The activity of mouse Cerberus like 2 during cardiogenesis - genetic and morphogenetic studies

Cardiogenesis is a delicate and complex process that requires the coordination of an intricate network of pathways and the different cell types. Therefore, understanding heart development at the morphogenetic level is an essential requirement to uncover the causes of congenital heart disease and to provide insight for disease therapies. Mouse Cerberus like 2 (Cerl2) has been defined as a Nodal antagonist in the node with an important role in the Left-Right (L/R) axis establishment, at the early embryonic development. As expected, Cerl2 knockout mice (Cerl2-/-) showed multiple laterality defects with associated cardiac failure. In order to identify the endogenous role of Cerl2 during heart formation independent of its described functions in the node, we accurately analyzed animals where laterality defects were not present. We thereby unravel the consequences of Cerl2 lossof- function in the heart, namely increased left ventricular thickness due to hyperplasia of cardiomyocytes and de-regulated expression of cardiac genes. Furthermore, the Cerl2 mutant neonates present impaired cardiac function. Once that the cardiac expression of Cerl2 is mostly observed in the left ventricle until around midgestration, this result suggest a specific regulatory role of Cerl2 during the formation of the left ventricular myoarchitecture. Here, we present two possible molecular mechanisms underlying the cardiac Cerl2 function, the regulation of Cerl2 antagonist in activation of the TGFßs/Nodal/Activin/Smad2 signaling identified by increased Smad2 phosphorilation in Cerl2-/- hearts and the negative feedback between Cerl2 and Wnt/ß-catenin signaling in heart formation. In this work and since embryonic stem cells derived from 129 mice strain is extensively used to produce targeted mutants, we also present echocardiographic reference values to progressive use of juveniles and young adult 129/Sv strain in cardiac studies. In addition, we investigate the cardiac physiology of the surviving Cerl2 mutants in 129/Sv background over time through a follow-up study using echocardiographic analysis. Our results revealed that Cerl2-/- mice are able to improve and maintain the diastolic and most of systolic cardiac physiologic parameters as analyzed until young adult age. Since Cerl2 is no longer expressed in the postnatal heart, we suggest that an intrinsic and compensatory mechanism of adaptation may be active for recovering the decreased cardiac function found in Cerl2 mutant neonates. Altogether, these data highlight the role of Cerl2 during embryonic heart development in mice. Furthermore, we also suggest that Cerl2-/- may be an interesting model to uncover the molecular, cellular and physiological mechanisms behind the improvement of the cardiac function, contributing to the development of therapeutic approaches to treat heart failures.Sendo o coração o primeiro órgão a ser formado, é também o primeiro a funcionar com o objectivo de suprir as necessidades do embrião vertebrado. No entanto, a morfogénese cardíaca é bastante complexa, e perturbações podem originar doenças cardíacas congénitas, sendo os defeitos com maior incidência à nascença. Com o objectivo de melhor compreender a intrincada base molecular que controla a formação e o desenvolvimento deste órgão e assim promover a união entre prevenção e tratamento, é de importância fundamental aprofundar os conhecimentos nesta área de investigação. Apesar das óbvias diferenças entre o humano e o ratinho, o coração nos dois modelos animais é constituído por quatro câmaras (dois átrios e dois ventrículos) e os respectivos funcionamentos são semelhante tendo contudo algumas ressalvas ao serem equiparados. Além disto, 99% dos genes no ratinho têm equivalentes em humanos, logo o ratinho é considerado um ótimo modelo para o estudo de doenças humanas. Durante o desenvolvimento, o coração recebe informação para se posicionar ao longo dos três eixos do corpo. É o terceiro eixo, o esquerdo-direito (E/D), que determina a direção de rotação do coração e que portanto influencia a sua morfologia final, como exemplo, ventrículo e átrio esquerdo posicionados no lado esquerdo do embrião. Embora já se saiba através de recentes estudos em peixe-zebra como o