Mecanismos de percepción y de respuesta a bajas temperaturas en Saccharomyces cerevisiae

A lo largo de los años, la levadura S. cerevisiae se ha convertido en organismo modelo tanto en la industria, como en el campo de la investigación básica, debido a sus características metabólicas y su fácil manipulación. Es conocido que, cuando la célula se enfrenta a una situación de estrés, debe modificar su fisiología para mantener la homeostasis celular. En el ámbito industrial, el aumento en la demanda de levaduras con características especiales, ha hecho patente la necesidad de nuevas cepas que se adecuen a los requerimientos y necesidades del consumidor. En esta línea, las estrategias de mejora y selección de cepas industriales se ven limitadas por el escaso conocimiento que disponemos de la respuesta de la levadura a condiciones de estrés, en particular, estrés por frío y congelación, por lo que, un mejor entendimiento de la fisiología y de los determinantes genéticos y moleculares responsables de esta respuesta, es crucial para establecer estrategias potencialmente útiles. A diferencia de otros estreses el significado fisiológico y los mecanismos moleculares involucrados en la respuesta de la levadura frente al descenso de la temperatura son desconocidos. En el presente trabajo, mostramos que la ruta de integridad de la pared celular desempeña un papel importante en el crecimiento de S. cerevisiae a baja temperatura. Células carentes de Wsc1p, sensor de membrana, de Bck1p, Mkk1p/Mkk2p o Slt2p, componentes del módulo de MAPs mostraron una sensibilidad en frío. Además fuimos capaces de detectar una activación de la MAPK dependiente de la presencia de Bck1p. Sin embargo, no hay evidencias de una perturbación de la pared celular o la activación de un programa transcripcional específico de las condiciones de estudio mediado por Slt2p. Los resultados de este estudio, sugieren que Slt2p es activada por diferentes señales que mimetizan un defecto en la disponibilidad de nutrientes, a través de TORC1-Sch9, lo que conduce al control de la actividad de PKA, regulando el crecimiento celular en frío. Además ciertos resultados implican a Swi4p en la respuesta al descenso de la temperatura de forma independiente de su fosforilación por el módulo de MAPKs. Adicionalmente, se llevó a cabo la identificación de dianas de la actividad de Slt2p a baja temperatura mediante el uso de una genoteca de S. cerevisiae. Esto permitió centrar nuestra atención en la proteína Emw1p, la cual ha sido descrita como esencial para el mantenimiento de la integridad de la pared celular. Los resultados de una caracterización preliminar de esta proteína indican que es modificada por fosforilación y que en el control de dicha modificación parecen estar implicadas tanto la quinasa Slt2p como la fosfatasa Ptc1p. Los datos obtenidos hasta el momento señalaban a alteraciones a nivel de la membrana plasmática como uno de los estímulos detectados por la célula ante un descenso de la temperatura. Entre los componentes de la membrana plasmática uno de los mejores caracterizados en cuanto a su capacidad señalizadora es el fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PtdIns(4,5)P2). La ausencia de uno de los reguladores de sus niveles, la fosfatasa Inp51p genera un fenotipo de tolerancia a baja temperatura que nos sirvió como punto de partida para el estudio de la señalización por parte de esta molécula frente al descenso de la temperatura. Durante este capítulo se muestra la regulación del metabolismo lipídico a través de la ruta de inositoles fosfato y la acumulación de difosfoinositoles fosfato en la célula, tanto cuando la célula es expuesta ante un descenso de la temperatura como en ausencia de la fosfatasa Inp51p, situaciones que se mostraron una regulación diferencial. Sin embargo, mecanismos adicionales que todavía están por comprobar parecen actuar en las cepas analizadas justificando el comportamiento de las mismas

Zds1/Zds2-PP2ACdc55 complex specifies signaling output from Rho1 GTPase

Acknowledgments We thank David Pellman, John Pringle, Daniel Lew, Masaki Mizunuma, Kenji Irie, and the Yeast Genome Resource Center for yeast strains and plasmids and members of Yoshida Laboratory and Keiko Kono for their support. Multicopy suppressor screening for gef∆ was initiated in the Pellman Laboratory with the help of Didem Ilter. This research was supported by Sprout grant from Brandeis University (E.M. Jonasson and S. Yoshida), an American-Italian Cancer Foundation Postdoctoral fellowship (V. Rossio), and a Massachusetts Life Sciences Center grant (S. Yoshida).Peer reviewedPublisher PD

