Iterative capped assembly: rapid and scalable synthesis of repeat-module DNA such as TAL effectors from individual monomers

DNA built from modular repeats presents a challenge for gene synthesis. We present a solid surface-based sequential ligation approach, which we refer to as iterative capped assembly (ICA), that adds DNA repeat monomers individually to a growing chain while using hairpin ‘capping’ oligonucleotides to block incompletely extended chains, greatly increasing the frequency of full-length final products. Applying ICA to a model problem, construction of custom transcription activator-like effector nucleases (TALENs) for genome engineering, we demonstrate efficient synthesis of TALE DNA-binding domains up to 21 monomers long and their ligation into a nuclease-carrying backbone vector all within 3 h. We used ICA to synthesize 20 TALENs of varying DNA target site length and tested their ability to stimulate gene editing by a donor oligonucleotide in human cells. All the TALENS show activity, with the ones >15 monomers long tending to work best. Since ICA builds full-length constructs from individual monomers rather than large exhaustive libraries of pre-fabricated oligomers, it will be trivial to incorporate future modified TALE monomers with improved or expanded function or to synthesize other types of repeat-modular DNA where the diversity of possible monomers makes exhaustive oligomer libraries impractical

Stable Gene Targeting in Human Cells Using Single-Strand Oligonucleotides with Modified Bases

Recent advances allow multiplexed genome engineering in E. coli, employing easily designed oligonucleotides to edit multiple loci simultaneously. A similar technology in human cells would greatly expedite functional genomics, both by enhancing our ability to test how individual variants such as single nucleotide polymorphisms (SNPs) are related to specific phenotypes, and potentially allowing simultaneous mutation of multiple loci. However, oligo-mediated targeting of human cells is currently limited by low targeting efficiencies and low survival of modified cells. Using a HeLa-based EGFP-rescue reporter system we show that use of modified base analogs can increase targeting efficiency, in part by avoiding the mismatch repair machinery. We investigate the effects of oligonucleotide toxicity and find a strong correlation between the number of phosphorothioate bonds and toxicity. Stably EGFP-corrected cells were generated at a frequency of $\sim$0.05% with an optimized oligonucleotide design combining modified bases and reduced number of phosphorothioate bonds. We provide evidence from comparative RNA-seq analysis suggesting cellular immunity induced by the oligonucleotides might contribute to the low viability of oligo-corrected cells. Further optimization of this method should allow rapid and scalable genome engineering in human cells

One Peninsula, Many Spains: An Inquiry on Memory, Historiography, and the Legacy of The Spanish Civil War from 1930 to the Present

In this essay, I analyze the events of the Spanish Civil War and their ramifications through the lens of cultural memory and historiography. I argue that ideas of memory are crucial to how societies and individuals understand history and that the Spanish Civil War had a tremendous impact on the Spanish people and significantly affected the memory not only of witnesses of the conflict, but to their descendants. This essay utilizes primary and secondary sources to understand the function of memory and varied responses to the Spanish Civil War. The essay begins with a brief historical overview of the conflict and then analyzes various memoirs created by participants and witnesses to the Spanish Civil War. Afterwards, an examination of a variety of cultural productions that reflect on the conflict both during and after the war are scrutinized through the lens of cultural memory and historiography. Finally, a conclusion on how the tensions between memory occur in contemporary Spain and some ideas are presented on how to improve Spanish Civil War historiography and how to address the controversies that arise out of a plurality of understandings of the Spanish Civil War are discussed

Optimization of scarless human stem cell genome editing

Efficient strategies for precise genome editing in human-induced pluripotent cells (hiPSCs) will enable sophisticated genome engineering for research and clinical purposes. The development of programmable sequence-specific nucleases such as Transcription Activator-Like Effectors Nucleases (TALENs) and Cas9-gRNA allows genetic modifications to be made more efficiently at targeted sites of interest. However, many opportunities remain to optimize these tools and to enlarge their spheres of application. We present several improvements: First, we developed functional re-coded TALEs (reTALEs), which not only enable simple one-pot TALE synthesis but also allow TALE-based applications to be performed using lentiviral vectors. We then compared genome-editing efficiencies in hiPSCs mediated by 15 pairs of reTALENs and Cas9-gRNA targeting CCR5 and optimized ssODN design in conjunction with both methods for introducing specific mutations. We found Cas9-gRNA achieved 7–8× higher non-homologous end joining efficiencies (3%) than reTALENs (0.4%) and moderately superior homology-directed repair efficiencies (1.0 versus 0.6%) when combined with ssODN donors in hiPSCs. Using the optimal design, we demonstrated a streamlined process to generated seamlessly genome corrected hiPSCs within 3 weeks

