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Implicación de NF-κB y p53 en la expresión de receptores de muerte-TRAIL y apoptosis por procianidinas en células metastásicas humanas SW620
Introduction. The nuclear factor-kappaB (NF-κB) has been shown to upregulate pro-apoptotic mediators such as TRAIL-DR4/-DR5 receptors and the p53 transcription factor depending on the type of stimulus and the cell type involved. Previously, apple procyanidins (Pcy) have been shown to upregulate the expression of TRAIL-DR4/-DR5 and thereby overcoming the resistance of human colon cancer-derived metastatic SW620 cells to TRAIL.Objectives. NF-κB and p53 were investigated for their involvement in the Pcy-triggered apoptosis of human derived-metastatic colon cancer (SW620) cells.Materials and methods. Cell death, p53, TRAIL-DR4/-DR5 proteins were analyzed by flow cytometry. DR4/DR5 mRNA was analyzed by RT-PCR in real time. Activated p50/p65 and p53 forms were studied by ELISA and immunoblotting.Results. Pcy-triggered cell death was prevented by specific inhibitors of NF-κB and of p53: amino-4-(4-phenoxy-phenylethylamino) quinazoline (QNZ) and pifithrin α (Pα), respectively. QNZ and Pα inhibited the Pcy-dependent activation of TRAIL-DR4/-DR5 death receptors. However, the upregulation of TRAIL-DR4 by Pcy was significantly decreased only when NF-κB and p53 inhibitors were used in combination; this effect was not observed with a single inhibitor. This effect was not observed for TRAIL-DR5 and suggested that the expression of each TRAIL-death receptor may be regulated differently.Conclusions. These data suggested that NF-κB and p53 are partially required in Pcy-triggered apoptosis of SW620 cells by up-regulating the expression of TRAIL-DR4/-DR5. In addition, the ratio between TRAIL-DR4/-DR5 may be a determining factor in the activation of TRAIL-death receptor mediated apoptosis. Introducción. Se ha demostrado que el factor nuclear-κB y p53 aumentan los mediadores proapoptósicos como los receptores de muerte TRAIL-DR4/-DR5, según el estímulo y el tipo celular. Previamente demostramos que las procianidinas de manzana aumentaban la expresión de TRAIL-DR4/-DR5, superando la resistencia a TRAIL característica en células humanas metastásicas SW620 derivadas del cáncer de colon.Objetivo. Investigar si NF-κB y p53 están involucrados en la apoptosis inducida por procianidinas en las células SW620.Materiales y métodos. La muerte celular y las proteínas p53, TRAIL-DR4/-DR5 se analizaron por citometría de flujo. Los ARN mensajeros (ARNm) de DR4/DR5 se analizaron por RT-PCR. Las formas activadas de p50/p65 y p53 se estudiaron por ELISA e inmunodetección.Resultados. La muerte celular activada por procianidinas fue prevenida por inhibidores específicos de NF-κB y de p53: amino-4-(4-fenoxi-feniletilamino)-quinazolina y pifitrina α, respectivamente. La quinazolina y la pifitrina α inhibieron la activación dependiente de procianidinas de TRAIL-DR4/DR5. Sin embargo, el aumento en la expresión de TRAIL-DR4 disminuyó significativamente sólo cuando la quinazolina y la pifitrina α se usaron simultáneamente; este efecto no se observó con cada uno por separado. No se observaron para TRAIL-DR5 estos efectos, lo cual sugiere que la expresión de cada receptor de muerte TRAIL puede estar regulada en forma diferente. Conclusiones. Estos datos sugieren que NF-κB y p53 se requieren parcialmente en la apoptosis de células SW620 inducida por procianidinas mediante el aumento en TRAIL-DR4/-DR5. La proporción de DR4/DR5 podría ser un factor determinante en la activación de la apoptosis por vía de TRAIL-DR4/-DR5
Activación diferencial de la apoptosis vía Fas (CD95) por procianidinas de manzana en células humanas de cáncer de colon y sus derivadas metastásicas
Introduction: We investigated the effects of apple procyanidins (Pcy), oligomers of catechins and epicatechins on Fas
receptor expression and function in human colon adenocarcinoma cells (SW480) and in their derived metastatic cells
(SW620).