sinal assimétrico do eixo E/D direciona a rotação cardíaca, ainda é desconhecido a influência deste eixo no posicionamento dos outros órgãos viscerais. Nodal, membro da família de factores de crescimento TGF-ß, tem sido reconhecido como um elemento chave durante o estabelecimento do eixo E/D e do desenvolvimento do embrião sendo especialmente requerido para a formação da mesoderme. O membro da família Cerberus/Dan, mouse cerberus-like2 (Cerl2), é expresso assimetricamente no lado direito do nó em ratinhos e codifica a proteína que uma vez secretada é capaz de se ligar diretamente a Nodal. Dessa maneira, o antagonismo entre Cerl2 e Nodal é essencial para restringir assimetricamente a atividade do Nodal para o lado esquerdo do nó levando a indução da sua cascata de sinalização na placa lateral da mesoderme esquerda. Esta restrição assimétrica para o lado esquerdo do embrião vai determinar a orientação assimétrica dos órgãos. Em ratinhos knock-out para o gene Cerl2 (Cerl2-/-) foi demonstrado que o gene Nodal também pode ser expresso no lado direito do nó levando a indução da cascata de sinalização Nodal na placa lateral da mesoderme direita. Como consequência os ratinhos Cerl2-/- manifestam uma variedade de defeitos de lateralidade (DL) conhecidos como situs inversus, isomerismo e heterotaxia. Adicionalmente estão associadas aos DL malformações cardiovasculares, sendo as mais comuns rotação alterada do eixo cardíaco, defeitos no septo ventricular e atrial, bem como alterações na rotação e diferenciação das artérias, estas últimas conhecidas como transposição das grandes artérias, tronco arterioso comum, dupla saída do ventrículo direito e dupla via de saída do ventrículo esquerdo. Assim, estes fenótipos podem ser a causa de morte nos primeiros dias de vida dos animais Cerl2 mutantes. Adicionalmente, resultados preliminares revelaram um novo fenótipo nos Cerl2-/- recém-nascidos caracterizado pelo aumento da espessura das paredes do ventrículo esquerdo ao qual nestes animais não foram associados defeitos de lateralidade. De forma a caracterizar detalhadamente este fenótipo e identificar o papel do Cerl2 durante a formação do coração, procedeu-se à análise do fenótipo cardíaco em embriões e em ratinhos no começo da vida pós-natal 0 (P0). Com os dados apresentados neste estudo, demonstrou-se que o aumento da espessura do miocárdio no ventrículo esquerdo (VE) e no septo interventricular (SIV) em Cerl2 mutantes sem DL é causado pela hiperplasia dos cardiomiócitos no ventrículo esquerdo. Além disso, nos mutantes de Cerl2 o aumento da expressão relativa de ciclina D1 no VE foi detectada no estádio embrionário 13 (E13). Este resultado pode estar relacionado com a expressão específica de Cerl2 no VE, tal como detectada em animais controlo, indicando assim um possível papel regulatório do Cerl2 durante a formação do coração e mais especificamente, do ventrículo esquerdo. Além disso, os ratinhos Cerl2-/- apresentaram expressão alterada de genes cardíacos durante o estádio embrionário e nas primeiras horas após o nascimento, o que é incompatível com a função cardíaca normal também confirmada pela redução da função sistólica em ratinhos neonatais de Cerl2-/-. Para além de investigarmos o mecanismo celular responsável pelo aumento da massa ventricular esquerda, também sugerimos dois mecanismos moleculares pelos quais o Cerl2 pode estar envolvido. Sendo Cerl2 antagonista da via de sinalização TGFßs/Nodal/Activin/Smad2, em corações embrionários (E13) e neonatais de Cerl2-/- observou-se um aumento da fosforilação de Smad2 (pSMAD2). Estes resultados sugerem que a via de sinalização TGFßs/Nodal/Activin/Smad2 pode estar ativamente aumentada na ausência de Cerl2. Interessantemente, tem sido relatado que esta via é essencial para a regulação da cardiogénese uma vez que também desempenha um papel relevante como mediador na patogénese cardíaca em corações de ratinho adulto após lesão. A segunda hipótese tem como base dados recentes os quais reportam que a via de sinalização Wnt e Cerl2 estão interligadas no nó através de um feedback negativo, onde o mRNA do Cerl2 é regulado após a transcrição por Wnt3 levando à degradação de Cerl2 no lado esquerdo do nó e portanto estabelecendo a sua expressão de forma assimétrica. Em contrapartida, Cerl2 é capaz de inibir a auto-regulação da proteína