Modulation of microglia reactivity by S100B in Multiple Sclerosis

Tese de mestrado, Ciências Biofarmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2015Multiple sclerosis (MS) is a neurodegenerative disease with severe effects on motor and cognitive function. Despite the evolution of knowledge in recent decades, the causes and the exact mechanisms that originate the disease are still unknown. Recent studies demonstrated that S100B protein expression is increased in MS patients and that its high levels are correlated with glial reactivity, contributing to the characteristic excessive inflammatory response of this disease. We also showed that S100B blockade does not prevent demyelination-associated activation of microglia, but it decreases the expression of pro-inflammatory markers. Interestingly, microscopic imaging suggested that upon S100B neutralization microglia moved to myelin surroundings, where they can play an important role on the clearance of myelin debris and remyelination. Thus, we decided to explore whether S100B blockade might modulate the reactivity of microglia in an ex vivo demyelinating model. Therefore, we first evaluated whether S100B might affect demyelination. Our results corroborate a decreased expression of myelin-related protein upon demyelination, which is prevented after S100B neutralization. We also quantified the different populations of reactive microglia showing that there is an augment of M1 pro-inflammatory reactive microglial cells in consequence of demyelination, which is reduced with S100B blockade. Indeed, while upon demyelination, we verified an increase of gene expression of pro-inflammatory mediators, S100B antibody neutralization partially prevented this effect. In turn, we also observed an increase of anti-inflammatory markers usually associated to microglia M2 phenotype, but this time S100B blockade maintained their elevated gene expression. In addition, we verified that S100B neutralization although not increasing the average number of particles phagocytosed by each microglia upon demyelination, it increased the number of microglia with a phagocytic ability. Moreover, also the expression of a neuron-derived microglia calming factor, fractalkine, was enhanced by S100B neutralization suggesting the shift microglia to a damage repair phenotype. Overall, these results suggest that by neutralizing S100B during a demyelinating event we may prevent the loss of myelin as well as the exacerbation of the inflammatory response, indicating that S100B may be a potential therapeutic target to reduce damage in demyelinating disorders associated with microglial reactivity, such as MS.A Esclerose Múltipla (EM) é uma doença neurodegenerativa com efeitos graves a nível motor e cognitivo. Apesar da evolução do conhecimento nas últimas décadas, as causas e os mecanismos que desencadeiam a doença são ainda desconhecidos. Estudos recentes demonstraram que a expressão da proteína S100B está aumentada em doentes com EM e que estes níveis elevados estão correlacionados com a reatividade glial, contribuindo para uma resposta inflamatória excessiva, característica desta doença. Verificámos igualmente que o bloqueio de S100B não previne a ativação da microglia aquando de uma situação de desmielinização, mas diminui a expressão de marcadores pro-inflamatórios. Curiosamente, imagens de microscopia sugerem que após a neutralização de S100B a microglia movimenta-se para a zona da mielina, onde pode desempenhar um papel importante na remoção dos detritos de mielina e na remielinização. Assim, decidimos avaliar se o bloqueio de S100B pode modular a reatividade da microglia num modelo ex vivo de desmielinização. Assim, primeiro avaliámos se a proteína S100B pode afetar a desmielinização. Os nossos resultados revelam uma diminuição da expressão génica de uma proteína associada à mielina após desmielinização, a qual é prevenida após a neutralização de S100B. Quantificámos ainda as diferentes populações de microglia reativa, mostrando que há um aumento das células microgliais com um fenótipo M1 pró-inflamatório em consequência da desmielinização, a qual é reduzida com o bloqueio de S100B. De facto, a desmielinização leva a um aumento da expressão génica de mediadores pró-inflamatórios, enquanto a neutralização de S100B previne parcialmente este efeito. Por seu lado, observámos igualmente um aumento dos marcadores anti-inflamatórios associados a um fenótipo microglial M2, mas o bloqueio de S100B manteve a sua elevada expressão génica. Verificámos ainda que a neutralização de S100B apesar de não aumentar o número médio de partículas fagocitadas por cada microglia após desmielinização, elevou o número de células microgliais com capacidade fagocítica. Curiosamente, observámos igualmente que a expressão de um fator derivado dos neurónios que acalma a reatividade microglial, a fractalkina, estava aumentada após neutralização de S100B, sugerindo que a microglia possa ter adquirido um fenótipo mais adequado para a reparação do dano. De uma maneira geral, estes resultados sugerem que ao neutralizar o S100B podemos prevenir a desmielinização bem como uma resposta inflamatória exacerbada, indicando que a S100B pode ser um potencial alvo terapêutico para reduzir o dano em doenças desmielinizantes associadas à reatividade microglial, tais como a EM

