VITRIFICAÇÃO DE OVÓCITOS BOVINOS COM A UTILIZAÇÃO DE MICROPIPETAS DE VIDRO OU PALHETAS ESTIRADAS

To evaluate the effect of different embryo containers in vitrification procedure, oocytes obtained from 2 to 8mm size follicles were randomly allocated in three groups and submitted to maturation in TCM 199 Earle salts medium with 10% of estrus mare serum (SEE), at 39C, with 5% CO2 atmosphere and 95% of relative humidity. After 22 hours of culture, two groups were submitted to a partial remove of cumulus cells by successive pipeting in a maintenance medium (TCM-Hepes + 10% fetal calf serum) and then exposed to an equilibrium solution with 50l of EG and 50l of DMSO in 400l of maintenance medium, for 30 seconds. After that, they were transferred to a vitrification solution composed by 300l of 0.8M sucrose solution in TCM-Hepes with 20% of fetal calf serum, added with 100l of EG and 100l of DMSO, and loaded in groups of five, in glass micropipetes (MV-T1) or pulled straws (OPS-T2) and vitrified. The warming was performed by direct immersion of MV or OPS in a 0.3M Sucrose solution in maintenance medium, at 37 - 38ºC, during five minutes. The oocytes were then transferred to a 0.15M sucrose solution (five minutes) and then to a maintenance medium. Then, the oocytes of both groups returned to the maturation medium for an additional two hours culture period. All groups were then submitted to the same fertilization and culture procedures. Fertilization was performed with 1 x 106 spermatozoa/ml, selected by swim- up procedure, and the incubation of oocytes / spermatozoa was performed in 400l of TALP-FERT medium with 30g/ml of heparin, during 18–22 hours. The culture was performed in SOFaaci. The cleavage rate of 55.5%, 54.6% and 78.6% was observed in the treatments MV, OPS and Control, respectively. The blastocyst rate was 10.0 and 7.9% for the MV and OPS treatments, respectively. There was not significant differences between treatments (p>0.05) and both were inferior (p<0.05) to the Control, 42.8%. These results demonstrated that the glass micropipetes could be used in the bovine oocyte vitrification, providing similar results than those obtained with the OPS.  Com o objetivo de avaliar diferentes formas de envase no processo de vitrificação, complexos cumulus oophorus (CCOs) obtidos de folículos entre 2 e 8mm foram divididos aleatoriamente em três grupos e submetidos a maturação em TCM 199 sais de Earle com 10% de soro de égua em estro (SEE), em estufa a 39oC, com atmosfera de 5% de CO2 e 95% de umidade relativa. Com 22 horas de cultivo os grupos a serem vitrificados foram submetidos a pipetagens sucessivas para o desnudamento parcial, em uma placa contendo meio de manutenção (TCM-Hepes com 10% de soro fetal bovino - SFB), sendo então expostos a uma solução de equilíbrio composta por 400l de meio de manutenção, adicionado de 50l de EG e 50l de DMSO, por 30 segundos. Em seguida foram transferidos para a solução de vitrificação composta por 300l de uma solução de sacarose 0,8M em TCM-Hepes com 20% SFB, acrescido de 100l de EG e 100l de DMSO, envasados em grupos de cinco, em micropipetas de vidro (MV T1) ou palhetas estiradas (OPS T2) e vitrificados. O reaquecimento foi realizado pela imersão direta das MV e OPS numa solução de Sacarose 0,3M em meio de manutenção, a 37 – 38ºC, onde os CCOs permaneceram por cinco minutos, quando foram transferidos para uma solução com 0,15M de sacarose por mais cinco minutos, antes de retornarem para o meio de manutenção. A seguir os ovócitos dos dois grupos retornaram ao meio de maturação por mais duas horas. A partir de então, todos os grupos foram submetidos aos mesmos procedimentos de fecundação e cultivo. Para a fecundação utilizou-se sêmen selecionado pelo processo de migração ascendente (swim-up), em meio TALP-SPERM, utilizando-se uma concentração final de 1 x 106 espermatozóides/ml. A incubação dos ovócitos com espermatozóides foi realizada por 18 – 22 horas, em 400l do meio TALP-FERT, adicionado de 30g/ml de heparina. O cultivo foi realizado em SOFaaci, sendo avaliadas as taxas de clivagem e blastocistos. Observou-se uma taxa de clivagem de 55,5, 54,6 e 78,6% para os tratamentos MV, OPS e Controle, respectivamente. A taxa de blastocistos foi 10,0 e 7,9% para os tratamentos MV e OPS, respectivamente, que não diferiram entre si (p>0,05) e foram inferiores (p<0,05) aos 42,8% do tratamento controle. Os resultados deste estudo demonstram que as micropipetas de vidro estiradas podem ser utilizadas na vitrificação de ovócitos bovinos, proporcionando resultados semelhantes aqueles obtidos com as palhetas estiradas. &nbsp