Characterization of the S. cerevisiae inp51 mutant links phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate levels with lipid content, membrane fluidity and cold growth

14 Páginas; 9 FigurasPhosphatidylinositol 4,5-bisphosphate [PI(4,5)P2] and its derivatives diphosphoinositol phosphates (DPIPs) play key signaling and regulatory roles. However, a direct function of these molecules in lipid and membrane homeostasis remains obscure. Here, we have studied the cold tolerance phenotype of yeast cells lacking the Inp51-mediated phosphoinositide-5-phosphatase. Genetic and biochemical approaches showed that increased metabolism of PI(4,5)P2 reduces the activity of the Pho85 kinase by increasing the levels of the DPIP isomer 1-IP7. This effect was key in the cold tolerance phenotype. Indeed, pho85 mutant cells grew better than the wild-type at 15 °C, and lack of this kinase abolished the inp51-mediated cold phenotype. Remarkably, reduced Pho85 function by loss of Inp51 affected the activity of the Pho85-regulated target Pah1, the yeast phosphatidate phosphatase. Cells lacking Inp51 showed reduced Pah1 abundance, derepression of an INO1-lacZ reporter, decreased content of triacylglycerides and elevated levels of phosphatidate, hallmarks of the pah1 mutant. However, the inp51 phenotype was not associated to low Pah1 activity since deletion of PAH1 caused cold sensitivity. In addition, the inp51 mutant exhibited features not shared by pah1, including a 40%-reduction in total lipid content and decreased membrane fluidity. These changes may influence the activity of membrane-anchored and/or associated proteins since deletion of INP51 slows down the transit to the vacuole of the fluorescent dye FM4-64. In conclusion, our work supports a model in which changes in the PI(4,5)P2 pool affect the 1-IP7 levels modulating the activity of Pho85, Pah1 and likely additional Pho85-controlled targets, and regulate lipid composition and membrane properties.This research has been supported by the Comisión Interministerial de Ciencia y Tecnología Project (AGL2010-17516) from the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness (MINECO). IC-S was supported by a pre-doctoral fellowship within the “FPI” Program (MINECO).Peer reviewe

Pho85 and PI(4,5)P2 regulate different lipid metabolic pathways in response to cold

Lipid homeostasis allows cells to adjust membrane biophysical properties in response to changes in environmental conditions. In the yeast Saccharomyces cerevisiae, a downward shift in temperature from an optimal reduces membrane fluidity, which triggers a lipid remodeling of the plasma membrane. How changes in membrane fluidity are perceived, and how the abundance and composition of different lipid classes is properly balanced, remain largely unknown. Here, we show that the levels of phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate [PI(4,5)P2], the most abundant plasma membrane phosphoinositide, drop rapidly in response to a downward shift in temperature. This change triggers a signaling cascade transmitted to cytosolic diphosphoinositol phosphate derivatives, among them 5-PP-IP4 and 1-IP7, that exert regulatory functions on genes involved in the inositol and phospholipids (PLs) metabolism, and inhibit the activity of the protein kinase Pho85. Consistent with this, cold exposure triggers a specific program of neutral lipids and PLs changes. Furthermore, we identified Pho85 as playing a key role in controlling the synthesis of long-chain bases (LCBs) via the Ypk1-Orm2 regulatory circuit. We conclude that Pho85 orchestrates a coordinated response of lipid metabolic pathways that ensure yeast thermal adaptation.We would like to thank J. Ariño (Universitat Autònoma de Barcelona), T. Levine (UCL Institute of Ophthalmology, London), R. Serrano (Universitat Politècnica de València) and Y. Kozutsumi (Kyoto University) for providing us with antibodies and plasmids. We acknowledge the help of A. Rella, M.A. Munshi and C. Lazzarini (Stony Brook University) with lipid extractions and equipment use. This research has been supported by the Comisión Interministerial de Ciencia y Tecnología Project (BIO2015-71059-R) from the Spanish Ministry of Science, Innovation and Universities (MICINN/FEDER) and the National Institutes of Health (AI116420 and AI125770 to M.D.P.). I.C.-S. was supported by a pre-doctoral fellowship as part of the “FPI” Program [MICINN].Peer reviewe

Incidencia, factores relacionados y consecuencias de las caídas en un hospital de tercer nivel