Wnt3. Adicionalmente, também foi revelado que a via de sinalização Wnt/ß-catenin é essencial para estimular a proliferação de cardiomiócitos na camada compacta de ambos os ventrículos. Apesar de em nenhum estudo até agora ter sido demonstrada a relação entre Wnt/ß-catenin e Cerl2 no coração e de serem necessárias confirmações adicionais, sugerimos que a hiperplasia do VE encontrado em Cerl2-/- pode também ser devida ao aumento da via de sinalização Wnt/ßcatenin. Uma vez que as células estaminais embrionárias derivadas da estirpe 129 de ratinho colonizam eficientemente as linhas germinativas, esta linhagem celular tem sido utilizada com frequência para a produção de linhas de animais geneticamente modificados. Como diferentes fundos genéticos podem originar diferentes fenótipos, o estabelecimento de valores de referência para cada estirpe de ratinhos é uma ferramenta útil nos dias atuais. A ecocardiografia não-invasiva permite avaliar a função cardíaca e a morfometria ventricular esquerda e o seu uso tem crescido na última década. Dessa maneira, foram criados valores de referência para a estirpe 129/Sv de ratinhos juvenis (3 semanas) e adultos (8 semanas). Com o objectivo de analisar se os ratinhos Cerl2-/- continuam a manifestar um aumento da massa ventricular esquerda com a redução da função cardíaca, procedeu-se à monitorização, através de ecocardiografia, de ratinhos recém-nascidos até à fase de jovens adultos (P60). Uma parte significante dos mutantes Cerl2 morrem no primeiro dia de vida, na presença e na ausência de DL. Tem sido relatado que a presença de DL é incompatível com um longo tempo de vida e portanto é esperado que a grande maioria destes mutantes com DL não sobrevivam. Já nos mutantes de Cerl2 que morrem nas primeiras horas de vida e não apresentaram defeitos de lateralidade, foi detectada uma tendência para o aumento da massa ventricular esquerda a qual é indicativa de hipertrofia. Além disto este grupo revelou uma dramática redução da função cardíaca como foi demonstrado pela diminuição dos batimentos cardíacos por minuto e pela diminuição do pico da velocidade da artéria pulmonar. Curiosamente, os mutantes de Cerl2 que sobrevivem conseguem recuperar a sua função cardíaca como também demonstrado pela fração de ejeção, a fração de encurtamento e a fração de alteração das áreas (sistólica e diastólica) quando comparados com os animais controlo. Este resultado foi confirmado pela manutenção dos níveis de expressão dos indicadores de hipertrofia e stress (como por exemplo o Anp, Bnp e Ankrd1). Dessa maneira, concluiu-se que o primeiro dia de vida pós-natal é determinante para os mutantes que não apresentam DL. Contudo é desconhecido o(s) factor(es) que determina(m) a morte ou sobrevivência destes animais. Apesar da melhora na função cardíaca nos adultos de Cerl2-/-, o débito cardíaco obtido no ventrículo esquerdo quando normalizado pelo peso do corpo, revelou uma redução quando comparado com animais wild-type, indicando portanto que a recuperação da função sistólica não é completa. Curiosamente os ratinhos adultos Cerl2-/- quando comparados com os ratinhos controlo apresentaram diferentes padrões de dimensão nas paredes do VE, como exemplo afinamento da parede anterior e posterior. De acordo com a literatura tem sido sugerido que a alteração aeróbica regional do metabolismo cardíaco pode levar á uma diferença assimétrica na espessura das paredes dos ventrículos, sendo no entanto necessária uma investigação detalhada. Embora ainda seja desconhecido o mecanismo pelo qual os ratinhos Cerl2-/- conseguem adaptar-se a vida pós-natal, sugerimos que o estes ratinhos mutantes podem ser um modelo interessante para estudar os mecanismos moleculares, celulares e fisiológicos que estão por trás da restauração da função cardíaca. Portanto análises detalhadas neste modelo poderia ajudar a desenvolver abordagens terapêuticas para o tratamento de insuficiência cardíaca. Em conclusão, os resultados apresentados nesta tese proporcionam um conjunto importantes de novos dados relacionados com a cardigénese, durante e após a vida intrauterina, os quais revelam a importância de Cerl2 na regulação da formação do coração independentemente da sua bem conhecida função no estabelecimento do eixo E/D.Universidade do Algarve, Departamento de Ciências Biomédicas e Medicin

