53 research outputs found

    Purification and characterization of two protein kinases acting on the aquaporin SoPIP2;1

    Get PDF
    AbstractAquaporins are water channel proteins that facilitate the movement of water and other small solutes across biological membranes. Plants usually have large aquaporin families, providing them with many ways to regulate the water transport. Some aquaporins are regulated post-translationally by phosphorylation. We have previously shown that the water channel activity of SoPIP2;1, an aquaporin in the plasma membrane of spinach leaves, was enhanced by phosphorylation at Ser115 and Ser274. These two serine residues are highly conserved in all plasma membrane aquaporins of the PIP2 subgroup. In this study we have purified and characterized two protein kinases phosphorylating Ser115 and Ser274 in SoPIP2;1. By anion exchange chromatography, the Ser115 kinase was purified from the soluble protein fraction isolated from spinach leaves. The Ca2+-dependent Ser274 kinase was purified by peptide affinity chromatography using plasma membranes isolated from spinach leaves. When characterized, the Ser115 kinase was Mg2+-dependent, Ca2+-independent and had a pH-optimum at 6.5. In accordance with previous studies using the oocyte expression system, site-directed mutagenesis and kinase and phosphatase inhibitors, the phosphorylation of Ser274, but not of Ser115, was increased in the presence of phosphatase inhibitors while kinase inhibitors decreased the phosphorylation of both Ser274 and Ser115. The molecular weight of the Ser274 kinase was approximately 50 kDa. The identification and characterization of these two protein kinases is an important step towards elucidating the signal transduction pathway for gating of the aquaporin SoPIP2;1

    Increasing gene dosage greatly enhances recombinant expression of aquaporins in Pichia pastoris

    Get PDF
    <p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>When performing functional and structural studies, large quantities of pure protein are desired. Most membrane proteins are however not abundantly expressed in their native tissues, which in general rules out purification from natural sources. Heterologous expression, especially of eukaryotic membrane proteins, has also proven to be challenging. The development of expression systems in insect cells and yeasts has resulted in an increase in successful overexpression of eukaryotic proteins. High yields of membrane protein from such hosts are however not guaranteed and several, to a large extent unexplored, factors may influence recombinant expression levels. In this report we have used four isoforms of aquaporins to systematically investigate parameters that may affect protein yield when overexpressing membrane proteins in the yeast <it>Pichia pastoris</it>.</p> <p>Results</p> <p>By comparing clones carrying a single gene copy, we show a remarkable variation in recombinant protein expression between isoforms and that the poor expression observed for one of the isoforms could only in part be explained by reduced transcript levels. Furthermore, we show that heterologous expression levels of all four aquaporin isoforms strongly respond to an increase in recombinant gene dosage, independent of the amount of protein expressed from a single gene copy. We also demonstrate that the increased expression does not appear to compromise the protein folding and the membrane localisation.</p> <p>Conclusions</p> <p>We report a convenient and robust method based on qPCR to determine recombinant gene dosage. The method is generic for all constructs based on the pPICZ vectors and offers an inexpensive, quick and reliable means of characterising recombinant <it>P. pastoris </it>clones. By using this method we show that: (1) heterologous expression of all aquaporins investigated respond strongly to an increase in recombinant gene dosage (2) expression from a single recombinant gene copy varies in an isoform dependent manner (3) the poor expression observed for AtSIP1;1 is mainly caused by posttranscriptional limitations. The protein folding and membrane localisation seems to be unaffected by increased expression levels. Thus a screen for elevated gene dosage can routinely be performed for identification of <it>P. pastoris </it>clones with high expression levels of aquaporins and other classes of membrane proteins.</p

    Att bygga broar. En mikroetnografisk studie av tvÄ kommuners organisatoriska lÀrmiljöer för elever med autism

