinanceiraWe study whether the adoption of the euro and a single monetary policy have brought about a change in the monetary transmission mechanism and in the interactions of monetary policy, fiscal policy and financial stress in the euro area. We find that the stylized facts of monetary transmission remain valid but the response of output and, mainly, the fiscal and financial stress variables to a monetary policy shock seem to be stronger in the post-EMU period. These changes may signal a higher degree of synchronization of the euro area countries’ economies after the adoption of the euro. Regarding fiscal and financial stress shocks, the inclusion in the post-EMU period of the subprime and sovereign debt crises yields changes not only in the scale but also in the patterns of the responses of our model’s main variables. Overall, we conclude that the subprime and sovereign debt crises have contributed markedly to the post-EMU impulse response functions and, if those periods of financial turbulence are excluded, the responses of the macro variables to monetary, fiscal and financial stress shocks in the post-EMU period are of a remarkably small magnitude

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CEM

Immunotherapy in melanoma : the role of nk cells

RESUMO: O melanoma é o quinto tumor maligno mais comum nos homens (sétimo nas mulheres) e a sua incidência está a aumentar mais rapidamente do que a de qualquer outro cancro. É o tipo de cancro cutâneo mais agressivo; corresponde a apenas 2% de todos os cancros de pele, mas é responsável por mais de 70% das mortes causadas pelo cancro cutâneo. O melanoma responde mal à terapia sistémica e tem mau prognóstico nos doentes com metástases à distância, com uma taxa de sobrevivência global aos 2 anos que varia entre os 18 e os 40%. No contexto do cancro identificamos duas respostas imunológicas opostas: uma resposta aguda anti-tumoral com predomínio de células Th1 podendo, consequentemente, levar a uma reacção auto-imune; e uma resposta inflamatória pró-tumoral, caracterizada por uma tolerância imunológica através de mecanismos imunossupressores. Durante a progressão do tumor verifica-se um desequilíbrio com um predomínio da resposta inflamatória pró-tumoral e disfunção das células anti-tumorais Th1. O conceito de "exaustão dos linfócitos T” tem sido desenvolvido nos últimos anos e pode explicar a disfunção das células Th1. Este conceito de "exaustão dos linfócitos T", consequência do microambiente tumoral ou de outros factores, foi descrita pela primeira vez em doenças infecciosas crónicas e mais recentemente em diferentes tipos de cancro, em particular no melanoma. Este fenótipo é caracterizado pela perda progressiva da capacidade de proliferação, do potencial citotóxico e da capacidade de produzir interleucina 2 (IL-2). A “exaustão dos linfócitos T” no contexto do cancro metastático tem sido reforçado pelo recente sucesso de imunoterapias dirigidas aos marcadores de exaustão expressados pelos linfócitos T, incluindo o CTLA-4 e o PD-1, em doentes com melanoma avançado. No entanto, o fenótipo e a função das NK em diferentes fases da progressão do tumor e a sua relação com fatores de prognóstico ainda é desconhecida. As células NK pertencem ao sistema imune inato e têm um papel importante na resposta antitumoral. A função destas células depende do equilíbrio entre os receptores de activação e de inibição, e da expressão dos respectivos ligandos no microambiente tumoral. O Tim-3, outro marcador de exaustão dos linfócitos T juntamente com o CTLA-4 e o PD-1, comporta-se como um receptor inibitório nos linfócitos T e tem um papel fundamental para a manutenção da tolerância imunológica. O Tim-3 também é expresso nas células NK, no entanto o seu papel na modulação da função destas células permanece pouco claro, em particular no contexto do cancro. Os objetivos deste estudo foram: caracterizar o fenótipo e a função das células NK em doentes com melanoma; identificar moléculas, que possam estar envolvidas no mecanismo da exaustão das células NK, como potenciais marcadores de prognóstico no melanoma; definir o papel do Tim-3 expresso nas células NK de doentes com melanoma avançado; e estudar o efeito do bloqueio de checkpoints imunológicos no fenótipo e função das células NK no contexto dos doentes com melanoma avançado. Os nossos dados mostraram que as células NK de doentes com melanoma avançado exibem um fenótipo de exaustão imunológica que é caracterizado por uma expressão aumentada dos receptores inibitórios KIR3DL1 e KIR2DL3, por uma expressão diminuida dos receptores de activação NKG2D, NKp46 e DNAM-1, por uma resposta deficiente à estimulação com IL-2, por uma regulação negativa dos fatores de transcrição T-bet e Eomes, e por um défice de função (citotoxicidade, produção de IFN-γ e proliferação). As células NK adquirem gradualmente este fenótipo de exaustão imunológica à medida que a doença avança dos estadios iniciais (estadios I e II) para estadios mais avançados (estadios III e IV). Curiosamente, este fenótipo de exaustão das células NK está associado as parâmetros clinico-patológicos com valor prognóstico conhecido, como a espessura e a presença/ausência de metástases (regionais e à distância). Além disso, níveis elevados de MICA solúvel (ligando do receptor NKG2D) no plasma podem estar envolvidos no mecanismo de exaustão das células NK e identificam doentes com sobrevivência global e tempo de livre de doença mais curtos. Neste trabalho também identificamos o Tim-3 como um receptor inibitório e com uma expressão aumentada nas células NK de doentes com melanoma avançado, e que desempenha um papel chave no fenótipo de exaustão destas células. Mais importante, mostramos ainda que o bloqueio do receptor Tim-3 consegue reveter, em parte, este fenótipo