Autism and Language: A Case Study of an Adolescent

The present work aims to offer a different perspective on the use of language in autism, dissociating it from a defective and pathological view. The first part of this paper will present a literature review, from the first description of autism to the most recent psychiatric definition of Autism Spectrum Disorder. Both DIRFloortime® and a Lacanian psychoanalytic understanding of language in autism will be provided. In order to revisit theoretical paradigms and to investigate how an individual diagnosed with autism makes use of language, the second part will include a case study of weekly meetings with a young autistic man over the course of three months. By exploring content, associations, and language addressed to the other, the intent is to advocate that language in autism should not be reduced to its defective and pathological characteristics. Instead, it should be seen as meaningful and purposeful for the autistic subjects and for those who may engage with them

Derivation of kidney organoids from human induced pluripotent stem cells under 3D conditions

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) have the unique potential of self-renewal and the functional capacity to give rise to any specialized cell type in the human body, including all types of renal cells. By virtue of these outstanding features, hiPSCs constitute a powerful research tool and present an immensurable clinical potential. Kidney organoids derived from hiPSCs constitute attractive three-dimensional (3D) models that may enable kidney regeneration, disease modelling and drug screening, amongst others. The following experimental work focused on developing kidney organoids from hiPSCs under 3D conditions resorting to commercially available high-throughput microwells. For that purpose, two relevant protocols, which combine monolayer and 3D culture, were applied and adapted to a full 3D culture configuration. The conducted differentiation experiments under 3D conditions revealed temporal discrepancy of the obtained cellular stages in relation to the referred protocols. In the end, it was possible to generate immature kidney organoids.As células estaminais pluripotentes induzidas humanas (hiPSCs) têm o potencial único de autorrenovação e a capacidade funcional de originar qualquer tipo de célula especializada no corpo humano, incluindo todos os tipos de células renais. Em virtude destas características excecionais, as hiPSCs são um poderoso instrumento de pesquisa e apresentam um potencial clínico imensurável. Os organóides de rim derivados de hiPSCs constituem modelos tridimensionais (3D) atrativos que podem permitir a regeneração do rim, modelação de doenças e triagem de fármacos, entre outros. O seguinte trabalho experimental focou-se no desenvolvimento de organóides de rim a partir de hiPSCs sob condições 3D recorrendo a uma metodologia high-throughput através do uso de micropoços. Com esse propósito, dois protocolos relevantes, que combinam cultura em condições aderentes e cultura 3D, foram aplicados e adaptados a uma configuração de cultura totalmente em condições 3D. As experiências de diferenciação conduzidas sob condições 3D revelaram uma discrepância temporal dos estágios celulares obtidos em relação aos protocolos referidos. No final, foi possível gerar organóides de rim imaturos

Evaluation of the accumulation and toxicity of pharmaceuticals in lettuce plants

Doutoramento em Engenharia do Ambiente / Instituto Superior de Agronomia. Universidade de LisboaPharmaceutical products (considered emerging contaminants) are a growing source of environmental contaminants, mainly due to their high daily use by the population. The main objective of this work was to study the absorption of pharmaceuticals and their main effects on lettuce metabolism. The experimental tests were carried out in hydroponic culture, contaminating lettuce plants with three selected pharmaceuticals, carbamazepine (CBZ), metformin (MTF) and acetaminophen (ACT). Three concentrations (0.1, 1 and 5 mg L-1), of each pharmaceutical were tested as well as three different time points (1, 8 and 15 days). CBZ and ACT uptake was measured in roots and leaves, and it was possible to observe that both pharmaceuticals were absorbed by roots and translocated to the leaves. MTF quantification was not carried out, yet the effects resulting from its presence in growth medium were analysed. Plants subjected to the highest concentrations of CBZ (5 mg L-1) showed visible symptoms of toxicity, such as a reduction in leaf and root biomass, as well as a decrease in root length. The main results point to different responses according to the pharmaceutical applied. The three contaminants showed to increase the concentrations of stress indicators (hydrogen peroxide and malondialdehyde). Consequently, the enzymes involved in the detoxification of reactive oxygen species showed different patterns over time and according to the applied concentration. The ability to tolerate different concentrations of CBZ, ACT and MTF reflects the global antioxidant response of lettuce. In general, these mechanisms showed to be more effective in contaminations with ACT and MTF than with CBZ. Proteomic analysis allowed a detailed study of different proteins involved in detoxification processes and cellular regulation processes. CBZ proved to be the contaminant that most influenced proteins abundance in roots, comparing to control, while in the leaves, this trend was observed in contamination with ACTN/