    Get PDF
    Studiens syfte Ă€r att: Synliggöra tvĂ„ kommuners lĂ€rmiljöer för elever inom autismspektrat (AST) utan utvecklingsstörning efter lagförĂ€ndringen 2011 med fokus pĂ„ elevernas förutsĂ€ttningar till delaktighet, kommunikation och lĂ€rande. Studien utgĂ„r frĂ„n följande frĂ„gestĂ€llningar: o Vilka organisatoriska lĂ€rmiljöer har utarbetats för mĂ„lgruppen, elever med autism utan utvecklingsstörning? o Vilka möjligheter till delaktighet, kommunikation och lĂ€rande erbjuds eleverna? o Hur grundar kommunerna sina “organisatoriska” val av lĂ€rmiljöns utformning för studiens mĂ„lgrupp? Forskningsansats och metod Studien har en mikroetnografisk ansats. Den etnografiska forskningsansatsen ger studien redskap att försöka förstĂ„, beskriva, analysera och tolka sammanhang och processer i det dagliga arbetet (Nordevall, MöllĂ„s & Ahlberg, 2011) . Etnografisk forskning betyder i praktiken, beskrivningar av individer och dess aktiviteter för att försöka förstĂ„ utifrĂ„n sammanhanget (Aspers, 2013). I studie anvĂ€nds tvĂ„ olika metoder i insamlandet av data, vilket inom etnografisk forskning benĂ€mns triangulering. Metoder som anvĂ€nts Ă€r observation och intervju, vilka ger förutsĂ€ttningar att fĂ„ insyn i lĂ€randemiljöns pĂ„verkan pĂ„ elevers förutsĂ€ttningar till delaktighet, kommunikation och lĂ€rande. Metoden observation ger en gemensam grund/erfarenhetsbas som analyseras och ger underlag till utformandet av frĂ„gestĂ€llningar till intervju/samtal med personal och skolledare (Fangen, 2005). Resultat Studien visar att alla elever Ă€r rumsligt- socialt- och didaktiskt inkluderade utifrĂ„n sina förutsĂ€ttningar. Resultatet beskriver hur man pĂ„ skol-, grupp- och individnivĂ„ mĂ„ste arbeta utifrĂ„n ett helhetsperspektiv i en strĂ€van efter “en skola för alla”. Genom ett nĂ€ra lĂ€rarskap ökar förstĂ„elsen för individen sĂ„ att lĂ€rmiljön kan anpassas. Resultatet visar kommunens bristande ledningsförmĂ„ga att arbeta utifrĂ„n ett helhetsperspektiv, dĂ€r samverkan mellan nivĂ„erna kan öka förutsĂ€ttningarna för inkludering

    Att dokumentera vid systemutveckling - en arbetsuppgift sedd ur systemutvecklarens perspektiv

    Get PDF
    Software Engineering has been performed for at least four decades. During this time the role of documentation in the Software Process has been debated.The role and the importance of documentation have been discussed from the organizations point of view. To improve quality and make work more efficient methods and standards have been developed to manage the Software Process and documentation in particular.The objective of the study was to contribute with new knowledge about documentation work seen from the perspective of system developers. By studying the documentation work from the Behavioral Science point of view we will gain new knowledge that can open up for new approaches in the research area and widen the discussion about Software documentation. In this study we tried to answer two questions: How can documentation work be described as a work task? How does the system developer experience documentation work? The study was performed using Grounded Theory to initiate the collection of empirical data. Through individual half structured in-depth interviews and informal observations data was collected. Hackman and Oldham’s (1997)Model of Motivation was applied to present the result of the study. The result have shown that documentation work as a work task does not show the characteristics of meaningfulness,autonomy and feedback that the system developer need to be motivated by performing the task. The system developers experience the documentation work as less meaningful. They want to minimize the effort to perform the documentation work by standardization. The system developer’s knowledge of the result of their work is poor