de exaustão, com um aumento da citotoxicidade em 20%, da produção de IFN-γ em 15% e da proliferação em 60%. Finalmente, caracterizamos o efeito do ipilimumab (anti-CTLA-4) no fenótipo de exaustão das células NK de doentes com melanoma avançado. Notavelmente, as células NK de doentesrespondedores ao tratamento com ipilimumab apresentaram níveis mais elevados de IL-2R e, por conseguinte, maior citotoxicidade em resposta à estimulação com IL-2. Estes dados abrem caminho para novas estratégias terapêuticas com base nas células NK, incluindo o bloqueio do receptor Tim-3 no contexto de melanoma. Além disso, uma melhor compreensão do mecanismo subjacente à exaustão das células NK irá definir novos marcadores de prognóstico e estratégias terapêuticas.ABSTRACT: Melanoma is the fifth most common cancer in men (seventh in women) and its incidence is increasing more rapidly than that of any other malignancy. It is the most aggressive type of skin cancer; although it accounts for 2% of all skin cancers it leads to more than 70% of their deaths. In fact, melanoma responds poorly to systemic therapy and the overall prognosis of patients with distant metastasized melanoma remains poor; the 2-year overall survival rate ranges from 18 to 40%. In the context of cancer two opposite immune responses exist: an acute T helper (Th) 1 antitumoral response that requires a substantial autoimmune attack; and a pro-tumorigenic inflammatory response, characterized by an immune tolerance via active immunosuppressive mechanisms. During tumor progression there is an imbalance with a stronger pro-tumorigenic inflammatory response, while the anti-tumoral Th1 cells display a dysfunctional phenotype. The new concept of “T cell exhaustion”, that has been developped in the past few years, can explain T cell dysfunction. This “T cell exhaustion”, either caused by environmental influence or other factors, was first described in chronic infectious diseases and more recently in different types of cancer, particularly in melanoma. This phenotype is characterized by early loss of proliferative capacity, cytotoxic potential, and the ability to produce interleukin (IL)-2. The concept of T cell exhaustion in the context of metastatic cancer has been reinforced by the recent success of immunotherapies targeting the exhaustion markers cytotoxic Tlymphocyte- associated protein 4 (CTLA-4) and programmed (cell) death 1 (PD-1) in advanced melanoma. However, the phenotype and function of natural killer (NK) cells in different phases of tumor progression and their relationship with prognostic factors is still unknown. NK cells are innate immune cells, prone to target tumor cells, whose function depends on the balance between activating and inhibitory receptors, and on the expression of the respective ligands in their microenvironment. T cell immunoglobulin domain and mucin domain 3 (Tim- 3), another T cell exhaustion marker along with CTLA-4 and PD-1, behaves as an inhibitory receptor in T cells and is key in the maintenance of immune tolerance. Tim-3 is also expressed in NK cells; however its role in modulating the function of these innate effector cells remains unclear, particularly in human disease. The aims of this study were: to characterize the phenotype and function of NK cells from melanoma patients; to identify potential players in the mechanism of NK cell exhaustion as prognostic markers; to define the role of Tim-3 expression in NK cells from advanced melanoma patients; and to study the effect of checkpoint blockade in NK cell phenotype and function in the context of advanced melanoma patients. Our data showed that NK cells from patients with advanced melanoma display an exhausted phenotype that is characterized by upregulation of inhibitory receptors (Killer cell Immunoglobulin-like receptor 3DL1 and 2DL3 - KIR3DL1 and KIR2DL3, respectively), downregulation of activating receptors (natural-killer group 2D (NKG2D), natural killer p46 (NKp46) and DNAX accessory molecule-1 (DNAM-1)), unresponsiveness to IL-2 stimulation, downregulation of the transcription factors T-box (T-bet) and eomesodermin (Eomes), and defective function. The latter includes the main NK cell functions, cytotoxicity, interferon gamma (IFN-γ) production and proliferation. NK cells acquire this exhausted phenotype gradually as disease advances from early (stages I and II) to later stages (stages III and IV). Moreover, the exhaustion of NK cells is associated with clinicopathological parameters that have known prognostic value, such as thickness and presence/absence of metastases (regional and distant). In addition, high serum levels of soluble MHC class I chain-related genes A (sMICA), an NKG2D ligand (NKG2DL) that may be involved in the mechanism of NK cell exhaustion, identify patients with shorter diseasefree and overall survival. We also identified Tim-3 as an inhibitory receptor over-expressed in NK cells from advanced melanoma patients that plays a key role in the exhausted phenotype of these cells. Significantly, we demonstrated that Tim-3 blockade partially reversed this exhausted phenotype. Therefore, in average, it was possible to enhance cytotoxicity by 20%, IFNγ production by 15% and proliferation by 60%. Finally, we characterized the effect of ipilimumab (anti-CTLA-4) on exhausted NK cells from advanced melanoma patients. Remarkably, NK cells from responders to ipilimumab treatment have higher levels of IL-2 receptor (IL-2R), and consequently, are more responsive to IL-2 stimulation and more cytotoxic.These data open exciting avenues for new NK cell-based therapies, including targeting Tim-3 in the context of melanoma. Moreover, a better understanding of the mechanism behind NK cell exhaustion will help defining new prognostic markers and therapeutic strategies