Auto‐Conceito da Grávida – Factores Associados

A gravidez, sendo um momento privilegiado de transformações pessoais e sociais, muda inevitavelmente a vida de uma mulher, ao ponto de questionar a sua própria identidade e conceito pessoal, em todo o processo de adaptção a uma nova condição e papel. A forma como a grávida vivencia todas as mudanças e os acontecimentos significativos exige, em termos desenvolvimentais, um duplo esforço físico e psicológico, nem sempre fáceis de gerir, no sentido de prevenir desequilíbrios e perturbações emocionais. Realizou-se um estudo quantitativo, transversal, decritivo-correlacional e analítico, com o objectivo de analisar o auto-conceito da grávida, bem como a influência de variáveis socio-demográficas e obstétricas. Utilizou-se para o efeito um questionário destinado à caracterização da amostra e o Inventário Clínico de Auto-Conceito de Vaz Serra (1986), tendo sido inquiridas 219 grávidas. Do estudo conclui-se que o exercício da actividade profissional influencia a auto-eficácia da grávida, mas não as outras dimensões do auto-conceito; o estado civil influencia o auto-conceito da grávida, excepto a dimensão maturidade pscológica; a paridade influencia a dimensão impulsivide/actividade; a patologia obstétrica, a idade da grávida, o tempo de gestação e a aceitação por parte da mulher não influenciam o seu auto-conceito

Experimental morphological and functional study of gentamicin cochleotoxicity using the regular dose given to neonates

TEMA: a gentamicina é um antibiótico que atua nas infecções causadas por bacilos Gram-negativos. Seu efeito colateral mais importante é a ototoxicidade. As ototoxicoses são afecções iatrogênicas provocadas por fármacos que alteram a orelha interna, podendo afetar o sistema coclear e/ou vestibular, alterando duas funções importantes: a audição e o equilíbrio. Os principais grupos pediátricos que recebem antibióticos aminoglicosídeos são recém-nascidos com infecções graves na UTI neonatal. OBJETIVOS: verificar a ocorrência de lesão às células ciliadas externas (CCE) pela gentamicina com os esquemas de dose única de 4mg/Kg/dia e de 2,5mg/Kg/dia a cada 12 horas, por meio de um estudo anatômico por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e estudo funcional através das emissões otoacústicas por produto de distorção (OEAPD). Forma de estudo experimental. MÉTODO: foram avaliadas 26 cobaias albinas através das EOAPD pré e pós-tratamento com gentamicina. Para a avaliação anatômica por MEV, as cobaias foram sacrificadas em tempo programado após a administração das drogas via intramuscular. RESULTADOS: a avaliação do estado funcional das CCE mostrou preservação das OEAPD em todas as cobaias. Os resultados da MEV, depois de fotografados foram analisados através da contagem do número de CCE da espira basal da cóclea em determinado campo fotográfico. CONCLUSÃO: não foram observadas lesões ou alterações no funcionamento das células ciliadas externas mediante a dosagem aplicada em cobaias albinas, de 4mg/Kg/dia (dose única) e 2,5mg/Kg/dia a cada 12 horas, utilizadas por 10 e 14 dias.BACKGROUND: gentamicin is an antibiotic that acts in Gram-negative bacilli infections, having as a side effect ototoxicity. Ototoxicity is an iatrogenic disturb provoked by drugs that modify the internal ear, affecting the cochlear and/or vestibular system and causing alterations in two important functions: equilibrium and audition. The main pediatric groups that receive aminoglicosides antibiotics are newborns who present serious infections in Neonate intensive care units. AIM: to verify the occurrence of external cilliary cells (ECC) caused by gentamicin with single dose schemas of 4mg/kg/day and 2,5mg/kg/day every 12 hours, through a morphological - scanning electronic microscopy (SEM) and functional - distortion product otoacoustic emissions (DPOAE) experimental study. METHOD: 26 albino guinea pigs were evaluated through DPOAE pre and post gentamicin treatment. The guinea pigs were sacrificed in the programmed time after the intramuscular administration of the drugs for anatomic analysis using MEV. RESULTS: the evaluation of the functional state of the ECC indicated preservation of the DPOAE in all of the guinea pigs. The SEM results, after being photographed were analyzed in terms of the number of the ECC in the cochlear basal turn in a specific photographic field. CONCLUSION: lesions or alterations in the functioning of the ECC of albino guinea-pigs after the use of 4mg/Kg/day and 2,5mg/Kg/day every 12 hours for a period 10 and 14 days were not observed

An historical survey of the botanical research done at the Lousã mountain system (Portugal)