ENTRE LA BÊTISE Y LA ABJEÇÃO: FATALIDAD Y REDENCIÓN EN HISTORIAS DE AMOR, DE RUBEM FONSECA

This work proposes the analysis and interpretation of elements like fatality and redemption, that constitute the seven stories of Historias de amor (Brazilian edition, 1997; Mexican edition, 2009), from writer Rubem Fonseca, using some concepts of Jacques Lacan’s psychoanalysis and Martin Heidegger’s philosophy. In this way, this essay explores how the characters from Historias de amor seem to despair, eroticize, fanatize, travel and live experiences to the limit precisely because the know (or sense) that at the center of every vital experience what appears, intermittently, is suffering.Este trabajo propone el análisis y la interpretación de elementos, como la fatalidad y la redención, que constituyen los siete cuentos de Historias de amor (edición brasileña, 1997; edición mexicana, 2009), del escritor Rubem Fonseca apoyándose en algunas nociones del psicoanálisis de Jacques Lacan y de la filosofía de Martin Heidegger. De esta forma, este ensayo explora cómo los personajes de Historias de amor parecen desesperarse, erotizarse, fanatizarse, viajar y tener experiencias límite justamente porque saben (o intuyen) que en el centro de toda experiencia vital lo que aparece, intermitentemente, es el sufrimiento.Este trabalho propõe a análise e interpretação de elementos, tais como fatalidade e resgate, que constituem as sete histórias de Historias de amor, do escritor Rubem Fonseca, baseadas em algumas noções de psicanálise. Jacques Lacan e a filosofia de Martin Heidegger. Dessa forma, este ensaio explora como os personagens em Love Stories parecem se desesperar, erotizar, fanatizar, viajar e ter experiências limítrofes precisamente porque sabem (ou intuem) que no centro de toda experiência de vida o que aparece, intermitentemente, está sofrendo

Otras modulaciones del yo: los Diarios de la edad del pavo, de Fabián Casas

Using the notions of autofiction theory, as well as other approaches, from poststructuralism to intimate diary theory, this essay proposes to examine the significant aspects of the intimate diary of Argentinian writer Fabián Casas (Buenos Aires, 1965), which covers from 1992 to 1997 and describes how a literary calling is followed, constantly threatened by the little things in every day life; the registering of the writing process of his first works, and the development of himself as an «autor», under the concept presented by Michel Foucault. Even though many of the topics of this book could be classified in a satisfactory way, the most important part from this Diarios de la edad del pavo, is the number and the quality of the reflections on the action of writing present in the diary itself. In strictly literary and paraliterary terms, this essay will demonstrate that those variations of the same “I” that Casas has used in his poetry and narrative are the contributions from his diary, coming together with the robust literary system of Latinamerican journal d’ écrivain, and coming very close to La tentación del fracaso, by Julio Ramón Ribeyro, or Los diarios de Emilio Renzi, by his fellow countryman Ricardo Piglia.Empleando de manera crítica las nociones de la teoría de la autoficción, y echando mano a otros enfoques, desde el postestructuralismo hasta la teoría del diario íntimo, este ensayo propone examinar aspectos significativos del diario íntimo del escritor argentino Fabián Casas (Buenos Aires, 1965), que abarca de 1992 a 1997; a saber: cómo se forma una vocación literaria, constantemente amenazada por las minucias de la vida cotidiana; el registro del progreso escritural de sus primeras obras; y la formación de sí mismo como «autor», bajo el concepto que Michel Foucault entregara del mismo. Aunque pueden tematizarse de manera provechosa varios temas aquí presentes, lo que importa, como tema nuclear y protéico de estos Diarios de la edad del pavo, es la notoria cantidad y calidad de reflexiones acerca del acto mismo de escribir el diario. En términos estrictamente literarios y paraliterarios, este ensayo demostrará que justo estas variaciones del mismo yo que Casas ha empleado en su poesía y narrativa es lo que su diario viene a aportar, incorporándose al robusto sistema literario de journal d’ écrivain latinoamericanos, ahí, muy cercano a La tentación del fracaso, de Julio Ramón Ribeyro, o Los diarios de Emilio Renzi, de su compatriota Ricardo Piglia

