Loss of claudin-3 impairs hepatic metabolism, biliary barrier function and cell proliferation in the murine liver.

BACKGROUND & AIMS Tight junctions in the liver are essential to maintain the blood-biliary-barrier, however the functional contribution of individual tight junction proteins to barrier- and metabolic homeostasis remains largely unexplored. Here, we describe the cell type specific expression of tight junction genes in the murine liver, and explore the regulation and functional importance of the transmembrane protein claudin-3 in liver metabolism, barrier function and cell proliferation. METHODS The cell type specific expression of hepatic tight junction genes is described using our mouse liver single cell sequencing dataset. Differential gene expression in Cldn3-/- and Cldn3+/+ livers was assessed in young and aged mice by RNA-seq and hepatic tissue was analysed for lipid content and bile acid composition. A surgical model of partial hepatectomy (PHx) was used to induce liver cell proliferation. RESULTS Claudin-3 is a highly expressed tight junction protein found in the liver and is expressed predominantly in hepatocytes and cholangiocytes. The histology of Cldn3-/- livers showed no overt phenotype, and the canalicular tight junctions appeared intact. Nevertheless, by RNAseq we detected a downregulation of metabolic pathways in the livers of Cldn3-/- young and aged mice as well as a decrease in lipid content and a weakened biliary-barrier for primary bile acids, such as TCA, TCDCA and TMCA. Coinciding with defects in the biliary barrier and lower lipid metabolism, there was a diminished hepatocyte proliferative response in Cldn3-/- mice following PHx. CONCLUSION Our data shows that in the liver, claudin-3 is necessary to maintain metabolic homeostasis, retention of bile acids, and optimal hepatocyte proliferation during liver regeneration

The evolution of the ventilatory ratio is a prognostic factor in mechanically ventilated COVID-19 ARDS patients

Background: Mortality due to COVID-19 is high, especially in patients requiring mechanical ventilation. The purpose of the study is to investigate associations between mortality and variables measured during the first three days of mechanical ventilation in patients with COVID-19 intubated at ICU admission. Methods: Multicenter, observational, cohort study includes consecutive patients with COVID-19 admitted to 44 Spanish ICUs between February 25 and July 31, 2020, who required intubation at ICU admission and mechanical ventilation for more than three days. We collected demographic and clinical data prior to admission; information about clinical evolution at days 1 and 3 of mechanical ventilation; and outcomes. Results: Of the 2,095 patients with COVID-19 admitted to the ICU, 1,118 (53.3%) were intubated at day 1 and remained under mechanical ventilation at day three. From days 1 to 3, PaO2/FiO2 increased from 115.6 [80.0-171.2] to 180.0 [135.4-227.9] mmHg and the ventilatory ratio from 1.73 [1.33-2.25] to 1.96 [1.61-2.40]. In-hospital mortality was 38.7%. A higher increase between ICU admission and day 3 in the ventilatory ratio (OR 1.04 [CI 1.01-1.07], p = 0.030) and creatinine levels (OR 1.05 [CI 1.01-1.09], p = 0.005) and a lower increase in platelet counts (OR 0.96 [CI 0.93-1.00], p = 0.037) were independently associated with a higher risk of death. No association between mortality and the PaO2/FiO2 variation was observed (OR 0.99 [CI 0.95 to 1.02], p = 0.47). Conclusions: Higher ventilatory ratio and its increase at day 3 is associated with mortality in patients with COVID-19 receiving mechanical ventilation at ICU admission. No association was found in the PaO2/FiO2 variation

Improving detection capabilities of doping agents by identification of new phase I and phase II metabolites by LC-MS/MS