The activity of cerberus-like 2 during cardiogenesis, morphological and morphogenetics studies

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Um estudo acerca dos cursos de formação de professores de língua estrangeira e o paradigma contemporâneo

Este artigo descreve uma pesquisa que investigou três cursos de Licenciatura em Língua Estrangeira (espanhola, francesa e inglesa) em uma universidade federal do Brasil, quanto a se estão, de fato, preparando os professores para a prática docente em conformidade com os parâmetros teóricos contemporâneos. De cada curso, colaboraram três professoras em formação cursando o último semestre e uma professora formadora, perfazendo um total de 12 participantes. Foram usados questionários abertos com questões sobre o curso, as disciplinas e conhecimentos considerados necessários ao professor em formação. Os resultados sugerem que os cursos investigados têm sua base mais próxima do paradigma estruturalista que do paradigma comunicativo contemporâneo. As participações sugerem que a base teórica oferecida aos professores em formação não mostra ser completamente consistente com os fundamentos para o ensino de línguas comunicativo. Desta forma, identificam-se lacunas na estrutura dos cursos investigados as quais demandam correção para chegarmos a uma formação de professores de línguas que vá ao encontro de toda a produção teórica já disponível para essa tarefa. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTThe research here described investigated three Under-graduate Courses for Foreign Language Teacher Education (languages were Spanish, French and English) aiming to find out whether the courses are structured to educate teachers in accordance to the contemporary theoretical parameters for foreign language teachers education. We invited three prospective teachers taking the last semester of the course and one teacher educator for each course, making up a total of 12 participants. Open questionnaires were used, containing questions about the course, about some of the subjects and about knowledge of some basic elements considered central for teacher education. The results suggest that the three Under-graduate Courses for Foreign Language Teacher studied still present a strong influence of structuralism in contrast with the characteristics of the contemporary communicative paradigm for language teaching. The data collected suggest that the theoretical basis offered by the course is not completely coherent with the precepts for the Communicative Approach and for the communicative teaching. Therefore, a gap in the structure of the Under-graduate Courses for Foreign Language Teacher Education is clearly identified, which demands rapid action if we are to reach the level of Teacher Education aimed at by the vast theoretical basis available for that end

Do fogo e da justiça : Sandra Maria da Silva Andrade, movimentos de uma filha de Xangô na luta quilombola

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Sociais, Departamento de Antropologia, Programa de Pós-Graduação em Antropologia Social, 2017.Esta dissertação apresenta a trajetória de vida de Sandra Maria da Silva Andrade, quilombola mineira, liderança do movimento quilombola em sua cidade, no Estado de Minas Gerais e nacionalmente. Através de narrativas sobre a vida de Sandra e seu percurso dentro do movimento social, alguns temas relacionados aos direitos das comunidades quilombolas são abordados; também são descritos momentos das políticas nacionais, estaduais e regionais que possuem influência sobre a vida das comunidades quilombolas. O ponto de partida para a análise sempre é a vida de Sandra, no entanto, vários temas caros ao pensamento antropológico contemporâneo são dissertados a partir desta estratégia. Ao se aproximar das trilhas de movimento compostas por Sandra em sua caminhada na luta quilombola percebemos a diversidade e a complexidade de caminhos que se interagem e integram sua trajetória.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).This dissertation presents the life trajectory of Sandra Maria da Silva Andrade, member of an ethnic quilombola community and leader of the quilombola movement in her city and nationwide. Through narratives about Sandra's life and journey within social movement, raises questions about quilombola communities' rights, as well as issues regarding national, state and regional policies that influences its sovereignty. The analysis is based mainly on Sandra's experience, aided by the discussion of several topics dear to contemporary anthropological thinking. Our protagonist leads us on a journey through quilombolas' struggle and the complex paths that weave and integrate their trajectories