Evaluación del retraso de un trazador particionable por medio de planillas de cálculo para determinar la saturación residual de petróleo mediante el método de ensayo de trazador químico en pozo único

La saturación remanente de petróleo (o saturación residual, considerando la fracción inmóvil), es uno de los parámetros que determina el potencial productivo y el valor económico de un reservorio candidato a producir por recuperación secundaria o terciaria. Existen diferentes métodos de evaluar dicha saturación; de los cuales, la medición in-situ del valor de saturación residual de petróleo (Sor) mediante ensayos en pozo único con trazadores químicos – Single-Well Chemical Tracer Test – (SWCTT, por sus siglas en inglés), constituye un mejor enfoque para la caracterización, in-situ, de un reservorio y toma de decisiones acerca de su desarrollo y explotación, particularmente cuando se requiere seleccionar métodos de recuperación mejorada de petróleo – Enhanced Oil Recovery – (EOR, por sus siglas en inglés). Este trabajo se enfoca en evaluar el retraso que experimenta un trazador químico particionable en la fase hidrocarburo líquido respecto a un trazador químico no particionable en dicha fase, en su viaje a través de una roca saturada con agua y petróleo residual (inmóvil); parámetro requerido en los ensayos de pozo único para determinar la saturación residual de petróleo. Los datos utilizados fueron obtenidos a partir de muestreos y mediciones realizadas por el Grupo de Medios Porosos de la Universidad Nacional del Comahue (GMP-UNCo) como resultado de la realización de un ensayo en pozo único con trazadores químicos a escala de campo. La evaluación se llevó a cabo empleando planillas de cálculo, analizando e interpretando la concentración química de trazadores en función de los volúmenes acumulados producidos; y a partir del estudio de los mecanismos de transporte de los trazadores en el medio poroso y de los modelos matemáticos que se podrían ajustar a los registros provenientes del ensayo a escala de campo, se determinó el valor del factor de retraso.The remaining oil saturation (or residual saturation, considering the immobile fraction), is one of the parameters that determine the productive potential and economic value of a reservoir candidate to produce by secondary or tertiary recovery. There are different methods to evaluate such saturation; of which, the in-situ measurement of residual oil saturation (Sor) value by Single-Well Chemical Tracer Tests (SWCTT), provides a better approach for the in-situ characterization of a reservoir and decision making about its development and exploitation, particularly when enhanced oil recovery (EOR) methods need to be selected. This work focuses on evaluating the delay experienced by a partitioning chemical tracer in the liquid hydrocarbon phase relative to a non-partitioning chemical tracer in that phase, in its travel through a rock saturated with water and residual (immobile) oil; parameter required in single-well tests to determine the residual oil saturation. The data used were obtained from sampling and measurements carried out by the Porous Media Group of the Universidad Nacional del Comahue (GMP-UNCo) as a result of a single-well test with chemical tracers at field scale. The evaluation was carried out using spreadsheets, analyzing and interpreting the chemical concentration of tracers as a function of the accumulated volumes produced; and by means of mathematical adjustment calculations, the value of the delay factor was determined.Fil: De Los Rios, Jorge Adrian. Universidad Nacional del Comahue. Facultad de Ingeniería. Departamento de Geología y Petróleo; Argentina

Propuesta de redistribución del área de producción y almacén para aumentar la productividad de la empresa Beltex SAC – Trujillo, 2023

El estudio tuvo como objetivo determinar el impacto de la propuesta de redistribución en el área de producción y almacén sobre la productividad de la empresa Beltex SAC ubicada en la ciudad de Trujillo. La metodología empleada fue de tipo aplicada – cuantitativa con un diseño diagnóstico – propositivo. Para el recojo de la información se emplearon las técnicas de observación de campo, entrevista y análisis documental. Se realizó un diagnóstico de la situación actual de las áreas de producción y almacén, identificando varios problemas significativos. Se planteó utilizar herramientas de la Ingeniería Industrial como parte de la propuesta de redistribución en el área de producción aplicando los Métodos SLP y Guerchet y en el área de almacén, aplicando el Método ABC; con la finalidad de mejorar la productividad. Los resultados obtenidos fueron incremento en la productividad, obteniendo como datos que la productividad del área de producción pasó de 1.29 Soles/Polo a 1.68 Soles/polo y la productividad de costos del área del almacén pasó de 10.43 Soles/Atenciones a 7.55 Soles/Atenciones. Se concluyó que la redistribución empleando el Métodos Guerchet, el Método SLP y el Método ABC, impacta sobre la productividad de las áreas de producción y almacén mejorándolas, obteniendo resultados favorables para la empresa Beltex SAC