Performance reprodutiva de novilhas de corte suubmetidas a protocolo de inseminação artificial em tempo fixo aos 15 meses versus novilhas aos 27 meses de idade

O presente estudo objetivou comparar a eficiência reprodutiva de novilhas com idade 27 meses utilizando protocolos de inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Foram pesquisadas noventa e duas novilhas de corte cruzadas (Red Angus x Nelore) distribuídas em duas categorias por faixa de idade: animais com 15 meses (N15; n=50) e 27 meses (N27; n=52). Ambos os grupos foram mantidos sob o mesmo manejo nutricional e submetidos a idêntico protocolo: dia zero (d0) US + P4+BE; D7: PGF2α; d9: -P4+eCG+ECP; d11: IATF; d39: DG; d135: DG Final). Entre N15 e N27 não houve diferença relativa a taxa de prenhez (TP) à IATF (50,0% e 63,4) ou à TP final (67,5 vs. 76,5%) respectivamente. Os efeitos de peso e atividade ovariana entre os grupos, apresentaram diferença (P<0,05). Em N15 constatou-se forte correlação entre o peso e o ECC, peso e ciclicidade ovariana e peso e TP à IATF e ao final da estação de monta, ao passo que houve moderada correlação entre o ECC e a TP e a IATF e TP final. Em N27 houve apenas moderada correlação entre o peso e ECC e fraca nas demais variáveis. Concluiu-se que a inclusão de novilhas cruzadas em torno de 15 meses nos protocolos de IATF é possível, com promissoras taxas de prenhez à IATF e ao final da estação de monta; sugere-se medidas de ressincronização nesta categoria animal seguido de IATF, visando aumentar a TP final, e aumentar o valor agregado à produção dos bezerros

Aspiração folicular em vacas Bos taurus e Bos indicus e vitrificação dos oócitos em condições de campo

The aim of this study was to evaluate the viability of cryopreservation of bovine oocytes from Bos taurus and Bos indicus cows, at field conditions. The average rate of oocyte recovered by Ovum Pick up (OPU) from Bos taurus taurus cows (Devon) or Bos taurus indicus cows (Nelore), and the embryo development after vitrification were determined. After 60 sessions, an average rate of 4.6 oocytes/session was obtained from Devon cows. This number was significantly lower than the 16.3 oocytes obtained from Nelore cows, in 12 sessions. Selected recovered oocytes were vitrified in 20% EG + 20% DMSO + 0.5 M sucrose, in TCM 199 medium, with open pulled straws (OPS) technology, and stored in a cryogenic container. Just after warmed, oocytes were submitted to standard in vitro maturation, fertilization and culture in the laboratory. There were no differences in cleavage rates obtained from Devon cows oocytes (17.6%) and Nelore cows oocytes (29.1%). Evaluation of embryo development resulted in only one blastocyst obtained from Devon cows. Data from this study showed that Bos taurus indicus cows had higher oocytes recovery rates when compared with Bos taurus taurus, and that association of OPU with oocytes vitrification at farm conditions resulted in unsatisfactory indexes of embryo development, regardless of cow breed.Com o objetivo de avaliar a viabilidade da criopreservação de oócitos de fêmeas taurinas e zebuínas em condição de campo, este estudo determinou a taxa média de oócitos obtidos por punção folicular in vivo (OPU) de fêmeas bovinas Bos taurus taurus (Devon) e Bos taurus indicus (Nelore), bem como o desenvolvimento embrionário após a vitrificação destes oócitos. Em 60 sessões, obteve-se média de 4,6 oócitos por sessão de OPU nas vacas Devon, número significativamente inferior aos 16,3 oócitos obtidos nas vacas Nelore, em 12 sessões. Os oócitos selecionados foram vitrificados em solução de 20% de EG + 20% de DMSO + 0,5 M de sacarose, em meio TCM 199, utilizando-se palhetas estiradas (OPS). O reaquecimento foi efetuado em laboratório, seguindo-se a maturação, fecundação e cultivo in vitro. As taxas de clivagem obtidas foram 17,6% no grupo de vacas Devon e 29,1% no grupo Nelore, não havendo diferença significativa entre as mesmas. Na avaliação do desenvolvimento embrionário, obteve-se apenas um blastocisto no grupo Devon. Concluiu-se que fêmeas zebuínas (Nelore) proporcionam maior taxa de oócitos recuperados por sessão em relação às fêmeas taurinas (Devon), e que a associação da OPU com a vitrificação dos oócitos na própria fazenda não proporciona taxas aceitáveis de desenvolvimento embrionário, independente da origem dos animais