Reparação do dano moral: a função secundária da punição do agente ofensor

À Responsabilidade Civil resta a tarefa de amenizar as consequências do dano causado ao ofendido, que uma vez violado, jamais será universalmente restituído. O presente estudo tem por escopo apresentar um tema jurídico inserido na Responsabilidade Civil: o Dano Moral. Demonstrar-se-ão as finalidades que norteiam a reparação por dano moral, limitando-se as funções: compensatória, preventiva e punitiva. A hipótese a ser trabalhada é a utilização de indenizações com caráter punitivo espelhadas nos punitive damages do sistema da Common Law. Por fim, utilizando-se da abordagem dos critérios de valoração e fixação do dano moral o magistrado busca a decisão referente ao quantum indenizatório, peça determinante para o alcance da justiça e, consecutivamente, a paz social. Serão apresentados projetos de lei que possuem o intuito de exaurir as controvérsias que pairam sobre a função punitiva na quantificação do dano moral

Avaliação da qualidade microbiana de sabonetes comercializados em feiras de artesanato de Brasília

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde, 2013.Sabonetes artesanais são comuns em feiras populares de Brasília. O seu consumo tem se tornado cada vez maior devido à busca por produtos vendidos sob o apelo de marketing de produtos naturais e a suas características organolépticas atrativas. Apesar de a legislação exigir um responsável técnico para a manipulação de sabonetes, algumas vezes, a produção desses produtos de higiene é realizada por artesãos, que nem sempre estão familiarizados com os riscos inerentes à manipulação de produtos farmacêuticos. Por este motivo, esses produtos estão mais susceptíveis a sofrerem contaminação microbiana. A Farmacopeia Brasileira preconiza alguns ensaios a serem realizados para determinar a qualidade microbiana destes produtos, pela quantificação de microrganismos viáveis e determinação da presença de patógenos específicos. Os adjuvantes usados na formulação dos produtos de higiene para preservação da sua qualidade microbiana são os conservantes. Conservantes são um importante meio de limitar o crescimento microbiano em vários tipos de produtos farmacêuticos, porém, o número e a concentração de compostos químicos permitidos nesses produtos são limitados devido à sua toxicidade e ao seu potencial alergênico. Os conservantes mais utilizados são os parabenos, metildibromoglutaronitrila, fenoxietanol e imidazolidinil ureia. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade microbiológica de 15 sabonetes artesanais e identificar e quantificar alguns dos principais conservantes utilizados em produtos de higiene, através da determinação de microrganismos viáveis, pesquisa de patógenos específicos, avaliação do pH dos sabonetes e identificação e quantificação de alguns conservantes presentes por cromatografia líquida de alta eficiência. Os resultados sugerem que, entre os sabonetes analisados, todos possuíam contagem de bactérias mesófilas totais acima dos limites aceitos nas farmacopeias e 53,3% estavam com carga de bolores e leveduras acima dos limites permitidos. Apesar de nenhum sabonete indicar a presença de conservantes em sua composição, as concentrações de propilparabeno encontradas estavam maiores que as permitidas pela ANVISA e foram encontrados valores de pH que podem inativar os parabenos. Assim, apesar da legislação para controlar a manipulação de sabonetes artesanais, estes ainda são comercializados com precárias condições de qualidade microbiológica. ______________________________________________________________________________ ABSTRACTArtisanal soaps are common in popular fairs of Brasilia. Its consumption has been increased due to search for products sold under the marketing appeal of natural products and their attractive organoleptic characteristics. Although the legislation requires a technical manager for soaps production, sometimes the production of these hygiene products is performed by craftsmen, who are not properly familiar with the risks involved in the handling of pharmaceutical products. Thus, these products are more likely to have microbial contamination. The Brazilian Pharmacopoeia recommends some tests to be performed to determine the microbial quality of those cosmetic products, by quantification of viable microorganisms and determining the presence of specific pathogens. Preservatives are the adjuvants used in the hygiene products formulation to preserve their microbial quality. Preservatives are important to limit the microbial growth in various types of pharmaceutical products. However, the number and concentration of chemicals allowed to be used as preservative in these products is limited because of its toxicity and its allergenic potentials. The most commonly used preservatives are parabens, metildibromoglutaronitrila, phenoxyethanol and imidazolidinyl urea. Thus, the objective of this study was to evaluate the microbiological quality of 15 artisanal soaps and identify and quantify some of the main preservatives used in hygiene products, through the determination of viable microorganisms, search for specific pathogens, assessment of pH and identification and quantification of preservatives present in the samples by high performance liquid chromatography. The results suggest that among the soaps tested, all had total mesophilic bacteria counts above the limits accepted by the pharmacopoeias and 53.3% were above the permissible limits for yeasts and molds. Although no soap indicate the presence of preservatives in its composition, concentrations of propylparaben were found higher than those permitted by ANVISA. Furthermore, pH values found for the soaps were able to promote the inactivation of the parabens. Thus, despite legislation to control the manipulation of artisanal soaps, these are still marketed under precarious conditions of microbiological quality

