Isolation and Identification of Secondary Metabolites from Halophytic Helianthustuberosus Tuber-Derived Fungus

盐生植物菊芋(Helianthus tuberosus)是一种新型经济作物,特殊生境可能会使其内生真菌产生特殊的次生代谢产物,如结构新颖或活性显著的化合物.为研究这种耐盐植物内生真菌的次生代谢产物以及植物宿主和内生真菌之间可能存在的关系,本实验室从耐盐菊芋块茎中分离纯化出10株内生真菌,对这10株内生真菌进行抗卤虫活性筛选,初步筛选出1株抗卤虫活性良好的菌株Mucor sp.ht-7,规模发酵后通过提取分离技术得到7个化合物,用波谱手段鉴定了7个化合物的结构,对这株内生真菌和宿主次生代谢产物之间的关系进行分析探讨,并对化合物生物活性加以分析

中国河南两株庚型肝炎病毒(HGV)NS5区部分cDNA的克隆与序列分析

通过逆转录－聚合酶链反应从我国河南省２例重叠感染ＨＣＶ或ＨＢＶ／ＨＤＶ的献血员中，分离到ＨＧＶＮＳ５区的部分ｃＤＮＡ，对其进行序列分析比较，结果表明：河南株ＨＧＶＮＳ５区核苷酸与两株中国ＨＧＶ株的同源性（＞９１．９％）高于国外代表株（８８．５％－９０．６％），但由核苷酸推导的氨基酸的同源性都无明显的地区性区别。ＨＧＶＮＳ５区氨基酸序列较保守（同源性＞９１％），缺乏明显高变区。中国４株ＨＧＶ在７３８４位发生了由Ｃ→Ｔ的变异，从而导致一个共同的保守位点的产生（由Ｆ→Ａ）。重叠感染其他肝炎病毒时，河南株ＨＧＶＮＳ５基因结构并无特异性改

Identification of hepatitis C or/and G virus RNA in one tube by reverse transcription nested polymerase chain reaction

目的庚型肝炎病毒（HgV）与丙型肝炎病毒（HCV）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高，本研究旨在建立一种同时检测HgV与HCV感染的方法。方法根据HCV与HgV的基因序列分别选取5’-uTr（HCV）与nS3（HgV）的两套引物，在同一管内进行逆转录-巢式聚合酶链反应，并初步应用于153例标本。结果该方法能同时检出HgV与HCV感染，扩增片段大小与设计相符。结论该方法简便特异，适用于临床检测Hepatitis C and G viruses belong to the flaviviridae family.They have similar modes of transmission.The dual infection of HGV and HCV were reported.A simultaneous detection for HCV or/and HGV was established by reverse transcription nested polymerase chain reaction(RT-nested PCR).The primers were derived from the 5'non-coding region of HCV and NS3 region of HGV ,and the length of the PCR product was between 170bp and 300bp.RT-nested PCR can be finished in one test tube and HGV and /or HCV can be detected simultaneously in one RT-nest PCR.153 samples were detected by his method.Our results showed that the established assay is useful for screening and identification of HCV or/and HGV RNA.This method is simple and specific practicable.国家九五课

戊型肝炎病毒细胞吸附模型的建立及病毒吸附区域初步研究

E.coli中表达的HEV衣壳蛋白片段P239(aa368~606)形成的类病毒颗粒与戊肝患者恢复期血清及中和单抗具有良好的反应性,较好地模拟了天然HEV病毒颗粒的表面空间结构。利用P239吸附HepG2细胞的模型来模拟HEV对宿主细胞的吸附,多株中和单抗对吸附的阻断验证了吸附的特异性。P239与多株传代细胞系的吸附结果则表明了这种特异性吸附的细胞选择性。对阻断P239吸附的线性单抗进行定位,初步确定了P239与细胞相互作用的区域:ORF2上的aa423~443很可能和病毒上的细胞膜受体结合部位非常靠近,或可能直接参与构成了病毒与细胞特异性识别的表位。此本研究为进一步研究HEV与宿主细胞的相互作用提供一定的线索