This work is intended to be the first contribution to a checklist of the vascular plant flora of the Lousã mountain system. Only bibliographic records are included, specially the ones extracted from studies dating from the 19th century, for a future comparison with the present diversity. A total of 225 taxa where recorded, of which at least 86 % can still actually be found in the study area, according with our field observations. However, at least four are most probably extinct, because no population are actually known.Con este trabajo se publica una primera contribución para el catálogo florístico de la Sierra de Lousã. Se incluyen sólo citas bibliográficas,especialmente las extraídas de estudios de antiguos botánicos, para una comparación futura con la biodiversidad actual. Se encontraron 225 citas correspondientes a taxones de la flora vascular de las cuales por lo menos un 86 % están confirmadas en base a nuestras primeras observaciones de campo. Por lo menos cuatro de los taxones citados están, muy probablemente, extinguidos porque no se conocen poblaciones actuales

Performance and ruminal development of dairy calves fed starter concentrate with different physical forms

Objetivou-se com este trabalho avaliar o efeito da forma física do concentrado no desempenho e no desenvolvimento ruminal de bezerros leiteiros. Foram utilizados 22 bezerros Holandeses com peso corporal inicial médio de 43,2 kg, alojados individualmente e alimentados com dieta líquida (4 L/d) e concentrado inicial de duas formas físicas (peletizada ou farelada). O consumo de concentrado inicial foi monitorado diariamente e os animais pesados semanalmente, sempre após o fornecimento da dieta líquida, pela manhã. Após dez semanas, quatro bezerros de cada tratamento foram abatidos para coleta de amostras de fluido ruminal para determinação do pH e das concentrações de ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) e de N-NH3 ruminal. Também foram realizadas medidas morfométricas do trato digestório superior. Não houve efeito da forma física no consumo de concentrado inicial, no peso corporal ou no ganho de peso diário dos animais. A forma física do concentrado inicial também não afetou o pH, as concentrações de AGCC ou de N-NH3 ruminal, assim como as medidas morfométricas do trato digestório superior, à exceção da capacidade do rúmen e do peso do abomaso, que foram maiores nos animais alimentados com concentrado peletizado. O fornecimento de concentrado farelado pode ser uma alternativa para a redução de custo de produção, uma vez que a forma física do concentrado não afeta o desempenho ou o desenvolvimento do trato digestório superior de bezerros leiteiros.The physical form of concentrate on the performance and rumen development on dairy calves was evaluated in this experiment. Twenty-two Holstein male calves, with 42.3 kg initial body weight, were individually housed, fed 4 L/d of liquid diet and starter concentrate in two physical forms (pelleted or coarsely ground). Starter concentrate intake was monitored daily and calves were weighted weekly, always after the morning liquid diet feeding. After 10 weeks, four calves from each treatment were slaughtered and rumen samples were taken for pH, rumen short chain fatty acids (SCFA) and N-NH3 concentration. Morphometric measurement of the forestomach was also evaluated. There was no effect of the physical form on starter concentrate intake, body weight, and daily gain. The physical form of the concentrate also had no effects on pH, SCFA or N-NH3 rumen concentration, nor on the morphometric measurements of the forestomach, except for rumen capacity and abomasum weight, which were higher for animals fed pelleted starter concentrate. Coarsely ground starter concentrate may be an alternative to reduced production costs since the physical form of the concentrate had no effect on performance or in the development of forestomach of dairy calves

Dispositivos móveis e raciocínio lógico: uma prática com o aplicativo QR Code

Este artigo tem como objetivo refletir e discutir sobre o processo de ensino e aprendizagem, de um grupo de alunos do terceiro ano do curso normal, quando foi proposta e realizada uma atividade na sala de aula com dispositivos móveis. A proposta surgiu como uma pesquisa realizada no Programa de pós-graduação em ensino de Ciências e matemática da Universidade Federal de Pelotas. A ideia foi mostrar uma possibilidade para o uso de dispositivos móveis, utilizando o aplicativo QR Code - Quick responsive code (código de resposta rápida), como recurso pedagógico para potencializar o raciocínio lógico. Os desafios lógicos foram propostos por Malba Tahan (1895 – 1974) que é o pseudônimo criado pelo professor Júlio César de Mello e Souza. A atividade proposta visa investigar em sala de aula os pressupostos teóricos da aprendizagem histórico-cultural, sobre as interações entre os alunos e o objeto do conhecimento

The use of the international classification of functioning, disability and health in an interactive perspective: the assessment and intervention of students’ additional support needs in Portugal

Evaluating the influence of person-environment interactions on students' performance is a fundamental requirement for planning individualized educational interventions. Such understanding grounded the use of the International Classification of Functioning, Disability and Health as a reference framework to support special needs assessment in the Portuguese educational system. This study sought to investigate the extent to which special education teams reported relationships between Body Functions, Activities and Participation, and Environmental Factors in Individualized Education Programmes for students with additional support needs and what types of relations were mostly described.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Effect of inclusion of sodium butyrate, calcium propionate or sodium monensin in the starter feed on ruminal parameters and forestomach development in dairy calves