ATLANTIC-PRIMATES: a dataset of communities and occurrences of primates in the Atlantic Forests of South America

Primates play an important role in ecosystem functioning and offer critical insights into human evolution, biology, behavior, and emerging infectious diseases. There are 26 primate species in the Atlantic Forests of South America, 19 of them endemic. We compiled a dataset of 5,472 georeferenced locations of 26 native and 1 introduced primate species, as hybrids in the genera Callithrix and Alouatta. The dataset includes 700 primate communities, 8,121 single species occurrences and 714 estimates of primate population sizes, covering most natural forest types of the tropical and subtropical Atlantic Forest of Brazil, Paraguay and Argentina and some other biomes. On average, primate communities of the Atlantic Forest harbor 2 ± 1 species (range = 1–6). However, about 40% of primate communities contain only one species. Alouatta guariba (N = 2,188 records) and Sapajus nigritus (N = 1,127) were the species with the most records. Callicebus barbarabrownae (N = 35), Leontopithecus caissara (N = 38), and Sapajus libidinosus (N = 41) were the species with the least records. Recorded primate densities varied from 0.004 individuals/km 2 (Alouatta guariba at Fragmento do Bugre, Paraná, Brazil) to 400 individuals/km 2 (Alouatta caraya in Santiago, Rio Grande do Sul, Brazil). Our dataset reflects disparity between the numerous primate census conducted in the Atlantic Forest, in contrast to the scarcity of estimates of population sizes and densities. With these data, researchers can develop different macroecological and regional level studies, focusing on communities, populations, species co-occurrence and distribution patterns. Moreover, the data can also be used to assess the consequences of fragmentation, defaunation, and disease outbreaks on different ecological processes, such as trophic cascades, species invasion or extinction, and community dynamics. There are no copyright restrictions. Please cite this Data Paper when the data are used in publications. We also request that researchers and teachers inform us of how they are using the data. © 2018 by the The Authors. Ecology © 2018 The Ecological Society of Americ