戊型肝炎病毒ORF1多聚蛋白的不同功能域在细胞内的定位

为了探讨戊型肝炎病毒多聚蛋白ORF1的多个功能域在宿主细胞中的表达和定位情况,我们首先将psk-HEV重组载体上的ORF1各功能域的编码序列克隆到绿色荧光蛋白载体pcDNA3.1-GFP上,构建成融合表达的重组质粒,并测序和酶切鉴定其构建成功。再通过Western-Blot验证各融合蛋白在细胞中正确表达,并用激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白在细胞内的分布和定位。在Huh7细胞中,RdRp蛋白主要分布于细胞核内,HEL蛋白以囊泡状分布于细胞核周,MET蛋白以颗粒状存在于细胞核和细胞质中,PLP蛋白呈极性分布于细胞核周,X蛋白在细胞核和细胞质中均存在。各融合蛋白在细胞中的不同定位印证了对这些蛋白质的功能预测和体外研究结果,这为进一步研究HEV不同蛋白功能提供了支持

Grp78/Bip介导戊型肝炎病毒衣壳蛋白对宿主细胞的吸附

目的探讨Grp78/Bip在戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白进入宿主细胞过程中的作用。方法采用pull-down和免疫共沉淀技术进一步验证p239与Grp78/Bip的相互作用;采用激光共聚焦显微镜技术检测p239与细胞膜表面Grp78/Bip共定位情况;采用原核表达纯化的Grp78/Bip蛋白封闭p239的Grp78/Bip结合位点,检测其阻断p239吸附细胞的效果。结果p239与Grp78/Bip可以直接结合,而且这种结合是可逆的生理性结合;p239与Grp78/Bip在细胞膜上存在部分共定位;Grp78/Bip能部分阻断p239对肝细胞的吸附。结论Grp78/Bip参与并介导HEV衣壳蛋白对宿主细胞的吸附

戊型肝炎病毒衣壳蛋白结合CYP 2A6并降低其底物催化能力

肝炎病毒的感染常常导致人体肝脏代谢能力变化,研究表明甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus,HAV)、乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)和丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)的感染都会影响肝细胞对药物的代谢能力。在本研究中,通过酵母双杂交系统在人肝cDNA文库中筛选与戊型肝炎病毒重组衣壳蛋白E2结合的蛋白,发现了与细胞色素P450 2A6(CYP2A6)部分片段高度同源的蛋白序列。通过pull-down、免疫共沉淀以及特异性底物催化反应评价等方法进一步证实了CYP2A6与重组衣壳蛋白E2、p239间的相互作用,并发现与p239结合可以降低CYP2A6对其特异性底物香豆素的催化能力。上述结果提示CYP2A6可能在戊肝病毒入侵细胞后的细胞病变过程中起作用

重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白p239特异性吸附、侵入HepG2细胞并阻断野病毒对肝细胞的感染

By using Western blot and immunofluorescence assays,the recombinant HEV capsid protein p239 was found specifically attached to the HepG2 cell surface and entered to the cytoplasm with the increase of incubation temperature.Pre-mixture of wild-type HEV with p239 blocked the infectivity of the virus on primary cultured human hepatocytes and HepG2 cells,indicating that p239 and HEV competed the same targeting site on these cells.These data provide evidence that p239 has a similar cell surface structure with wild-type HEV

抗戊型肝炎病毒单克隆抗体识别表位的初步研究

通过Western blot、体外捕获PCR、ELISA阻断实验及合成的多肽库等方法,对23株抗戊型肝炎病毒(HEV)单克隆抗体(单抗)识别HEV ORF2表位的作用进行系统研究。结果显示,7株线性单抗识别表位都位于ORF2 aa408~458之间,16株构象型单抗识别表位都定位于ORF2 aa459~606之间,大部分构象型单抗识别表位都在天然病毒表面。对这些单抗识别表位系统地了解将为HEV疫苗、诊断、病毒受体和病毒感染机制等方面的研究提供重要工具