Porque é que pais e mães fumadores fumam dentro de casa?

Este estudo pretende identificar os fatores que influenciam os pais fumadores a fumar ou não dentro de casa. Realizaram-se, por telefone, entrevistas semiestruturadas a 10 pais e 10 mães, de crianças do 4º ano de escolaridade, fumadores que fumavam em casa, e a 10 pais e 10 mães fumadores, mas que não o faziam em casa. A análise de conteúdo mostrou que a preocupação com a saúde dos filhos e o mau cheiro foram os principais motivos mencionados pelos progenitores para não fumarem no domicílio. A comodidade e as condições meteorológicas foram as principais razões dos progenitores para fumarem no domicílio. Os pais fumadores que não fumam em casa parecem ter maior consciência dos riscos de fumar no domicílio para a saúde dos filhos, enquanto que os pais que fumam no domicílio fazem-no essencialmente por comodismo e desconhecimento aparente das consequências negativas desse comportamento. Deverá ser prioridade da educação para a saúde melhorar o conhecimento dos pais sobre as consequências da exposição ao fumo passivo. É indispensável que os profissionais de saúde das várias especialidades se envolvam no tratamento da dependência tabágica, promovendo a cessação tabágica dos pais, sendo esta a via mais segura para garantir casas livres de fumo.This study aims to identify the factors influencing smoking parents to smoke or not to smoke at home. Semi-structured interviews were held by phone with parents of children in the 4th grade: 10 smoking fathers and 10 mothers who smoked at home, and 10 smoking fathers and 10 mothers who did not smoke at home. The content analysis revealed that concern about the health of children and the bad smell were the main reasons mentioned by parents not to smoke at home. The comfort and weather conditions were the main reported reasons to smoke at home. Smoking parents who smoke at home seem to have greater awareness of the risks of smoking indoors to the health of children while parents who smoke at home do it mainly for comfort and apparent ignorance of the negative consequences of that behavior. The improvement of parental knowledge about the consequences of exposure to secondhand smoke should be a priority of health education. It is essential that health professionals of different specialties are involved in the treatment of tobacco dependence, promoting smoking cessation among parents, which is the safest way to ensure the creation of smoke-free homes.CIEC - Centro de Investigação em Estudos da Criança, IE, UMinho (UI 317 da FCT), PortugalFundos Nacionais através da FCT (Fundação para a Ciência e a Tecnologia) e cofinanciado pelo Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional (FEDER) através do COMPETE 2020 – Programa Operacional Competitividade e Internacionalização (POCI) com a referência POCI-01-0145-FEDER-007562.info:eu-repo/semantics/publishedVersio