Methylglyoxal metabolism in Leishmania infantum

Tese de doutoramento, Bioquímica (Regulação Bioquímica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010.Leishmaniasis, caused by a Leishmania parasite belonging to the Trypanosomatidae family, are diseases affecting humans and other mammals. The most severe form of the disease is lethal if untreated, currently existing no vaccines or efficient therapies. The identification of new therapeutic targets is presently based on exploiting the biochemical differences between the parasite and the host. One of the main biochemical characteristics distinguishing trypanosomatids from other eukaryotic cells is the functional replacement of glutathione by trypanothione. In trypanosomatids, the glyoxalase system, comprising the enzymes glyoxalase I and glyoxalase II, depends on trypanothione to eliminate methylglyoxal, a toxic compound formed non-enzymatically during glycolysis. Hence, this is an excellent model system to understand trypanothione-dependent enzymes specificity at a kinetic and molecular level. The methylglyoxal metabolism in L. infantum study would not be complete without an account of aldose reductase, a NADPH-dependent enzyme also catabolising this toxic compound. This project includes an eclectic structural and biochemical study of the main enzymes involved in methylglyoxal catabolism, contributing for the knowledge of these complex parasites. Additionally, these enzymes’ activities complement each other in such a way that they can be synergistically exploited in the quest for new anti-leishmanial drug targets. The glyoxalase I gene from Leishmania infantum (LiGLO1) was isolated and cloned into an expression vector for bacteria. The recombinant protein was over-expressed in E. coli, purified and kinetically characterised. LiGLO1 showed to preferentially use the hemithioacetal derived from trypanothione, although it can also catalyse the same reaction with the glutathione-derived hemithioacetal. The recombinant protein was crystallised and its structure solved by molecular replacement, using the glyoxalase structure from L. major as a search model. Although the LiGLO1 structure is very similar to the L. major GLO1, as expected by its high homology, the metal observed at the active site is different. While LmGLO1 requires nickel for its activity, like glyoxalase I from prokaryotes, it was shown both by ICP and anomalous diffraction that LiGLO1 contains zinc in the active site, as its eukaryotic homologues. On the other hand, LiGLO1 has significant structural differences relatively to the human glyoxalase I enzyme. The glyoxalase II gene from L. infantum (LiGLO2) was also isolated and cloned in a bacterial expression vector. The recombinant protein was over-expressed in E. coli, purified and kinetically characterised, confirming its specificity towards trypanothione-derived thiolesters. LiGLO2 was crystallised and its structure solved by molecular replacement, using the glutathione-dependent human glyoxalase II structure as a search model, for its high sequence homology with the structurally unknown L. infantum protein. The determined structural model for LiGLO2 is very similar to its human counterpart. Highly conserved residues were identified in the active site, as well as specific residues of the L. infantum enzyme, being noteworthy the presence of the spermidine-binding Cys294 and Ile171, both absent from the human enzyme. The presence of a spermidine molecule on the LiGLO2 substrate binding site, together with sequence analysis, clarified the enzyme’s substrate specificity at a molecular level. Both ICP metal-analysis and the B factor values for the metal atoms revealed the presence of zinc and/or iron in the enzyme active site. A structure with D-lactate in the active site was obtained by crystal soaking with substrate. Superimposing both LiGLO2 structures, the localization of the trypanothione-derived thiolester in the substrate-binding site could be clearly inferred. Two of the residues forming the substrate- binding pocket, Tyr291 and Cys294, were subsequently replaced by the S-D-lactoylglutathione- binding residues found on the human enzyme, Arg249 and Lys252, respectively. Recombinant mutated LiGLO2 was over-expressed in E. coli. Kinetic analysis revealed that the enzyme’s substrate specificity was changed, catalysing the reaction with S-D-lactoylglutathione, and loosing affinity towards S-D-lactoyltrypanothione. These results show that the mutated residues are critical for the enzyme specificity. The aldose reductase gene from L. infantum (LiAKR) was identified for the first time in a trypanosomatid. It was isolated and cloned into an expression vector. Over-expression of the soluble recombinant protein in E. coli was only achieved by co-expression with chaperone systems. The LiAKR enzyme was kinetically characterised as a NADPH-dependent aldose reductase involved in the catabolism of methylglyoxal. This protein was recently crystallised, although the observed diffraction requires crystal optimization.Leishmanioses são doenças que afectam humanos e outros mamíferos, provocadas por um parasita do género Leishmania, pertencente à família Trypanosomatidae. A forma mais severa da doença é letal se não for tratada, não existindo actualmente