Beneficial role of regular physical exercise on tumor development and different susceptibility of muscle fibers to cancer-induced wasting in mice

A presente tese é suportada por uma revisão da literatura que reuniu o conhecimento teórico acerca da influência da vascularização no microambiente tumoral e do exercício físico como potencial agente modulador da vasculatura tumoral e por uma revisão sistemática com meta-análise, que permitiu sistematizar e quantificar a evidência da investigação produzida em modelos animais relativa aos efeitos da vascularização no crescimento tumoral. O trabalho experimental consistiu numa revisão sistemática com meta-análise de estudos realizados com animais, acerca dos efeitos do exercício físico na vasculatura tumoral e em dois protocolos, um com ratinhos machos C57BL/6 do qual resultaram dois estudos com o objetivo de investigar o efeito da corrida voluntária regular no crescimento tumoral, na sua vascularização e infiltração linfocitária e outro com ratinhos machos CR (CD1), que pretendeu descrever o impacto do desenvolvimento de cancro em diferentes tipos de músculo esquelético. A primeira revisão sistemática com meta-análise mostrou que a diminuição da vascularização tumoral induzida por terapia inibidora da angiogénese permitiu atenuar o crescimento tumoral, enquanto os estudos empíricos revelaram que a prática de exercício físico aumentou a vascularização dos tumores e que a corrida voluntária regular atenuou o crescimento tumoral através da diminuição da proliferação celular, do aumento da apoptose e melhor vascularização, da maior quantidade de linfócitos T CD8+ e de mais recetores NKG2D no tumor. Verificou-se também que a atrofia muscular induzida pelo desenvolvimento de cancro ocorreu preferencialmente nos músculos glicolíticos, constituídos maioritariamente por fibras tipo II, poupando os músculos oxidativos, compostos predominantemente por fibras tipo I e com um nível superior de atividade contráctil. Os resultados encontrados permitem concluir que no modelo animal a corrida voluntária regular melhora a vascularização tumoral e o acesso das células imunitárias, atenuando o crescimento tumoral e que os músculos glicolíticos são mais afetados pelo desenvolvimento de cancro. PALAVRAS-CHAVE: CORRIDA VOLUNTÁRIA, MICROAMBIENTE TUMORAL, VASCULARIZAÇÃO, IMUNIDADE, ATROFIA MUSCULAR.The present thesis is supported by a literature review that overviewed the current theoretical knowledge about the implications of the vascularization on the tumor microenvironment, and by a systematic review with meta-analysis that allowed us to systematize and quantify the existing evidence about the effects of vascularization on tumor growth, in animal models. The experimental work was based on a systematic review with meta-analysis of animal studies, regarding the effects of physical exercise on tumor vascularization, and on two different protocols, one performed with C57BL/6 male mice, from which resulted two studies to investigate the effects of regular voluntary running on tumor growth, on its vascularization and lymphocytic infiltration, while the other involved CR (CD1) male mice, to describe the impact of cancer development on different types of skeletal muscle. The first systematic review with meta-analysis showed that the reduction of tumor vascularization induced by anti-angiogenic therapy contributed to the inhibition of its growth. The results from the empirical studies demonstrated that physical exercise improved the tumor vascularization and regular voluntary running attenuated tumor growth, through a decreased proliferation, an increased apoptosis and improved vascularization, a higher quantity of CD8+ T cells and more NKG2D receptors in tumor. We also found that the muscle wasting induced by cancer development occurred predominantly in glycolytic muscle, which are mostly composed by type II fibers, sparing the oxidative muscles, constituted manly of type I fibers and with an increased contractile activity. These results allow us to conclude that in mice, regular wheel running attenuates tumor growth, improves tumor vascularization and the immune cells' access to the tumor, and the glycolytic muscles are more affected by cancer development