Metabolic studies of doping agents have been traditionally performed by using gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). In the last years, liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS) has demonstrated to offer new possibilities to perform metabolic studies. The objective of this thesis was to study the metabolism (phase I and phase II) of different doping agents by LC-MS/MS in order to improve the detection capabilities of the studied substances. For mesocarb, a thermolabile compound, the parent drug 19 metabolites were detected in urine including mono-, di- and tri-hydroxylated metabolites excreted free or conjugated with glucuronic acid and sulphate. For toremifene, an anti-estrogenic drug with poor electron ionization properties, the parent drug and 20 metabolites were detected in urine. The structure of most of the metabolites was proposed. Anabolic androgenic steroids (AAS) metabolites conjugated with sulphate were investigated to improve the retrospectivity of the detection of these compounds. A study of hydrolysis and MS/MS behaviour of sulphate metabolites of AAS was performed, and sulphate conjugated metabolites of boldenone, methyltestosterone and metandienone were studied. Boldenone sulphate and epiboldenone sulphate were identified as boldenone metabolites in humans. They can be used as markers of exogenous boldenone administration. For methyltestosterone, three new sulphate metabolites were detected and structures were proposed. One of them, 17β-methyl-5α-androstan-3α,17α-diol 3α-sulphate was detected in urine up to 21 days after methyltestosterone administration, improving three times the retrospectivity of the detection with respect to other previously reported long-term metabolites. Several new sulphate metabolites were detected after metandienone administration. One of them was characterized as 18-nor-17β-hydroxymethyl-17α-methylandrost-1,4,13-triene-3-one conjugated with sulphate, and it was detected up to 26 days after administration, improving the retrospectivity of the detection with respect to other long-term metabolites described. The usefulness of LC-MS/MS for the detection and characterization of metabolites of doping agents has been demonstrated, especially for the study of new phase II metabolites and for metabolic studies of compounds where GC-MS shows relevant limitations.Els estudis metabòlics de substàncies dopants han estat tradicionalment realitzats mitjançant l’ús de cromatografia de gasos acoblada a espectrometria de masses (GC-MS). En els últims anys, s’ha demostrat la utilitat de la cromatografia líquida acoblada a espectrometria de masses (LC-MS) per realitzar estudis de metabolisme. L’objectiu d’aquesta tesi va ser estudiar el metabolisme (fase I i fase II) de diferents substàncies dopants mitjançant LC-MS/MS per tal de millorar la capacitat de detecció dels compostos estudiats. Per a mesocarb, compost termolàbil, es van detectar en orina el compost inalterat i 19 metabòlits incloent metabòlits mono-, di- i tri-hidroxilats excretats lliures o conjugats amb àcid glucurònic i sulfat. Per a toremifè, un fàrmac anti-estrogènic amb espectre de masses d’impacte electrònic amb pocs ions diganòstic, es van detectar el compost inalterat i 20 metabòlits en orina. Es va proposar l’estructura de la major part de metabòlits detectats. Per tal de millorar la retrospectivitat de la detecció dels esteroides anabolitzants androgènics (AAS) es van estudiar els metabòlits conjugats amb sulfat. Es va realitzar un estudi de la hidròlisi i del comportament espectromètric dels metabòlits conjugats amb sulfat dels AAS. Es van estudiar els metabòlits conjugats amb sulfat de boldenona, metiltestosterona i metandienona. Es van identificar boldenona sulfat i epiboldenona sulfat com a metabòlits de boldenona en humans. Aquests metabòlits poden ser usats com a marcadors de l’administració exògena de boldenona. Per a metiltestosterona, es van detectar i proposar les estructures de tres nous metabòlits conjugats amb sulfat. Un d’ells, el 17β-metil-5α-androstà-3α,17α-diol 3α-sulfat, va ser detectat en orina fins a 21 dies després de l’administració de metiltestosterona. Es van detectar diversos metabòlits de metandienona conjugats amb sulfat no descrits prèviament. Un d’ells, identificat com a 18-nor-17β-hidroximetil-17α-metilandrost-1,4,13-trien-3-ona conjugat amb sulfat, va ser detectat fins 26 dies després de l’administració. Tant per a metiltestosterone com per a metandienone, els metabòlits conjugats amb sulfat permeten millorar la retrospectivitat de la detecció respecte a altres marcadors descrits anteriorment. S’ha demostrat la utilitat del LC-MS/MS per a la detecció i caracterització de metabòlits de substàncies dopants, especialment per a l’estudi de nous metabòlits de fase II i per a estudis de metabolisme de compostos que mostren limitacions en GC-MS