vacinas ou terapias curativas eficazes. A identificação de novos alvos terapêuticos baseia-se em diferenças encontradas entre o parasita e o hospedeiro. Uma das principais características bioquímicas que distingue os tripanossomatídeos de outras células eucariotas é a substituição funcional de glutationo por tripanotiono. Em tripanossomatídeos, o sistema dos glioxalases, constituído pelos enzimas glioxalase I e glioxalase II, depende de tripanotiono para eliminar o metilglioxal, um composto tóxico formado nãoenzimaticamente durante a glicólise. Assim, este é um excelente sistema modelo para compreender a especificidade de enzimas dependentes de tripanotiono a um nível cinético e molecular. No entanto, o estudo do metabolismo do metilglioxal em L. infantum não estaria completo sem referir o aldose redutase, um enzima dependente de NADPH que também catabolisa este composto tóxico. Este projecto inclui um estudo estrutural e bioquímico eclético dos principais enzimas envolvidos no catabolismo do metilglioxal, contribuindo para o estudo destes complexos parasitas. Para além disso, as actividades destes enzimas são de tal modo complementares que podem ser exploradas sinergisticamente na busca por novos alvos para fármacos anti-leishmania. O gene do glioxalase I de Leishmania infantum foi isolado e clonado num vector de expressão. A proteína recombinante foi sobre-expressa em E. coli, purificada e caracterizada cineticamente, verificando-se que o LiGLO1 catalisa preferencialmente o hemitioacetal derivado de tripanotiono, embora também possa utilizar o hemitioacetal derivado de glutationo. A proteína recombinante foi cristalizada e a sua estrutura resolvida por substituição molecular, utilizando a estrutura do glioxalase I de L. major como modelo de pesquisa. Embora a estrutura do LiGLO1 seja muito semelhante à do LmGLO1, como esperado pela sua elevada homologia de 97 %, estes enzimas diveregem no metal presente no centro activo. Enquanto o LmGLO1 requer níquel para a sua actividade, à semelhança dos glioxalases I de procariotas, foi verificado tanto por ICP como por difracção anómala, que o LiGLO1 contém zinco no seu centro activo, à semelhança dos seus homólogos eucariotas. Estes resultados permitiram-nos estabelecer uma diferença entre ambas as espécies de Leishmania, e propor uma hipótese em que o enzima de L. infantum terá divergido dos procariotas mais cedo na linha evolutiva do que o enzima de L. major. Por outro lado, LiGLO1 tem grandes diferenças estruturais em relação ao homólogo humano. O glioxalase II de L. infantum foi também isolado e clonado num vector de expressão. A proteína recombinante foi sobre-expressa em E. coli, purificada e caracterizada cineticamente, confirmando-se a sua especificidade para os tioésteres derivados de tripanotiono. LiGLO2 foi cristalizado e a sua estrutura resolvida por substituição molecular, utilizando a estrutura do glioxalase II humano, dependente de glutationo, como modelo de pesquisa. O modelo da estrutura determinado para o LiGLO2 é muito semelhante ao do seu homólogo humano. Foram identificados resíduos conservados no centro activo (His76, His78, Asp80, His81, His139, Asp164, His210) bem como resíduos específicos no enzima de L. infantum (dos quais é de salientar a presença da Cys294 e Ile171, que ligam a espermidina e a ausência dos resíduos Arg249, Lys143 e Lys252, existentes no enzima humano). A presença de uma molécula de espermidina no local de ligação ao substrato do LiGLO2, juntamente com uma análise das sequências, elucidou a especificidade do substrato do enzima ao nível molecular. Tanto a análise de metais por ICP, como os valores dos factores B dos átomos de metal, revelaram a presença de zinco e/ou ferro no centro activo do enzima. Foi obtido um modelo estrutural deste enzima com D-lactato no centro activo, através de soaking de cristais com substrato. Sobrepondo ambas as estruturas do LiGLO2, pôde ser claramente inferida a localização do tioester derivado de tripanotiono no centro de ligação ao substrato. Dois dos resíduos que formam a cavidade onde se liga o substrato, Tyr291 e Cys294, foram subsequentemente substituídos por resíduos que ligam o S-D-lactoilglutationo no enzima humano, Arg249 e Lys252, respectivamente. O LiGLO2 mutado recombiante foi sobre-expresso em E. coli. Este enzima mutado foi instável durante o processo de purificação. Análise cinética revelou que a especificidade do enzima para o substrato foi alterada, reagindo com S-D-lactoilglutationo e perdendo actividade para o S-D-lactoiltripanotiono. Estes resultados mostram que os resíduos mutados são críticos para a especificidade do enzima. O gene do aldose redutase de L. infantum foi identificado pela primeira vez num tripanossomatídeo. Foi isolado e clonado num vector de expressão. A sobre-expressão da proteína recombinante na fracção solúvel em E. coli foi apenas conseguida por co-expressão com sistemas de chaperones. O enzima LiAKR foi cineticamente caracterizado como um aldose redutase dependente de NADPH envolvido no catabolism do metilglioxal. Esta proteína foi recentemente cristalizada, embora a difracção observada requeira optimização dos cristais.Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT), SFRH/BD/28691/2006; European Molecular Biology Organization (EMBO