O objetivo neste trabalho foi avaliar o efeito da inclusão de butirato de sódio, monensina sódica ou propionato de cálcio no concentrado inicial sobre parâmetros ruminais e de desenvolvimento do trato digestório superior de bezerros leiteiros. Quinze bezerros holandeses recém-nascidos foram fistulados no rúmen e alojados em baias individuais até a décima semana de vida, com livre acesso a água, alimentados com leite (4 L/dia), em duas refeições, e concentrado à vontade contendo butirato de sódio (0,15%), monensina sódica (30 ppm) ou propionato de cálcio (0,15%). A partir da quarta semana de vida dos animais, antes e 2 horas após a alimentação da manhã, foram realizadas colheitas semanais de fluido ruminal para determinação do pH, da concentração de ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) e N-amoniacal. Ao completar 10 semanas, os animais foram abatidos para avaliação do crescimento do trato digestório superior. O pH ruminal apresentou diferenças, tanto entre horários quanto entre os aditivos utilizados no concentrado inicial. As concentrações de AGCC totais, bem como de cada ácido graxo, não foram afetadas pelos aditivos. Entretanto, o horário de colheita teve efeito sobre todos os parâmetros, exceto a concentração molar de ácido acético. O peso total do trato digestório superior, assim como o peso médio de cada compartimento e a capacidade máxima do retículo-rúmen, não foram afetados pelos aditivos fornecidos no concentrado. Também não foram observados efeitos dos aditivos sobre a altura, a largura e o número de papilas do epitélio ruminal. A inclusão desses aditivos no concentrado inicial não afeta os parâmetros ruminais ou de desenvolvimento do trato digestório de bezerros em aleitamento.The objective of this study was the evaluation of the inclusion of calcium propionate, sodium butyrate and sodium monensin in the starter concentrate on ruminal parameters and forestomach development in dairy calves. Fifteen newborn Holstein calves were rumen cannulated and housed in individual stalls until ten weeks old, with free access to water, fed 4 liters of milk per day, split in two meals, and starter concentrate ad libitum containing sodium butyrate (0.15%), sodium monensin (30 ppm) or calcium propionate (0.15%). Starting at the fourth week of life, before and 2 hours after the morning feeding, ruminal fluid samples were taken weekly to determine the pH, short-chain fatty acids and ammonia-N. After 10 weeks, the animals were slaughtered to assess the forestomach growth. The rumen pH was affected by sampling time and the additives used in the starter concentrate. The total short-chain fatty acids concentration and each fatty acid concentration, were was not affected by the additives. However, except for molar concentration of acetic acid, all rumen fermentation parameters were affected by sampling time. The total forestomach weight and the average weight of each compartment and the maximum reticulum-rumen capacity were not affected by additives supplied in the starter concentrate. No significant effects of the additives were observed on the height, width and number of papillae of the ruminal epithelium. The inclusion of these additives in starter concentrate had no effect on most of the ruminal parameters and forestomach development in suckling calves.FAPES

Medullary thyroid carcinoma beyond surgery : advances, challenges, and perspectives

Medullary thyroid carcinoma (MTC) is a rare type of tumor that originates from thyroid C cells and accounts for 2–4% of all malignant thyroid neoplasms. MTC may occur sporadically or be inherited, as part of the MEN 2 syndrome. Germline mutations of the RET (REarranged during Transfection) proto-oncogene cause hereditary cancer, whereas somatic RET mutations and, less frequently, RAS mutations have been described in sporadic MTC samples. Since early surgery with complete resection of tumor mostly determines the likelihood of attaining cure for MTC, the broader use of RET genetic screening has dramatically changed the prognostic of gene carriers in hereditary MTC. Nevertheless, despite recent advances, the management of advanced, progressive MTC remains challenging. The multikinase inhibitors (MKI), vandetanib and cabozantinib, were approved for the treatment of progressive or symptomatic MTC, and several other compounds have exhibited variable efficacy. Although these drugs have been shown to improve progression-free survival, no MKI has been shown to increase the overall survival. As these drugs are nonselective, significant off-target toxicities may occur, limiting achievement of the required TK-specific inhibition. Recently, next-generation small-molecule TKI has been developed. These TKI are specifically designed for highly potent and selective targeting of oncogenic RET alterations, making them promising drugs for the treatment of advanced MTC. Here, we summarize the current understanding of the intracellular signaling pathways involved in MTC pathogenesis as well as the therapeutic approaches and challenges for the management of advanced MTC, focusing on targeted molecular therapies