El discurso oral formal : contenidos de aprendizaje y secuencias didácticas

Para que los chicos y chicas mejoren su competencia oral, no sólo es necesario crear situaciones comunicativas para hablar sino que se trata de enseñarles mediante secuencias didácticas específicas a reflexionar sobre cómo hablan y cómo escuchan. Se presenta una metodología de la enseñanza y aprendizaje del discurso oral, cuyas propuestas didácticas se basan en criterios para la selección de objetivos y contenidos, tipos de actividades orales, evaluación y gestión de la interacción en el aula. Se estructura en dos partes: en la primera se presentan contenidos de aprendizaje característicos de los géneros orales prioritarios en la educación obligatoria- la argumentación oral, la modalización de los enunciados, la competencia prosódica, etc.- ; la segunda parte, ejemplifica con aplicaciones prácticas la intervención didáctica que desarrolla los contenidos seleccionados -entre otros: explicar contenidos, defender un punto de vista o leer en voz alta de forma comunicativa.CataluñaBiblioteca de Educación del Ministerio de Educación, Cultura y Deporte; Calle San Agustín 5 -3 Planta; 28014 Madrid; Tel. +34917748000; [email protected]

LC-MS/MS detection of unaltered glucuronoconjugated metabolites of metandienone

The aim of this study was to evaluate the direct detection of glucuronoconjugated metabolites of metandienone (MTD) and their detection times. Metabolites resistant to enzymatic hydrolysis were also evaluated. Based on the common mass spectrometric behaviour of steroid glucuronides, three liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) strategies were applied for the detection of unpredicted and predicted metabolites: precursor ion scan (PI), neutral loss scan (NL), and theoretical selected reaction monitoring (SRM) methods. Samples from four excretion studies of MTD were analyzed for both the detection of metabolites and the establishment of their detection times. Using PI and NL methods, seven metabolites were observed in post-administration samples. SRM methods allowed for the detection of 13 glucuronide metabolites. The detection times, measured by analysis with an SRM method, were between 1 and 22 days. The metabolite detected for the longest time was 18-nor-17β-hydroxymethyl-17α-methyl-5β-androsta-1,4,13-triene-3-one-17-glucuronide. One metabolite was resistant to hydrolysis with β-glucuronidase; however it was only detected in urine up to four days after administration. The three glucuronide metabolites with the highest retrospectivity were identified by chemical synthesis or mass spectrometric data, and although they were previously reported, this is the first time that analytical data of the intact phase II metabolites are presented for some of them. The LC-MS/MS strategies applied have demonstrated to be useful for detecting glucuronoconjugated metabolites of MTD, including glucuronides resistant to enzymatic hydrolysis which cannot be detected by conventional approaches. Copyright © 2016 John Wiley & Sons, Ltd.Grants by Ministerio de Economía y Competitividad (Gobierno de España) (Project number DEP2012-35612) and Generalitat deCatalunya (Consell Català de l’Esport and DIUE 2014 SGR 692) are gratefully acknowledge