    Olika verkligheter : En studie om förÀldrars uppfattning om genus

    No full text
    Syftet med uppsatsen Àr att förstÄ hur förÀldrar till barn i den yngre skolÄldern uppfattar genus. FörÀldrar reproducerar normer och genusförestÀllningar till barnen, barnens möte med skolvÀrlden innebÀr ett möte med de normer och genusförestÀllningar som finns representerade i skolan genom lÀrarna. Följande frÄgor belyses i studien: Hur uppfattar förÀldrarna sin genusmedvetenhet? Hur yttrar sig genusförestÀllningarna i skolan? Hur görs det genusskillnader enligt förÀldrarna för barn i skolan? Hur uppfattas förÀldrarnas genusmedvetenhet av pedagoger? Kvalitativa intervjuer har anvÀnts, förÀldrarna som medverkat i studien har sjÀlva valt att delta och har barn i samma skola. De begrepp och teorier som ligger till grund för analysen Àr normer, genus, habitus och genushabitus. Resultaten visade att förÀldrarna förklarar genus utifrÄn olika habitus. Genom att anvÀnda en feministiskpoststrukturalistisk syn pÄ förÀldrarnas förklaringar har studien kommit fram till att de normer som representeras i skolan Àven gÄr att tolka som reproducerande av ojÀmlika genusstrukturer. Studien visar hur förÀldrar reflekterar över skillnader utifrÄn genushabitus, men Àven utifrÄn könshabitus. Det har Àven framkommit att det finns normer som hÄller pÄ att förÀndras och svÄrigheterna med att genomföra en förÀndring

    To prevent and treat malnutrition in the health care : A literature study

    No full text
    Malnutrition Ă€r ett vĂ€lkĂ€nt problem i den patientrelaterade vĂ„rden bĂ„de i Europa och i resten av vĂ€rlden. Trots detta Ă€r malnutrition nĂ„got som fortfarande förekommer. Vad kan det bero pĂ„? Det Ă€r viktigt att man bedömer patientens nutritionsstatus rutinmĂ€ssigt för att kunna förebygga malnutrition. Effekterna av malnutrition kostar samhĂ€llet mycket pengar och orsakar mĂ€nskligt lidande. Syftet med denna studie var att belysa sjuksköterskans ansvar för att förebygga och behandla malnutrition. För att besvara syftet blev valet av metod en litteratur studie. Med hĂ€nsyn till vetenskaplig kvalitet granskades tio artiklar. Resultatet av denna studie visar att bedömning, Ă„tgĂ€rder, dokumentation och interaktion mellan sjuksköterska och patient Ă€r viktig i arbetet med att förebygga och behandla malnutrition. Slutsatsen visar att det Ă€r nödvĂ€ndigt för sjuksköterskorna att fĂ„ mer utbildning inom malnutrition för att kunna identifiera riskpatienter. Interaktionen mellan sjuksköterska och patient Ă€r ocksĂ„ en mycket viktig del och mĂ„ste fungera fullt ut.Malnutrition is a well known problem in the patient related care in Europe as well as in the rest of the world. Despite this is malnutrition something that still exists. What can that depend on? It is important to judge the patients nutrition status as a routine to be able to prevent malnutrition. The effects of malnutrition cost the community a lot of money and human suffering. The aim of this study was to see the nurse’s responsibility when it comes to prevent and treat malnutrition in his/her daily work. Our choice of method to answer this aim was a literature review. With regard to scientific quality we elected to review ten articles. The results of this study are showing that judging, preventing measures, documentation and interaction between the nurse and patient are important in the work of preventing and treating of malnutrition. The conclusion is that it’s necessary for the nurses to have more education in malnutrition to be able to identify risk patients. The interaction between the nurse and patient is also very important and has to work correctl