Las caídas hospitalarias son un efecto adverso de la asistencia sanitaria y un indicador de calidad asistencial. Conocer su incidencia, circunstancias y consecuencias ayudaría a prevenirlas. Objetivo. Cuantificar las caídas que se producen en pacientes ingresados en el Complejo Hospitalario Universitario de Albacete (CHUA), identificar sus circunstancias y consecuencias, y analizar los factores relacionados con las caídas que producen lesiones. Metodología. Estudio observacional longitudinal prospectivo. Muestra: pacientes ingresados en el CHUA que sufrieron caídas (2014-2016). Variables: sexo, edad, estancia hospitalaria; valoración del riesgo de caídas al ingreso (escala J.H. Downton); número de caídas, circunstancias y consecuencias; medidas preventivas aplicadas. Recogida de datos: cuadro de mandos Montesinos® e indicadores del programa de Centros Comprometidos con la Excelencia en Cuidados®. Resultados: 270 pacientes, 287 caídas. Incidencia por mil días de estancia/año: 0.51; 0.59 y 0.58. Un 67.6% eran hombres. Edad media=70.41 años (DT=14.14) IC95%[68.7-72.2]. Un 29.3% eran menores de 65 años. La mayoría de las caídas se produjeron de noche, en la habitación y el aseo, estando acompañado. Causas más frecuentes: resbalar (32%) y mareo (12.7%). Se había realizado valoración del riesgo de caídas al ingreso en el 79.4%, presentando alto riesgo 32.5%. Tenían plan de prevención 23.6%. Se produjo lesión en un 54.2%, la mayoría leves. Factores que mostraron relación estadísticamente significativa para las caídas con lesión: lugar de la caída y área asistencial. Conclusiones. Aunque la incidencia de caídas es muy baja, hay que seguir trabajando en su prevención, especialmente en hombres y menores de 65 años, así como en disminuir el porcentaje de caídas que causan lesión. Abstract Hospital falls are an adverse health-care event. Furthermore, the number of falls is a quality indicator. Knowing incidence, circumstances and consequences would help us to prevent future falls. Aim: To quantify falls that occurred in patients admitted to the Albacete University Hospital (CHUA), to identify its circumstances and consequences, and to analyze the factors related to falls that cause injuries. Methodology: Longitudinal observational prospective study. Sample: Patients who suffered a fall during hospitalization in CHUA (2014-2016). Variables: sex, age, hospitalization days; fall risk assessment in the moment of the hospitalization(J.H. Downton index); number of falls, circumstances and consequences; prevention plan. Data collection: Montesinos® score card and Best Practice Spotlight Organization® program indicators. Results: 270 patients, 287 falls were evaluated. The frequency of falls/year was 0.51, 0.59 and 0.58 per 1000 inpatient days. 67.6% male suffered falls. Mean age: 70.41 (SD=14.14) CI95% [68,7-72,2]. 29.3% patients who fell were under 65 years-old. The highest percentage of falls happened in night shift, in bedroom and bathroom, patients were accompanied. Circumstances: slip (32%) and dizziness (12.7%). Fall risk assessment on admission was evaluated in 79.4%, 32.5% were classified as “high risk”. 23.6% had a fall prevention plan. Consequences: 54.2% of hospitalized patients who fell suffered injuries, most of them minor injuries. Factors that showed statistically significant relationship for falls with injury: place where fall occurred and care area. Conclusions: The percentage of patients who fell was very low. However, it is important to continue working on fall prevention, especially in men, patients under 65 years-old and on decreasing fall injuries

Evaluación del tratamiento con infiltraciones intraarticulares en la patología osteoarticular del hombro en atención primaria