Plan de gestión de procesos constructivos en centros educativos para mejorar la productividad de una empresa usando herramientas digitales

La presente investigación titulada “Plan de gestión de procesos constructivos en centros educativos para mejorar la productividad de una empresa usando herramientas digitales”, cuyo problema consiste en la demora al concluir la construcción de centros educativos con infraestructura que brinde seguridad a los estudiantes en nuestro país. Es por eso que para la presente investigación se formuló como objetivo principal mejorar la productividad de una empresa constructora, mediante un plan de gestión de procesos constructivos en obras de concreto, mampostería e instalaciones técnicas. Con el propósito de disminuir los tiempos de ejecución, aumentar la precisión en la cuantificación de materiales y reducir los tiempos de respuesta para los requerimientos de información para instituciones educativas. Esto mediante la identificación de actividades críticas, el aprovechamiento de metrados digitales y el empleo de plataformas colaborativas. Resultando en la disminución de 28.5% en tiempo de ejecución para las obras de concreto; en adición, para las obras de mampostería se aumentó la precisión logrando una diferencia promedio de 38.75% en la cuantificación de materiales; y finalmente obteniendo una disminución promedio de 3.43 días en tiempo de respuesta de requerimiento de información; para los tres casos se usan sus respectivos planes de gestión de procesos constructivos. Por último, se resalta que, de no ser solucionado este problema, los afectados principales vienen siendo los estudiantes, no recibiendo las clases necesarias para su progreso académico

Benefits of an early clinical approach in patients with open-angle glaucoma

El glaucoma de ángulo abierto es una afectación ocular más común y más prevalente en el mundo, por lo general esta enfermedad afecta a personas mayores de 40 años en un 90% de la población. El glaucoma se da cuando la presión intraocular se ve elevada debido a que el conducto se obstruye y el líquido no se puede drenar de manera normal. Este tipo de neuropatía óptica glaucomatosa es muy silenciosa y muchas de las veces no presenta ningún signo o síntoma que alerte a los pacientes, es por esto que es de suma importancia reconocer esta patología ocular en estadios tempranos, mediante un buen diagnóstico acompañado de una buena exploración ocular, con la finalidad de evitar complicaciones, como la pérdida gradual de la vista del lado que se presente la afectación, ya que es una de las principales complicaciones de este tipo de glaucoma. Para esto vamos se va a explicar la importancia del beneficio del manejo clínico temprano del glaucoma de ángulo abierto. Para esto se realizará un estudio no experimental, de tipo narrativo de revisión bibliográfica. Es importante el correcto manejo clínico de los pacientes que padecen de esta oftalmopatía, ya que de esta manera será menos complicado tratarlo de manera temprana, sin que esta evolucione y pueda generar o traer consigo misma múltiples afectaciones, que a la final va terminar deteriorando la vista del paciente y el estilo de vida como tal. Es por esto que es de gran importancia poder diagnosticar de manera oportuna y temprana este tipo de afectación ocular.Open-angle glaucoma is the most common and prevalent ocular affectation in the world, this disease generally affects people over 40 years of age in 90% of the population. Glaucoma occurs when intraocular pressure is elevated because the duct becomes blocked and fluid cannot drain normally. This type of glaucomatous optic neuropathy is very silent and often does not present any sign or symptom that alerts patients, which is why it is extremely important to recognize this ocular pathology in its early stages, through a good diagnosis accompanied by a good ocular examination, in order to avoid complications, such as the gradual loss of sight on the side that is affected, since it is one of the main complications of this type of glaucoma. For this we are going to explain the importance of the benefit of early clinical management of open-angle glaucoma. For this, a non- experimental study will be carried out, of a narrative type of bibliographic review. The correct clinical management of patients suffering from this ophthalmopathy is important, since in this way it will be less complicated to treat it early, without it evolving and can generate or bring with it multiple affectations, which in the end will end up deteriorating the view of the patient and lifestyle as such. This is why it is of great importance to be able to diagnose this type of ocular involvement in a timely and early manner