Integration of stemness gene signatures reveals core functional modules of stem cells and potential novel stemness genes

Stem cells encompass a variety of different cell types which converge on the dual capacity to self-renew and differentiate into one or more lineages. These characteristic features are key for the involvement of stem cells in crucial biological processes such as development and ageing. To decipher their underlying genetic substrate, it is important to identify so-called stemness genes that are common to different stem cell types and are consistently identified across different studies. In this meta-analysis, 21 individual stemness signatures for humans and another 21 for mice, obtained from a variety of stem cell types and experimental techniques, were compared. Although we observed biological and experimental variability, a highly significant overlap between gene signatures was identified. This enabled us to define integrated stemness signatures (ISSs) comprised of genes frequently occurring among individual stemness signatures. Such integrated signatures help to exclude false positives that can compromise individual studies and can provide a more robust basis for investigation. To gain further insights into the relevance of ISSs, their genes were functionally annotated and connected within a molecular interaction network. Most importantly, the present analysis points to the potential roles of several less well-studied genes in stemness and thus provides promising candidates for further experimental validation.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Aplicação da realidade virtual como estratégia para o controlo da dor

info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Exposição e acumulação de elementos potencialmente tóxicos em plantas de colza Brassica napus L.

Mestrado em Engenharia do Ambiente - Instituto Superior de AgronomiaThe main objective of this work was to evaluate the effects and the response to stress induced by potentially toxic elements, arsenic, cadmium and copper by salinity in rapeseed plants, aiming to realize the potential of rapeseed in phytoremediation. The physiological parameters like biomass and the percentage of dry matter of stems and leaves were evaluated. It was also evaluated the chlorophyll content by Hansatech method. Changes in biomass were more evident in terms of As and NaCl contamination. The chlorophyll content of plants exposed to Cu and Cd proved to be very low, a result that was revealed through plants with obvious signs of necrosis and chlorosis. The concentrations of MDA and H2O2 revealed a heterogeneous behavior, especially with the higher concentration of MDA rape plants with Cu and NaCl and the highest concentration of H2O2 in the NaCl experiment. The mineral content of the plant was different in the various experiments, particularly the absorption of iron was affected by the presence of the PTE. The concentrations of PTE and NaCl were determined at the level of substrate, stems, leaves and seeds

Análise da divulgação ambiental em empresas petrolíferas

O presente trabalho tem como objetivo analisar a evolução da divulgação voluntária de informação das empresas petrolíferas, no período de 2008-2012, tendo por base os indicadores de desempenho ambiental da GRI. Este projeto de investigação surgiu da consciencialização dos problemas ambientais que o mundo de hoje enfrenta. Perante este cenário, as empresas devem tomar decisões corretas quanto à relação existente entre meio ambiente e o meio empresarial. Elas necessitam de informações confiáveis e claras acerca das perdas que as suas atividades provocam no meio ambiente, identificando e descrevendo os custos e ganhos ambientais associados. Dos resultados obtidos, concluiu-se que a divulgação voluntária de informação por parte das empresas petrolíferas é ainda reduzida na área do desempenho ambiental, apesar de se ter verificado uma evolução positiva nos cinco anos estudados. Em termos médios, dos 30 indicadores recomendados, apenas 24 são divulgados por estas empresas, revelando assim uma reduzida adesão à divulgação voluntária de informação segundo a estrutura da GRI. Quanto aos fatores determinantes, apurou-se que a certificação contribui para a divulgação de informação e que, pelo contrário, a rendibilidade não é um fator influenciador