A Função de Julgar do Novo Código de Processo Civil: As Interações Entre o Formalismo Jurídico e o Formalismo Democrático

The assignment of judging in the new Code of Civil Procedure starts with the interactions between classical formalism and democratic formalism. The theories of constitutional hermeneutics, of civil adjectival law and of traditional Positivism are used in order to reaffirm the requirement of motivating the judgment in the higher degree of quality. It is necessary to understand the changes of the standards on the legal interpretation and the act of judging. The concept of jurisdiction in the Constitutional State connects to the constitutional principles of justice and fundamental rights, and approach the formal aspects of materials.A função de julgar no novo Código de Processo Civil acontece a partir de interações entre o formalismo clássico e o formalismo democrático. As teorias da hermenêutica constitucional, da lei adjetiva civil e do positivismo tradicional são utilizadas com o objetivo de reafirmar a necessidade de fundamentação da decisão judicial no grau maior de qualidade. É necessário perceber as mudanças de padrões sobre a interpretação jurídica e o ato de julgar. A concepção de jurisdição no Estado Constitucional conecta-se aos princípios constitucionais de justiça e aos direitos fundamentais, além de aproximar os aspectos formais aos materiais

Atendimento odontológico de pacientes HIV positivos e os aspectos éticos do sigilo profissional: Dental care of HIV-positive patients and the ethical aspects of professional secrecy

Desde o surgimento da AIDS, causada pelo vírus HIV – Síndrome da Imunodeficiência Adquirida –, muitos obstáculos foram superados. Apesar de não haver cura, o tratamento com medicamentos antirretrovirais possibilita maior qualidade de vida aos portadores do vírus. Contudo, barreiras éticas e preconceitos dos cirurgiões-dentistas precisam ser diluídos no atendimento odontológico, garantindo que os pacientes infectados tenham acesso ao tratamento (DISCACIATTI; VILAÇA, 2001). Isso porque outras infecções podem ocorrer mais comumente no atendimento bucal, como a herpes e as hepatites viróticas (ARO, 2011). A negativa de tratamento para um paciente HIV soropositivo é uma projeção moral, associada à falta de capacitação ética profissional, potencializando a segregação desse grupo de pacientes. Nesse escopo, o presente artigo demonstra a possibilidade de atendimento eficaz do paciente HIV soropositivo e descreve a importância dos preceitos éticos na garantia da sua dignidade, mediante análise de revisão de artigos científicos, leis brasileiras e banco de dados do Ministério de Saúde. O atendimento odontológico para pessoas portadoras de HIV é possível, observando os cuidados de biossegurança e sigilo profissional. No âmbito jurídico, a pesquisa demonstra a correlação da notificação compulsória compartilhada entre as esferas de gestão do SUS (PORTARIA Nº 264, 2020) e a quebra do sigilo profissional, do qual o cirurgião-dentista deve priorizar a inviolabilidade da intimidade do paciente, sob pena de infração ética e danos civis ao paciente. Por fim, a pesquisa obteve êxito ao romper com o medo dos cirurgiões-dentistas no atendimento de pacientes soropositivos, bem como evidenciou o preconceito enfrentado por esses pacientes. A garantia de um atendimento humanizado, fundado no respeito e nas necessidades do paciente, quando bem observados pelos profissionais, torna-se um elemento que valora todos os envolvidos na gestão e atenção de saúde coletiva. Por outro lado, quando há omissão ou recusa do tratamento, sem justa causa, a responsabilidade civil afeta não somente a moral do paciente, como também questiona a própria existência da pessoa portadora do vírus do HIV