Registro Nacional de la Nutrición Parenteral Domiciliaria (NPD) del año 2001

Objetivo: El objetivo de este estudio es analizar los da-tos registrados por el Grupo de Trabajo NADYA-SEN-PE de pacientes que han recibido Nutrición Parenteral Domiciliaria (NPD) en nuestro país durante el año 2001. Material y métodos: A partir de un cuestionario pre-viamente diseñado, los médicos del grupo NADYA intro-ducen en la página web (www.nadya-senpe.com), para su ulterior análisis, datos epidemiológicos, diagnóstico, vía de acceso, complicaciones, ingresos hospitalarios, du-ración del tratamiento, evolución y calidad de vida de los pacientes con NPD. Resultados: Los datos correspondían a 66 pacientes (edad media de 5,5 ± 4,9 años para pacientes < 14 años y 49,2 ± 15,8 años para =14 años) controlados por 17 cen-tros hospitalarios. Las patologías que con más frecuencia han comportado este tratamiento fueron: isquemia me-sentérica (28,9%), seguida de enfermedad neoplásica (22,7%), enteritis rádica (12,13%), alteraciones de la mo-tilidad (4,5%) y enfermedad de Crohn (4,5%), entre otras. Se observó un predominio de los catéteres tuneliza-dos (62,1%) sobre los implantados (33,3%) y de la admi-nistración cíclica (nocturna) de la nutrición parenteral (NP) (81,8%). Las farmacias hospitalarias suministraron las fórmulas de NPD con más frecuencia que el Nutriser-vice (75,7% versus 24,3%). La duración media del trata-miento fue de 8,43 ± 4,52 meses. Se presentaron 86 com-plicaciones relacionadas con el tratamiento nutritivo (1,3/paciente), con predominio de las infecciosas (0,67/pa-ciente) (sepsis: 0,46/paciente y contaminación de catéter: 0,19/paciente), seguidas de las mecánicas (0,15/paciente), de las metabólicas (0,1/paciente) y de las hidroelectrolíti-cas (0,07/paciente). Estas complicaciones comportaron 1,34 hospitalizaciones /paciente. Al finalizar el año, seguí-an en activo 74,2% de los pacientes; mientras que en el resto (25,8%) se había retirado este tratamiento. Las principales causas de retirada fueron por éxitus (52,9%) y por pasar a depender de dieta oral (25,3%). El 10,6% estaban confinados en silla o cama y el 10,6% no presen-taba ningún grado de incapacidad. Conclusiones: Aunque inferior a otros países europeos, se mantiene el número de pacientes con NPD registrados en nuestro país (1,65 pacientes/10 6 habitantes). Si bien pre-domina la patología vascular, sigue creciendo el peso de las neoplasias. Predominio de las complicaciones infecciosas que generan la mayoría de los ingresos hospitalarios

Nutrición Enteral Domiciliaria (NED): Registro Nacional 2001

Introducción y objetivos: Análisis del registro de los pacientes en programa de Nutrición Enteral Domicilia-ria (NED) en nuestro país durante el año 2001. Material y métodos: Estudio analítico realizado me-diante una base de datos incluida en la web del Grupo NADYA (www.nadya-senpe.com) con los pacientes en NED el año 2001. Han participado 22 hospitales. Se aportan datos epidemiológicos, diagnósticos, vía de acce-so, pautas de administración, fórmulas, duración, com-plicaciones, evolución y grado de incapacidad. Resultados: Incidencia: Se han comunicado 3.458 pa-cientes, 1.818 varones (53,7%) y 1.567 hembras (46,3%). Edad media 5,6 ± 4,0 años en los menores de 14 años, y 67,1 ± 19,5 en los mayores de 14 años. Patologías: Predo-minio de la patología neurológica (43,4%), seguida de la neoplásica (33,5%) sobre las demás. Duración: Tiempo medio en NED de 6,5 ± 4,5 meses. Vías de administra-ción: La vía oral es la más frecuente (54,5%), seguida de la sonda naso gástrica (SNG) (32,2%) y de las ostomías (13,3%). Formas de administración: Predominio de la forma discontinua (66,1%), mediante goteo (43,4%) o bolus (22,7%). Fórmula: La fórmula polimérica fue la más utilizada (85,9%). Seguimiento: Los pacientes fue-ron mayoritariamente controlados por la unidad de nu-trición de su hospital de referencia (69,3%). Hospitaliza-ciones: Se han registrado 7,3% hospitalizaciones asociadas a la nutrición [0,02 hospitalizaciones/pacien-te( c/p)]. Complicaciones: Las más frecuentes relaciona-das con la nutrición fueron las gastrointestinales (25,9%; 0,16 c/p) y las mecánicas (24,2%, 0,15 c/p). Las diarreas han sido las complicaciones gastrointestinales más frecuentes (11,5%, 0,07 c/p). Evolución: Al finalizar el año el 48,3% de los pacientes continuaban en activo, mientras que en un 33,3% se suspendió la NE y en 18,4% no hubo continuidad de seguimiento. La causa más común de suspensión fue el paso a nutrición oral convencional (47,3%), seguido de la muerte relacionada con la enfermedad de base (43,5%). Un 29,7% de los pa-cientes estaban confinados en cama o silla, mientras que un 22,9% no presentaba prácticamente ningún grado de incapacidad. Conclusiones: Persiste la vía de administración oral como la más prevalente frente a la sonda y ostomía. Pre-dominio de la patología neurológica. El bajo número de complicaciones e ingresos comportan que la NED sea un tratamiento seguro en nuestro medio