Divulgação de perdas por imparidade : o caso das empresas cotadas portuguesas

Mestrado em Contabilidade, Fiscalidade e Finanças EmpresariaisEste estudo tem como principal objetivo analisar o reconhecimento e a divulgação das perdas por imparidade nas empresas portuguesas cotadas na bolsa de valores de Lisboa em dois períodos distintos: os anos de 2008-2009 correspondem ao período anterior à crise e os anos 2014-2015, correspondem aos anos posteriores à crise. Neste estudo são analisadas as perdas por imparidade de 33 empresas cotadas na Euronext Lisboa nestes mesmos dois períodos. No período antes da crise, os resultados revelaram que não há diferenças significativas entre o número de empresas que divulgaram as perdas por imparidade e daquelas que não o divulgaram. Mas em relação ao período depois da crise, verificou-se um aumento do número de empresas que passaram a divulgar esta informação, concretamente nos setores "Bens de Consumo", "Serviços de Consumo" e "Petróleo e Energia". Considera-se que este estudo vem contribuir para a investigação na temática do reconhecimento e relevância das perdas por imparidade destes ativos, sendo útil no que concerne à análise de fatores explicativos das opções das entidades na realidade portuguesa. Assim como, contribuir para a consciencialização dos responsáveis pela contabilidade das organizações sobre a importância da divulgação de perdas por imparidade de acordo com as normas internacionalmente adotadas, que contribuem para uma tomada de decisão mais sustentada por parte dos utilizadores da informação financeira.The aim of this study is to analyse the recognition and disclosure of impairment losses in Portuguese companies listed on the Lisbon stock exchange in two different periods: the period before the crisis and the period after the crisis. This study analysis the impairment losses of 33 companies listed on Euronext Lisbon, in two different periods: the years 2008-2009 before the crisis and the post-crisis years 2014-2015. In the period before the crisis, the results showed that there were no differences between the number of companies that disclosed impairment losses and those that did not disclose it. Concerning, the period after the crisis, there was an increase in the number of companies that started to disclose this information, specifically in the sectors "Consumer Goods", "Consumer Services" and "Oil and Energy". This study intends to contribute to the research in the thematic of the recognition and relevance of the impairment losses of these assets, being useful in what concerns to the analysis of explanatory factors of the options of the entities in the Portuguese reality. As well as contributing to the awareness of those responsible for the accounting of organizations about the importance of disclosure of impairment losses in accordance with internationally adopted standards, which contribute to a more sustained decision-making by users of financial information.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Barreiras e facilitadores na adaptação à prótese em pessoas amputadas a membros inferiores

Tese de mestrado, Psicologia (Área de Especialização em Psicologia Clínica e da Saúde - Psicoterapia Cognitivo-Comportamental e Integrativa), Universidade de Lisboa, Faculdade de Psicologia, 2019O presente estudo pretende, investigar na perspetiva da pessoa amputada a membros inferiores, quais as principais barreiras e facilitadores, na adaptação ao uso da prótese. É um estudo descritivo, de caráter exploratório, que segue uma abordagem qualitativa. Realizaram-se entrevistas semiestruturadas a dez pessoas amputadas a membros inferiores, e posteriormente, foi feita análise temática no NVivo Pro 12. Os facilitadores mais identificados foram a motivação, a aceitação da condição, e o apoio, principalmente dos profissionais de saúde. As principais barreiras reportadas foram as variáveis técnicas da prótese, com especial destaque para as condições do coto e os materiais, o pensamento derrotista, o preconceito e a restrição de atividades. Os resultados encontrados, foram todos de encontro a literatura já existente, embora, não se tenha encontrado estudos que, procurassem estudar diretamente, a relação entre barreiras e facilitadores, e adaptação à prótese. É este o caráter mais inovador do presente estudo