Alternatives to maximize bovine reproductive capacity

The aims of this work were to perform a breeding soundness evaluation in Devon bulls in the State of Santa Catarina, in Southern Brazil, and to propose alternatives to maximize beef cattle production capacity. The contents of this dissertation were divided in four chapters. Chapter one is a review on the breeding soundness evaluation of bulls, which includes clinical exam, semen collection and evaluation, and serving capacity. In Chapter two, the evaluation of the breeding soundness of 207 Devon bulls was used to determine approval rate, based on clinical and seminal evaluation and serving capacity, and potential causes for failure. The bulls approval mean rate was 71.6%. The mean scrotal circumference (CE), according to distinct age periods, was 35.2 ± 2.93 cm for bulls between 18 to 22 months of age; 37.3 ± 2.75 cm for 23 to 27 months, and 38.2 ± 3.6 cm for 30 months or above. In Chapter 3, the internal artificial vagina (IAV) methodology, designed by Dr. Albert Barth, was tested in Devon bulls, simultaneously evaluating their serving capacity and fertility. Out of 52 bulls tested, 60.0% were satisfactory. A semen sample was obtained with the aid of the IAV in 45 bulls (86.5%), from which, 69.0% were approved in the breeding soundness evaluation, and 31.0% were reproved. When the total umber of bulls (n=52) was considered, 60.0% were approved after semen collection and serving capacity using the IAV. The IAV was an effective alternative for semen collection, allowing the simultaneous evaluation of semen quality and serving capacity. The IAV procedures were proven very effective and important, as 11.1% of failed bulls would have been inadequately approved if only clinical and seminal exams were performed. Chapter 4 reports a study to evaluate OPU recovery and efficiency of vitrification in immature OPU or slaughterhouse oocytes, from Devon viii and Nelore cows. Devon OPU mean collection rate was of 4.6 oocytes/female, hich was significantly lower (p0.05). Only one embryo developed to the blastocyst stage in the OPU/Devon group. Nelore cows had a higher OPU recovery per session in comparison to Devon. We concluded that immature oocyte vitrification obtained by OPU, under field conditions, did not allow acceptable in vitro embryo developmental rates. In conclusion, this study demonstrated the feasibility oftechnical alternatives to improve bovine reproductive capacity, but such alternatives should be tested beforehand and properly adapted previously to the use under field conditionsO objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade reprodutiva de touros da raça Devon, criados em Santa Catarina, bem como propor alternativas para maximizar a capacidade produtiva de bovinos de corte. Os conteúdos foram agrupados em quatro capítulos. No Capítulo 1, procedeu-se a revisão bibliográfica do exame andrológico do touro, incluindo o exame clínico, a coleta do ejaculado, a avaliação seminal e a avaliação da capacidade de serviço. No Capítulo 2, foram avaliados dados obtidos de exames andrológicos de 207 touros da raça Devon, sendo determinado o percentual de animais aptos à reprodução, com base no exame clinico, exame seminal e comportamento sexual, bem como as potenciais causas de reprovação. A média de touros aprovados foi de 71,6%. A média de circunferência escrotal (CE) nas diferentes faixas etárias foram 35,2 ± 2,93 cm para animais de 18 a 22 meses, 37,3 ± 2,75 cm para animais de 23 a 27 meses e 38,2 ± 3,6 cm para animais com mais de 30 meses. No Capítulo 3, foi avaliada a metodologia da vagina artificial interna (VAI) proposta pelo Dr. Albert Barth, como forma de coleta do ejaculado e simultânea avaliação do comportamento e a fertilidade de touros da raça Devon. Dos 52 animais examinados, 60,0% foram considerados aptos. A VAI possibilitou a coleta do ejaculado de 45 animais (86,5%). Dos touros coletados com a VAI (n=45) 69% foram considerados aptos à reprodução e 31% inaptos. Quando se considerou o total de touros examinados (n=52), 60,0% dos touros foram aprovados após coleta de sêmen e avaliação da capacidade de cópula com a VAI. Concluiu-se que a VAI foi efetiva na coleta dos ejaculados, permitindo a avaliação simultânea da capacidade de serviço. A técnica mostrou-se importante, já que vi 11,1% dos animais reprovados no teste seriam inadequadamente considerados aptos à reprodução, se apenas os exames clínico e de qualidade seminal fossem empregados. O Capítulo 4 reporta um estudo para avaliar a taxa de recuperação e a eficiência da vitrificação de oócitos imaturos obtidos por OPU, ou de ovários de abatedouro, de fêmeas bovinas das raças Devon e Nelore. O número médio de oócitos por sessão de OPU foi de 4,6 na raça Devon, sendo inferior (p0,05) entre os grupos. Na avaliação do desenvolvimento embrionário, apenas um embrião atingiu o estágio de blastocisto, no grupo OPU / Devon. As fêmeas da raça Nelore possibilitaram um número significativamente maior de oócitos recuperados por sessão quando comparadas com fêmeas da raça Devon. Concluise que a associação da técnica de OPU com vitrificação dos oócitos, em condições de campo, não produz taxas aceitáveis de desenvolvimento embrionário. O estudo demonstra que existem alternativas para melhorar a capacidade reprodutiva de bovinos que, todavia, devem ser previamente avaliadas e adequadas às condições existentesConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológic

Aumento na sobrevivência após vitrificação de oócitos bovinos imaturos em recipientes com maior condutividade e nitrogênio super-resfriado

A condutividade térmica do recipiente pode alterar a velocidade de resfriamento e reaquecimento, durante a criopreservação de oócitos, influenciando sua viabilidade. Recipientes de diferentes condutividades térmicas foram comparados na vitrificação de oócitos bovinos. Oócitos imaturos (n=1454) foram expostos a uma solução de 20% EG + 20% DMSO e 0,5 M Sacarose, envasados em PM (palheta metálica inoxidável, n=265), MV (micropipeta de vidro, n=279), PB (palheta cortada em bisel, n=280), OPS ( open pulled straw, n=272) e vitrificados em nitrogênio submetido ao vácuo. O reaquecimento foi realizado por 5 minutos de exposição a cada solução de sacarose (0,30 e 0,15 M), aquecidas a 35ºC. Como controle, 358 oócitos foram mantidos frescos, sem vitrificar. Os oócitos foram maturados e fecundados, sendo os prováveis zigotos cultivados em meio SOFaaci, a 39ºC, com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2, em umidade saturada. Não foram verificadas diferenças nas taxas de clivagem entre os tratamentos, que foram inferiores (p < 0,05) ao grupo controle. Nos grupos vitrificados, maior taxa de blastocisto foi obtida com o tratamento PM (10,2%), que foi superior (p < 0,05) aos tratamentos OPS (6,1%) e PB (6,1%), não diferindo do grupo MV (8%), embora com tendência de ser superior (p < 0,1). Os grupos tratados tiveram semelhantes taxas de eclosão que, todavia, foram inferiores ao controle. Conclui-se que o aumento da velocidade de resfriamento melhora a viabilidade após a vitrificação de oócitos bovinos imaturos, sendo que as palhetas metálicas, de maior condutividade, são mais efetivas do que as palhetas plásticas (OPS e PB), embora sem diferir da micropipeta de vidro (MV)