Methods: Pcy were characterized by reverse-phase HPLC. Cell death, Fas proteins, DNA fragmentation, and mitochondrial
membrane potential were analyzed by flow cytometry. Fas mRNA was analyzed by RT-PCR in real time.
Results: Pcy up-regulated the expression of the Fas receptor at the cell surface of both cell lines but activated Fas gene
transcription only in SW620 cells. In SW480 cells, Pcy combined with Fas agonist CH-11 enhanced Fas-mediated apoptosis
involving the loss of mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation, which were abrogated by the antagonist
antibody of Fas receptor, the anti-Fas ZB4. On the contrary, in SW620 cells, CH-11 was not able to enhance Pcy-triggered
apoptosis indicating that Fas receptor-mediated apoptosis was not activated in these cells despite an up-regulation of Fas
receptor gene expression. However, it was observed in SW620 cells that Pcy activated the Fas receptor-mediated apoptotic
pathway after a specific blockage of TRAIL-death DR4/DR5 receptors.
Conclusions: The present data showed that Pcy were able to activate the Fas receptor apoptotic pathway in SW480 cells
and favored a cross-talk between TRAIL and Fas receptors in SW620 cells because specific blocking of TRAIL death
receptors favored activation of the Fas receptor-mediated apoptosis. These important data may allow the emergence of new
therapeutic protocols targeting death receptors against resistant metastatic cells. Introducción: Se estudiaron los efectos de procianidinas (Pcy) de manzana, oligómeros de catequinas y epicatequinas
en la expresión y función del receptor Fas en células humanas de cáncer de colon (SW480) y sus derivadas metastásicas
(SW620).
Métodos: Las Pcy se caracterizaron por cromatografía líquida de alta presión (HPLC) en fase-reversa. Se analizaron por
citometría de flujo la muerte celular, la proteína Fas, la fragmentación del ADN y el potencial de la membrana mitocondrial.
Se analizaron los transcriptos de Fas por RT-PCR en tiempo real.Resultados: Las Pcy aumentaron la expresión del receptor
Fas en la superficie celular de ambas líneas celulares pero
la transcripción del gen Fas fue activado transcripcionalmente
sólo en las células SW620. En las células SW480, las Pcy
combinadas con el agonista de Fas CH-11 potenció la
apoptosis mediada por Fas involucrando la pérdida del
potencial mitocondrial de membrana y la fragmentación del
ADN los cuales fueron evadidos por el anticuerpo antagonista
del receptor Fas anti-ZB4. Por el contrario, en las células
SW620, CH-11 no fue capaz de potenciar la apoptosis
activada por Pcy indicando que la apoptosis mediada por el
receptor Fas no fue activada en estas células a pesar del
aumento en la expresión de Fas por regulación a nivel
transcripcional. Sin embargo, se observó en las células SW620
que las Pcy activaron la vía apoptótica mediada por el
receptor Fas después de un bloqueo específico de los receptores
de muerte TRAIL DR4/DR5.
Conclusiones: Estos datos muestran que las Pcy fueron
capaces de activar la apoptosis a través del receptor Fas en las
células SW480 y favorecieron una intercomunicación entre
los receptores TRAIL y Fas en las células SW620 debido a
que el bloqueo específico de los receptores de muerte TRAIL
favoreció la activación de la apoptosis mediada por el receptor
Fas. Estos datos podrían permitir el surgimiento de
nuevos protocolos terapéuticos dirigidos contra receptores
de muerte en células metastásicas resistentes
Effets des acides gras polyinsaturés n-3 et n-6 dans les cellules musculaires lisses d'aorte de rat (implication dans l'athérosclérose)
PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF