Ultrasound assisted oncolytic virotherapy: in vitro and in vivo studies

Tese de mestrado integrado em Engenharia Biomédica e Biofísica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2015A ‘sonoporação’ é um processo através do qual a permeabilidade de membranas celulares é modificada. Esta alteração na membrana leva à formação de poros através dos quais pequenas moléculas conseguem passar. Nas últimas décadas, investigação na área de viroterapia mediada por ultrassons focalizados, na presença de agentes de contraste, designados por ‘micro bolhas’, provou que este tratamento poderia ser uma boa alternativa para o tratamento de tumores. As terapias em estudo incluem estratégias tais como o recurso a vírus oncolíticos que têm afinidade para tecidos inflamados e que por activação do sistema imunitário causam a sua destruição – estes vírus são conhecidos em viroterapia como ‘vírus suicidas’. Aplicações com vírus oncolíticos encontram no processo de sonoporação uma forma de aumentar/facilitar a entrada de conteúdo viral para o interior das células cancerígenas mas existem ainda muitos problemas a ultrapassar em termos de eficiência e segurança para que estes tratamentos possam ser utilizados em meio clínico. A toxicidade da ‘terapia viral’ é um dos maiores problemas associados e com o intuito de minimizar este problema, foi desenvolvida uma nova técnica designada por ‘Isolated Limb Perfusion’ (ILP). Esta técnica tem por base o isolamento de vasos sanguíneos que irrigam a região do tumor, normalmente aplicada nos membros superiores ou inferiores, isolando o membro da circulação sistémica através de um torniquete. A técnica ILP vai ser usada neste projecto em ratos da linhagem Brown Norwegian, nos quais serão implantadas células cancerígenas (linha de células de fibrosarcoma BN175) nos membros inferiores. Um fibrosarcoma/sarcoma é um tumor maligno dos tecidos moles que normalmente se desenvolve nos membros inferiores. Os tratamentos para este tipo de cancro incluem uma cirurgia extremamente invasiva com possibilidade de remoção do membro para garantir a sobrevivência do doente e que é normalmente combinada com radioterapia. Posto isto, é muito importante que se promova a investigação neste tipo de terapias de forma a tornar os tratamentos menos invasivos. Com este objectivo, este projecto é um estudo piloto com fundamento num estudo de Pencavel et al., com o título “Isolated limb perfusion with melphalan, tumour necrosis factor-alpha and oncolytic vaccinia virus improves tumour targeting and prolongs survival in a rat model of advanced extremity sarcoma”, publicado em 2015 em International Journal of Cancer. Assim, o propósito deste estudo é adicionar ‘ultrassons focalizados’ a esta terapia combinada para verificar se i) há um aumento da entrada e replicação do vírus de forma a aumentar a eficiência do tratamento e ii) se existe a possibilidade de evitar o uso de um factor de necrose tumoral (TNF-α) para reduzir a toxicidade do tratamento. Este factor, pertence a um grupo de citocinas capaz de provocar a morte de células tumorais e que possuem uma vasta gama de acções pró-inflamatórias sendo altamente tóxico quando em circulação sistémica. A distribuição de vírus mediada por ultrassons oferece uma oportunidade para a realização de terapia direccionada não-invasiva em órgãos internos específicos. Para isto, a sonoporação envolve o uso de micro bolhas que são injectadas na corrente sanguínea em conjunto com os restantes agentes químicos e os vírus. Quando estas micro bolhas são expostas aos feixes de ultrassons focalizados, a uma dada frequência, estas expandem-se e contraem com rapidez. Se as micro bolhas estiverem próximas de uma membrana celular, a sua deformação ou fragmentação física aumenta a porosidade da membrana celular. O mecanismo exacto envolvido ainda não é completamente compreendido, mas é associado a cavitação acústica que pode ser estável ou instável. A cavitação estável ocorre quando as bolhas oscilam por sucessivas compressões e descompressões mas permanecem intactas. Por outro lado, a cavitação instável ocorre quando são usadas amplitudes de alta pressão, conduzindo ao colapso das bolhas. Os principais objectivos deste projecto piloto são estudar a distribuição do vírus nos tumores e quantificar o número de partículas virais com capacidade de se replicarem. Isto é conseguido através de ensaios químicos como qPCR (quantitative real-time Polymerase Chain Reaction), Plaque Assay (para quantificar a presença de vírus) e Imunofluorescência. Este processo vai incluir experiências in vitro com a linha de células BN175, inicialmente para testar o efeito da utilização de (i) ultrassons focalizados (ii) micro bolhas e (iii) ultrassons focalizados e micro bolhas. As experiências in vitro vão incluir o estudo do efeito de diferentes parâmetros físicos tais como: o valor de pressão in situ causado pela propagação da onda de som; a quantidade de tempo em que os ultrassons são emitidos durante um determinado tempo de exposição (Duty Cycle); a frequência de repetição do pulso de ultrassom; o tempo de exposição e a concentração de micro bolhas na solução a ser testada. O objectivo da variação destes parâmetros, que é feita com base na literatura, tem como objectivo promover a cavitação instável e ao mesmo tempo evitar que isto cause a morte das células cancerígenas para garantir que os vírus poderão vir a atravessar a membrana de células viáveis. A partir dos resultados encontrados através das experiências in vitro, serão escolhidos os melhores parâmetros a utilizar in vivo para determinar se uma terapia que combina ultrassons focalizados, Melphalan, TNF-α e Vírus da Varíola (geneticamente modicado para uma ‘versão’ menos infecciosa) será uma potencial forma de tratamento/cura de tumores, de forma menos invasiva. Para realizar as experiências in vitro, foi realizada uma calibração dos equipamentos a utilizar, nomeadamente dos transdutores, para garantir que todos os ‘outputs’ são conhecidos (com uma incerteza de 10% associada). Além disto, foi realizado um estudo para perceber quais são os valores de pressão que favorecem a cavitação inercial para poder associar os resultados à presença ou ausência de cavitação inercial, de acordo com os parâmetros utilizados. Os testes in vitro mostraram que valores de pressão superiores a 0.9 MPa, para valores fixos de frequência de repetição do pulso de 100 Hz, um feixe com 40 ciclos e uma exposição de 0.5 s, reduzem a viabilidade das células em cerca de 80%. A variação dos restantes parâmetros parece não ter muita influência a nível da viabilidade celular. Os resultados in vivo não permitem concluir acerca do aumento da eficiência do tratamento pois os níveis de pressão in situ utilizados parecem ser nocivos ou para as partículas virais ou para as células – mais experiências serão necessárias para tirar conclusões in vivo.The phenomenon by which ultrasound may transiently alter the structure of the cellular membrane, and thus allowing enhanced uptake of low and high molecular weight molecules into the cell is defined as Sonoporation. In gene therapy, the main goal is to increase the delivery efficiency of exogenous nucleic acid to a site-specific target. For gene transfer using sonoporation, the biophysical effects involved include cavitation, radiation pressure, and microstreaming - the shear forces present near the microbubbles. The acoustic pressures required to destroy microbubbles lie in the diagnostic range, and if these are too high or last too long, undesirable levels of cell killing will occur, resulting in poor DNA transfer. There is the need to develop a new treatment for a soft tissue tumor defined as fibrosarcoma which is a malignant tumor that usually develops in the legs and whose treatment involves a wide excision, usually combined with radiation therapy. This project is a pilot study in which Focused Ultrasound and Microbubbles is added to a combined therapy including Melphalan, TNF-α and Vaccinia Virus to try to enhance the efficacy and reduce the toxicity of the treatment. The main goals of this pilot project are to study tumor virus distribution and then to quantify the number of viral particles in the tumors using appropriate assays (e.g. qPCR, Plaque Assay, Immunofluorescence). This involves in vitro experiments with BN175 rat sarcoma line, initially to test a combination therapy with the virus in the presence or absence of (i) focused ultrasound (ii) microbubble and (iii) focused ultrasound and microbubbles. The physical parameters to be optimised are peak rarefactional focal pressures, duty cycle, pulse repetition frequency, exposure duration and microbubble concentration. In vitro results suggest that once inertial cavitation starts, the viability of BN175 cells decreases and this effect is higher in the presence of microbubbles. In vivo experiments in Brown Norwegian rats should help to determine the effectiveness of the combined therapy using Focused Ultrasound in the presence of Microbubbles, Melphalan, TNF-α and Vaccinia Virus using the technique of Isolated Limb Perfusion but the results suggest that the use of Focused Ultrasound and Microbubbles might be killing the virus. Although, the results from qPCR analysis and viral plaque assays are not enough to confirm this theory and the histochemical analysis failed

Estilos de vida, qualidade de vida pessoal, motivação e sucesso académico: o caso da Universidade do Algarve

Dissertação mest., Psicologia, Universidade do Algarve, 200

Comunicação de Ciência - Porquê, como e para quem falar de ciência

Por que é que os seminários dos cientistas te parecem todos iguais? Quantas vezes assististe a apresentações sobre o que deveria ter sido um tema inspirador, para apenas seres embalado ao ritmo de um tom monocórdico letrado por jargão científico? E ser biólogo é ser criativo? Provavelmente não, será a resposta da maioria. Os biólogos são cientistas e, como tal, o importante é serem rigorosos, objectivos e analíticos. Afinal que importância pode ter a falta de entusiasmo, de clareza e de empatia a comunicar? Para a ciência, muita Para a sociedade também! É que embora os cientistas sejam considerados domínios de autoridade, a ciência e a tecnologia (C&T) são muitas vezes postas em causa, por exemplo em temas como a vacinação ou as alterações climáticas. Essa contestação reflecte o modo como a C&T são por vezes mal comunicadas na sociedade e por isso, não entendidas pelo público comum. Este workshop tem como objetivos: dar a conhecer várias abordagens para comunicar ciência a um público leigo e fornecer algumas ferramentas para a divulgação dos trabalhos de investigação, de forma a permitir uma melhor interação com os diferentes públicos-alvoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio

The influence of planning and response inhibition on cognitive functioning of Non-Psychotic unipolar depressed suicide attempters

Depression is one of the main risk factors for suicide. However, little is known about the intricate relationships among depressive symptomatology in unipolar depression, suicide risk, and the characteristics of executive dysfunction in depressed patients. We compared 20 non-psychotic unipolar depressed suicide attempters to 20 matching depressed non-attempters and to 20 healthy controls to further investigate the possible differences in neuropsychological performance. Depressed subjects were controlled for current suicidal ideation, and their neuropsychological profile was assessed using a range of measures of executive functioning, attention, verbal memory, processing speed, and psychomotor speed. Depressed groups were outperformed by healthy controls. Depressed attempters presented more cognitive impairment than depressed non-attempters on a simple Go/No-go response inhibition task and performed better than non-attempters on the Tower of London planning task. Depressed attempters were clearly distinguished by a deficit in response inhibition (Go/No-go commission errors). The normative planning performance (Tower of London extra moves) of the suicide attempters was unexpected, and this unanticipated finding calls for further research. Normative planning may indicate an increased risk of suicidal behavior.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

do processo de disfagia por acidente vascular cerebral à promoção da alimentação, intervenções do enfermeiro especialista de reabilitação

Na sociedade atual o Acidente Vascular Cerebral (AVC) surge como uma das principais causas de morte e de incapacidade, onde a disfagia é uma das principais alterações decorrente do AVC. Esta define-se como sendo a dificuldade ou impossibilidade de engolir e apresenta diversas complicações como: desnutrição, desidratação, hospitalização prolongada, complicações pulmonares por aspiração de saliva e/ou alimento e morte. A disfagia pode ser evidenciada pela presença dos seguintes sinais: tosse, regurgitação nasal, fala nasalizada, emagrecimento e acúmulo de resíduo na cavidade oral. O presente estudo tem como questão de investigação: quais as intervenções de enfermagem que o Enfermeiro Especialista em Enfermagem de Reabilitação (EEER) utiliza para promover a alimentação da pessoa com disfagia por Acidente Vascular Cerebral? E tem como objetivo compreender quais as intervenções por parte do EEER, à pessoa com disfagia decorrente de AVC, com vista à promoção da sua alimentação. Este é um estudo qualitativo com uma abordagem fenomenológica, onde foram colhidos dados de cinco participantes com recurso à realização de entrevistas semi-estruturadas, posteriormente, analisadas com recurso ao Método Fenomenológico de Investigação em Psicologia, de Giorgi e Sousa (2010). Os resultados do estudo evidenciam que a intervenção do EEER incute uma melhoria nos cuidados prestados através da realização de uma correta avaliação e do uso de técnicas promotoras da alimentação. No campo da avaliação destaca-se o uso de instrumentos, nomeadamente a escala GUSS, a escala de MASA e a escala adaptada de MASA. As técnicas descritas pelos participantes para promover a alimentação são: realização correta da higiene oral, alteração da consistência alimentar, técnica postural, realização de exercícios orofaciais, estimulação sensitiva e motora, estimulação térmica e tátil, massagem, reeducação funcional respiratória, aumento do número de deglutições e aplicação de manobras facilitadoras da deglutição

Net neutrality: o contexto global e o caso português

Em Portugal o ano de 2020 significou uma viragem na utilização da rede de Internet doméstica. Sem a ligação à Internet os utilizadores estariam privados de atividades como o teletrabalho e o ensino à distância, do acesso a serviços digitais de saúde e de lazer ou ainda no acesso a serviços governamentais. A problemática da neutralidade da Internet torna-se ainda mais premente neste contexto, na medida em que garante aos seus utilizadores uma Internet aberta, assegurando comunicações entre quaisquer utilizadores e o acesso a quaisquer aplicações ou serviços, sem discriminação. Mas a investigação existente sobre a neutralidade da Internet é bastante limitada e os principais desenvolvimentos no campo sociopolítico português são publicados em relatórios técnicos da ANACOM ou em documentos oficiais das organizações de interesse público. É neste contexto que surge este estudo, com o propósito de aprofundar o conhecimento atual sobre o estado da governança da neutralidade da Internet em Portugal. Para o efeito, num primeiro momento, debruça-se sobre o contexto político internacional norte-americano e europeu, de modo compreender, na sua plenitude, todos acontecimentos que marcaram o caso português da neutralidade da Internet. E, num segundo momento, com a utilização de uma metodologia mista, pretendeu-se: (i) na dimensão intensiva, com a aplicação de entrevistas semidiretivas, conhecer a posição das 3 associações da sociedade civil no debate da neutralidade da rede – a DECO; a D3 e a ISOC PT - e ainda comparar a sua posição atual com o compromisso futuro dos diferentes intervenientes sociopolíticos; e (ii) na dimensão extensiva, com a realização de inquérito por questionário online, analisar a perceção dos utilizadores sobre o estado da neutralidade da InternetThe year 2020 was a challenging year, pushing countries to reevaluate their primary and ordinary tasks. One of the most significant global changes was using the domestic Internet network as a power source for most, if not all, basic needs. Without their Internet connection, users wouldn't have access to essential activities such as working from home, online learning, entertainment, health, and other government services. The issue of net neutrality becomes even more pressing, as it guarantees its users an open Internet, ensuring communications between users and access to any applications or services, without discrimination. However, the existing research on net neutrality in Portugal is quite limited. Key developments occur within the Portuguese sociopolitical field, published explicitly in ANACOM technical reports and official documents by Portuguese non-profit organizations. The main goal of this study is to deepen and corroborate the current knowledge of the state of net neutrality in Portugal. Initially, this study will look at the North American and European international political context to fully understand all the events that have marked the Portuguese state of network neutrality. Furthermore, to understand the Portuguese civil society's perception, this study will apply two different research methods: (i) three direct interviews with three Portuguese organizations – DECO, D3, and ISOC PT – chosen because of their vital role in the public debate; and (ii) an online questionnaire survey for user’s perception on the state of net neutralit

A influência da eficácia da liderança percebida no desempenho da equipa de enfermagem em contextos hospitalares

Esta investigação estuda a influência da eficácia da liderança percebida no desempenho da equipa de enfermagem, em contextos hospitalares de Portugal, assim como o papel desempenhado pela partilha do conhecimento e pela eficácia das equipas nessa relação. A investigação segue uma abordagem quantitativa, num estudo descritivo, correlacional e transversal. A amostra é constituída por 139 respostas de enfermeiros que exercem funções em 2 unidades hospitalares Portuguesas: Unidade Local de Saúde da Guarda- Hospital Sousa Martins, E.P.E. e Centro Hospitalar e Universitário da Cova da Beira. Os dados foram recolhidos através da aplicação de um questionário desenvolvido para o efeito e organizado em 2 partes: i) variáveis sociodemográficas e ii) escalas de medição do tipo likert destinadas a avaliar a eficácia da liderança percebida pelos enfermeiros subordinados, o desempenho da equipa, a eficácia da equipa e a partilha de conhecimento. Os resultados mostram que o modelo proposto se ajusta bem aos dados recolhidos, permitindo assim confirmar que a partilha de conhecimento tem um efeito mediador parcial na influência da eficácia da liderança na eficácia das equipas de enfermagem e que em conjunto, a partilha de conhecimento e a eficácia das equipas de enfermagem têm um efeito indireto mediador na influência da eficácia da liderança no desempenho das equipas de enfermagem. O efeito indireto pode ser considerado como mediação total, visto que o modelo mostra a ausência de influência significativa da eficácia da liderança no desempenho das equipas de enfermagem. Esta investigação, permite assim realçar que a eficácia da liderança é parte essencial da gestão, pois influência de forma indireta o desempenho das equipas de trabalho.The present study deals with the influence of the perceived leadership effectiveness on the performance of nursing teams, in Portuguese hospitals’ contexts, as well as the role played by knowledge sharing and teams’ effectiveness in this relationship. The research follows a quantitative approach, through a descriptive, correlational and transversal study. The sample includes 139 responses from nurses who work in 2 Portuguese hospitals: Unidade Local de Saúde da Guarda - Hospital Sousa Martins, E.P.E. and Centro Hospitalar e Universitário da Cova da Beira. Data were collected through the application of a questionnaire developed for the purpose and organized into 2 sections: i) sociodemographic variables and ii) likert-type measurement scales designed to assess the effectiveness of leadership perceived by subordinate nurses, teams’ performance, teams’ effectiveness and knowledge sharing. Results show that the proposed model fits well with the data collected, thus confirming that knowledge sharing has a partial mediating effect on the influence of leadership effectiveness on the effectiveness of nursing teams and that, together, knowledge sharing and the effectiveness of nursing teams has an indirect mediating effect on the influence of leadership effectiveness on the performance of nursing teams. The indirect effect can be considered as total mediation, because the model shows the absence of a significant influence of leadership effectiveness on nursing teams’ performance. This research, thus, allows us to highlight that leadership effectiveness is a critical issue in management, because it indirectly influences the performance of work teams

Cuidar da pessoa com doença oncológica em situação paliativa : o significado atribuído à esperança pela equipa de enfermagem

Introdução: As pessoas com doença grave, incurável e progressiva vivenciam uma multiplicidade de problemas físicos, emocionais, sociais e espirituais. Assim, é importante compreender as emoções e sofrimento inerentes a todo o percurso de doença, por forma a garantir a preservação da dignidade e a promover a qualidade de vida à pessoa e sua família. O enfermeiro deve alicerçar a relação terapêutica na individualidade da pessoa e adaptá-la às peculiaridades do processo de doença, só deste modo os diagnósticos de enfermagem, planeamento e delineamento das intervenções serão realizados numa base sustentável. A esperança em cuidados paliativos relaciona-se com o bem-estar psicoespiritual, com o encontrar sentido na vida, com metas orientadas para o futuro e uma atitude e conduta de esperança. Os enfermeiros assumem um papel primário nos cuidados paliativos, pelo que se encontram numa posição estratégica para encorajar ou destruir a esperança da pessoa em fim de vida. Objetivos: Conhecer as significações da esperança no cuidar da pessoa com doença oncológica paliativa na perspetiva da equipa de enfermagem e compreender como os enfermeiros promovem a esperança junto da pessoa com doença oncológica em situação paliativa, a partir das suas significações sobre o conceito. Material e Métodos: A investigação é de natureza qualitativa, com uma abordagem exploratório-descritiva. A amostra populacional foi constituída através da técnica de amostragem intencional. Esta é constituída por 6 enfermeiros que trabalham num Hospital de Dia de uma Instituição de cariz privado. Como técnica de colheita de dados utilizou-se a entrevista semiestruturada. Para o tratamento dos dados recorreu-se à estatística descritiva/indutiva e à estatística analítica, utilizando a técnica da análise de conteúdo. Resultados: O significado atribuído à esperança pelos enfermeiros relaciona-se com os conceitos: viver o melhor possível, sentido na vida, qualidade de vida, acreditar e individualização dos cuidados. Os enfermeiros promovem a esperança através do controlo de sintomas, da satisfação das necessidades básicas, da valorização das conquistas, ao estabelecerem uma relação de ajuda e envolverem a família no processo de cuidados. Os enfermeiros identificaram como elementos facilitadores da esperança: a tipologia do serviço, a dinâmica do trabalho, o percurso profissional, a disponibilidade e o ambiente de trabalho. Como elementos inibidores, a falta de recursos, a rotinização dos cuidados, a delegação de tarefas, a ausência de reflexão e de registos. Conclusão: Os enfermeiros acreditam que a esperança é um elemento integrado e valorizado na prática dos cuidados de enfermagem, considerando-a como um elemento significativo dos cuidados. Foram sugeridas intervenções de enfermagem que promovem a esperança descritas nos modelos de esperança para a prática de cuidados paliativos presentes na literatura científica. Dos resultados obtidos identificou-se a importância do aprofundamento da esperança enquanto elemento fundamental no cuidar em enfermagem em qualquer etapa do ciclo vital, a partir da compreensão do conceito na perspetiva dos profissionais de saúde.Introduction: People with severe, incurable and progressive disease experience a multiplicity of physical, emotional, social and spiritual problems. Therefore it is important to understand the emotions and suffering inherent in the entire course of illness in order to ensure the preservation of dignity and to promote quality of life of the person and his family. Nurses should underpin the therapeutic relationship in the person’s individuality and adapt it to the peculiarities of the disease process, only this way the nursing diagnosis, the planning and the interventions will be conducted on a sustainable basis. Hope in palliative care is related to the psycho-spiritual well-being, with the finding meaning in life, with targets and goals for the future and a hopeful attitude and conduct. Nurses play a primary role in palliative care, so they are in a strategic position to encourage or destroy the hope of the person at the end of his life. Objectives: The aim is to know the meaning of hope in the palliative care of people with cancer disease from the perspective of the nursing team and understand how nurses promote hope alongside the person with oncological disease in palliative situation, from their meanings on the concept. Material and Methods: This study was based on a qualitative methodology with an exploratory and descriptive approach. The population sample was made using the intentional sample technique. It consists in six nurses, who work in a Day Hospital of a private institution. As a technique of data collection it was used the semistructured interview. For data treatment it was applied the descriptive/inductive statistics and the analytical statistics using the content analysis technique. Results: The meaning assigned to hope by the nurses is related with the following concepts: live the best possible, meaning of life, quality of life, believing and individualization of care. Nurses promote hope through the control of symptoms, satisfaction of basic needs, the appreciation of the achievements, establishing a helping relationship, engaging the family in the care process and help the person on his route and meaning. Nurses identify the enablers of hope as: the typology of the service, the dynamics of the job, the career paths, their availability and the good working environment. As inhibiting factors: lack of resources, the routinization of care, the delegation of tasks and the lack of reflection and records. Conclusions: Nurses believe that hope is an integrated and valued element in the practice of nursing and consider this as a significant element of care. With these results it was identified the importance of exploring hope as a fundamental element in the nursing care in all vital cycle, from the understanding of the concept from the perspective of health care professionals