Aumento na sobrevivência após vitrificação de oócitos bovinos imaturos em recipientes com maior condutividade e nitrogênio super-resfriado

A condutividade térmica do recipiente pode alterar a velocidade de resfriamento e reaquecimento, durante a criopreservação de oócitos, influenciando sua viabilidade. Recipientes de diferentes condutividades térmicas foram comparados na vitrificação de oócitos bovinos. Oócitos imaturos (n=1454) foram expostos a uma solução de 20% EG + 20% DMSO e 0,5 M Sacarose, envasados em PM (palheta metálica inoxidável, n=265), MV (micropipeta de vidro, n=279), PB (palheta cortada em bisel, n=280), OPS ( open pulled straw, n=272) e vitrificados em nitrogênio submetido ao vácuo. O reaquecimento foi realizado por 5 minutos de exposição a cada solução de sacarose (0,30 e 0,15 M), aquecidas a 35ºC. Como controle, 358 oócitos foram mantidos frescos, sem vitrificar. Os oócitos foram maturados e fecundados, sendo os prováveis zigotos cultivados em meio SOFaaci, a 39ºC, com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2, em umidade saturada. Não foram verificadas diferenças nas taxas de clivagem entre os tratamentos, que foram inferiores (p < 0,05) ao grupo controle. Nos grupos vitrificados, maior taxa de blastocisto foi obtida com o tratamento PM (10,2%), que foi superior (p < 0,05) aos tratamentos OPS (6,1%) e PB (6,1%), não diferindo do grupo MV (8%), embora com tendência de ser superior (p < 0,1). Os grupos tratados tiveram semelhantes taxas de eclosão que, todavia, foram inferiores ao controle. Conclui-se que o aumento da velocidade de resfriamento melhora a viabilidade após a vitrificação de oócitos bovinos imaturos, sendo que as palhetas metálicas, de maior condutividade, são mais efetivas do que as palhetas plásticas (OPS e PB), embora sem diferir da micropipeta de vidro (MV)

Recoleta uterina como estratégia para aumentar a taxa de embriões em fêmeas bovinas de corte e leite

A taxa de recuperação embrionária em vacas superovuladas após coleta uterina não-cirúrgica é inferior ao número de ovulações, demonstrando uma relativa ineficiência neste processo de coleta convencional por via cervical. Uma alternativa simples e de fácil execução para melhorar a taxa de recuperação embrionária é a recoleta uterina. Para avaliar o efeito do procedimento de recoleta, bem como a influência da raça e do operador na taxa de recuperação embrionária, 38 fêmeas Nelore e 19 fêmeas Jersey foram estimuladas com FSH e coletadas por via cervical, por um de dois operadores treinados. Ao final da coleta, o cateter era fechado e mantido no corpo do útero, repleto com meio de coleta, enquanto a fêmea era liberada por 30 a 50 min, quando era submetida ao procedimento de recoleta, pelo mesmo operador. Em 57 procedimentos foram recuperadas 599 estruturas, das quais 423 (70,6%) foram obtidas na coleta e 176 (29,4%) na recoleta. Obteve-se uma recuperação média de 7,4 estruturas na coleta e 3,1 na recoleta, totalizando 10,5 estruturas por animal. Em 73,6% (42 de 57) dos procedimentos foram encontradas estruturas no processo de recoleta. Não houve influência da raça em relação ao número médio total de estruturas obtidas, com 10,9 na raça Jersey e 10,3 na Nelore. Da mesma forma, a taxa de recuperação embrionária após a coleta e recoleta não diferiu entre animais da raça Jersey (8,1 e 2,7) e Nelore (7,0 e 3,2) e entre os operadores A (7,5 e 3,3) e B (7,3 e 2,9), respectivamente. Conclui-se que o procedimento de recoleta aumenta a taxa de recuperação embrionária de fêmeas da raça Jersey e/ou Nelore, não sendo verificada influência do operador