Resumen: Objetivo principal: Evaluar la respuesta clínica a las 24 semanas de la infiltración, medida como alivio del dolor y recuperación funcional, en el síndrome de hombro doloroso (SHD) en atención primaria (AP). Diseño: Serie de casos longitudinal con tratamiento de inyección en la articulación escapulohumeral; se describen la funcionalidad y la evolución del dolor previa y a las 24 semanas postinfiltración. Emplazamiento: Atención Primaria. Centro de salud no urbano. Participantes: Pacientes con patología osteoarticular de hombro susceptible de infiltración, fracaso de tratamiento farmacológico y calificación en la escala analógica visual (EVA) ≥ 4 o Constant Score (CS) ≤ 70. Intervenciones: Inyección intraarticular corticosteroide y anestésico local en la articulación escapulohumeral, describiendo su evolución a 1, 4, 12 y 24 semanas postinfiltración. Mediciones principales: Respuesta de la infiltración según EVA antes-después, CS antes-después, número de infiltraciones, efectos secundarios, incapacidad laboral transitoria (ILT). Resultados: Se infiltraron 66 pacientes, edad media 51,1 años (DE: 14,7), 57,6% mujeres, 63,3% infiltración hombro derecho. El 22,7% precisaron ILT y cursaron alta con una mediana de 14 días (rango de 7-56 días). Precisaron una infiltración (80,3%) y la patología infiltrada más frecuente fue la tendinitis de los rotadores (90,9%). Sufrieron efectos secundarios leves un 9,4%. Encontramos disminución de dolor de severo a leve y una mejoría funcional de pobre a buena. Las variables: ser jubilado (OR: 37,82, p = 0,001) y tener un puntaje EVA previo a la infiltración > 8 (OR; 15,67, p = 0,055, cuasi significativo) se asociaron a mala respuesta. Conclusiones: La administración intraarticular de corticosteroides en el SHD disminuye el dolor y aporta una mejoría funcional tras la primera semana postinfiltración, manteniéndose a largo plazo. Esto permite una rápida incorporación laboral con una infiltración a las 2 semanas, disminuyendo en un 50% el tiempo de recuperación, con escasos efectos secundarios. Abstract: Main objective: To evaluate the clinical response at 24 weeks after injection, measured as pain relief and functional recovery, in painful shoulder syndrome (PSS) in primary care (PC). Design: Longitudinal case series with injection treatment in the scapulohumeral joint, describing functionality and pain evolution before and at 24 weeks post injection. Location: Non-urban primary care centres. Participants: Patients with osteoarticular shoulder pathology susceptible to injection, failure of pharmacological treatment and rating on the visual analogue scale (VAS) ≥ 4 or constant score (CS) ≤ 70. Interventions: Intra-articular injection of corticosteroid and local anaesthetic into the scapulohumeral joint, describing its evolution at 1, 4, 12 and 24 weeks post injection. Main measurements: Infiltration response according to EVA before and after, CS before and after, number of infiltrations, side effects, temporary inability to work (TIL). Results: Sixty-six patients receiving injection, mean age 51.1 years (SD 14.7), 57.6% were women and 63.3% were injection in the right shoulder. A 22.7% required TIL and were discharged with a median of 14 days (range 7-56 days). They required an injection (80.3%) and the most frequent injection pathology was rotator cuff tendinitis (90.9%). They suffered mild side effects (9.4%). We found a decrease in pain from severe to mild and a functional improvement from poor to good. The variables: being retired (OR: 37.82, P = .001) and having an EVA score prior to injection > 8 (OR: 15.67, P = .055, almost significant) were associated with poor response. Conclusions: Intra-articular administration of corticosteroids in PSS reduces pain and provides functional improvement after the first week after injection, and is maintained in the long term. This allows a quick recovery to work after an injection at two weeks reducing recovery time by 50%, with few side effects

Desarrollo del espíritu emprendedor entre los alumnos de primaria

Resumen elaborado por la Coordinadora del proyecto.La empresa Natur-art ha ganado el Premio a la Iniciativa Social en la XI Entrega de Premios de la Asociación de Jóvenes Empresarios de Albacete (AJE), así como el 2º premio INTEF para fomentar la creación de recursos educativos destinados a internet.La idea de fomentar el espíritu emprendedor entre los alumnos de primaria nace en 2008 de la experiencia de más de 20 años en el desarrollo del mismo entre los alumnos universitarios y otros colectivos de adultos de Castilla-La Mancha. Este proyecto tiene dos líneas de actuación básicas en temas de emprendimiento, ambas contextualizadas en el ámbito de la Responsabilidad Social de la Empresa y el respecto al Medio Ambiente: -Concienciación y formación del profesorado de primaria, garantizando la continuidad del proyecto más allá de su propia extinción. -Motivación y formación de los alumnos de primaria, a través de la creación y gestión de empresas ficticias, como Amidecor, Molisan o Natur-art. Además, para mejorar la comunicación entre los centros que forman un CRA, se diseñó una herramienta propia que permite, en tiempo real, la interacción entre profesores-alumnos-padres: la Web-CRA.Consejería de Educación, Cultura y Deportes de Castilla-La ManchaCastilla La ManchaES