    Effekter av förÀldrastödsprogram pÄ förÀldrar och barn

    No full text
    SAMMANFATTNING Bakgrund: FörĂ€ldrar har en viktig roll i att frĂ€mja barns hĂ€lsa, och har som vĂ„rdnadshavare ett ansvar för barnets utveckling. FörĂ€ldraförmĂ„ga och relation till barnet Ă€r faktorer som pĂ„verkar utvecklingen. Positivt förĂ€ldraskap handlar om att skapa en god relation mellan förĂ€ldrar och barn genom att anvĂ€nda positiv förstĂ€rkning och beröm i uppfostran samt logiska och naturliga konsekvenser av olika beteenden. FörĂ€ldraskapsstil har betydelse för förekomst av beteendeproblem hos barn och förĂ€ldrars olika beteende och förĂ€ldrastrategier pĂ„verkar barnets sprĂ„k- och framtida utveckling. SamhĂ€llet har en viktig roll i att erbjuda förĂ€ldrastöd.  Syfte: Syftet var att belysa effekter av olika evidensbaserade förĂ€ldrastödsprogram till förĂ€ldrar och barn upp till skolĂ„lder. Metod: Studien genomfördes som en litteraturöversikt. Tjugofem artiklar med kvantitativ design RCT eller CRT granskades med kvalitetsmall frĂ„n Forsberg och Wengström (2015) och resultatet sammanstĂ€lldes till olika kategorier. Resultat: De ingĂ„ende programmen var frĂ€mst frĂ„n USA, det var tidiga interventioner i spĂ€dbarns- eller i förskoleĂ„lder och mestadels mammor deltog. Sex olika typer av kategorier identifierades i resultatet, tre om effekter pĂ„ förĂ€ldrar och tre pĂ„ barn. FörbĂ€ttringar sĂ„gs i förĂ€ldrarnas sprĂ„kbruk gentemot sina barn, i positiva förĂ€ldraskapsstrategier och förĂ€ldrarnas mĂ„ende samt i förbĂ€ttringar av barnens sprĂ„k, beteendeproblem och utveckling. Slutsats: FörĂ€ldrastöd i form av tidiga interventioner kan ge positiva effekter pĂ„ barns hĂ€lsa och utveckling. Studiens resultat genererar kunskap till distriktssköterskans preventiva arbete med förĂ€ldrar och barn som att stödja sprĂ„kutveckling, positiva uppfostringsstrategier och lyhördhet.ABSTRACT Background: Parents have an important role in promoting their child's health and as caregivers they have the responsibility for their child's development. The capability as a parent and the relationship with the child are factors impacting child development. Positive parenting means to create a good relationship between the parent and the child by using positive reinforcement and praise, and to use logical and natural consequences for different behaviors. The parenting style has an effect on the occurrence of a child's behavioral problems, and different parenting behaviors and strategies affect the child's language and future development. The society has an important role in offering parent support. Objective: The objective of this study was to investigate the effects of evidence-based parenting programs for parents of infants up to school age. Method: The study was performed as a literature review. Twenty-five articles with a quantitative RCT or CRT-design were examined regarding their quality using a template from Forsberg and Wengström (2015) and the results were analysed and divided into different categories. Results: The included programs were mainly from the US, all were early interventions for infants or preschoolers and mostly mothers attended. Six different categories were identified in the results, three categories about parents and three about children. Improvements were seen concerning parents' use of language towards their child, in positive parenting strategies, and parents' wellbeing, and in children's language production, problem behavior and development. Conclusion:  Parental support in the form of early interventions can have a positive effect on children's health and development.  The study generated new knowledge for district nurses’ preventive work with parents and children in regard to the support of language development, positive parenting strategies and parental sensitivity

    "Kolla tvÄ kvinnliga poliser"

    No full text
    Syftet med uppsatsen Ă€r att beskriva hur kvinnor inom polisen upplever sitt yrke. Inom polisyrket jobbar det ca 18 000 poliser varav 25 procent Ă€r kvinnor. Studien aktualiserar dels om kvinnliga poliser upplever eventuella könsskillnader, dels om de reflekterar över de rĂ„dande könsnormerna. Följande frĂ„gor belyses i studien: Vilka könsskillnader rĂ„der inom polisen? Hur synliggörs könsskillnaderna? Hur pĂ„verkar de rĂ„dande normerna yrkesutövandet? Kvalitativa intervjuer har anvĂ€nts, kvinnorna som medverkar i studien kommer frĂ„n tre olika arbetsplatser och Ă€r av olika Ă„ldrar och befattningar inom polisen. De begrepp och teorier som ligger till grund för analysen Ă€r normer, Yvonne Hirdmans genus teori, Beverly Skeggs teori om respektabilitet och hur omvĂ„rdnad reproduceras, samt forskaren Berit Åbergs forskning om hur mĂ€n och kvinnor inom polisen styrs in pĂ„ olika arbetsuppgifter. Resultaten visar att kvinnliga poliser i mĂ„nga avseenden jĂ€mförs med sina manliga kollegor. Dock har studien visat att det rĂ„der en acceptans rörande genusskillnader hos de kvinnliga poliserna vilket gör att de sjĂ€lva inte reflekterar över normerna Reproduktionen av den manliga normen fortlöper dĂ„ kvinnor inte ifrĂ„gasĂ€tter och synliggör de genusstrukturer som de möter
    • 

    corecore