Effect of Protocatechuik Acid on Tyrosinase Acitivity and Expression of Melanogenesis Related Proteins in Mice Melanoma B16 Cell

酪氨酸酶（EC1.14.18.1，Tyrosinase）是合成黑色素的关键酶，酪氨酸酶抑制剂一直是研究的热点。目前文献报道的抑制剂种类繁多，但商品化的抑制剂相对较少。如何有效地对这些抑制剂进行进一步研究，研制出安全、高效的抑制剂，是应用研究的重点。 相对于传统的化学测定方法而言，细胞学效应的研究方法往往难以精确定量。本论文以小鼠B16细胞为研究材料，针对酪氨酸酶抑制剂对B16细胞的生物学效应，对检测方法进行了研究、优化和验证。包括：细胞培养、收集、裂解；细胞增殖率测定（MTT法）；细胞粗提酶液的制备（液氮冻融法）；酪氨酸酶活力测定（酶标板法）；酪氨酸酶及黑素形成相关蛋白TRP-1、TRP-2...Tyrosinase (EC.1.14.18.1) is the key enzyme in melanogenesis. The inhibitors of tyrosinase have always been a hot spot these years. Though many kinds of tyrosinase inhibitor reported, fewer have been commercially used. It is important to develop effective and safe inhibitors. Bioeffect research is more difficult to give accurate results, compared with traditional chemical method. In this paper, w...学位：理学硕士院系专业：生命科学学院生物学系_生物化学与分子生物学学号：K20042601

缩氨基硫脲化合物的合成及对菜青虫酚氧化酶抑制作用研究

菜青虫是危害农作物的主要害虫,酚氧化酶在昆虫的生长发育过程中起着重要的调节作用,高效的酚氧化酶抑制剂对于发展新型"环境友好"杀虫剂有着重要的意义.设计合成了4种缩氨基硫脲类化合物,采用红外光谱、质谱和核磁共振谱对其进行结构鉴定,进一步研究了它们对菜青虫酚氧化酶的抑制作用,结果表明,4种化合物均有显著的抑制作用,其半抑制率IC50分别为2.88,0.93,3.60和0.22μmol/L,有可能进一步开发成为以酚氧化酶为靶点的新型生物农药.同时,为基于缩氨基硫脲母核的酚氧化酶抑制剂的设计提供了数据基础

变性剂对重组牛肠激酶活性的影响

肠激酶(EK,EC 3.4.21.9)是一种在基因工程产品中广泛应用的工具酶.以小分子荧光物质Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β-萘胺为底物,采用荧光跟踪法研究了变性剂盐酸胍、硫脲、尿素对重组牛肠激酶(rEK)活力的影响及抑制动力学.结果表明:盐酸胍、硫脲、尿素均对该酶的活性有较强的抑制作用,它们对该酶的半抑制浓度(IC50)分别为0.025,0.080和0.750 mol/L.研究的3种变性剂对该酶的抑制均显示可逆抑制机理;抑制类型也均为竞争性类型,测定它们对酶的抑制常数KI分别为0.015,0.060和0.553 mol/L

效应物对牛肠激酶活性的影响

肠激酶(EK,EC3.4.21.9)是一种在基因工程产品中广泛应用的工具酶.以小分子荧光物质甘氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-β-萘胺(Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β-naphthylamide,GD4K-β-naphthylamide)为底物,采用荧光跟踪法研究了不同氨基酸、几种常用有机溶剂、EDTA、DTT等对牛肠激酶(BEK)活力的影响.结果表明:L-赖氨酸(L-Lys)、丙酮、EDTA、DTT对该酶的活性有较强的抑制作用,IC50分别约为25,50,50和120mmol/L.进一步研究了L-Lys与丙酮对BEK活力的抑制机理以及抑制类型,结果表明:L-Lys对该酶的抑制机理为可逆抑制,其抑制类型为竞争型抑制类型,其抑制常数KI为12.02mmol/L.丙酮对BEK的抑制类型表现为不可逆抑制

亚硫酸氢钠在马铃薯切片过程中防褐变作用机理的研究

多酚氧化酶(PPO)是蔬果酶促褐变的关键酶,抑制该酶活性是防止蔬果褐变的有效措施.在实验中发现NaHSO3对马铃薯PPO具有显著的抑制作用及在马铃薯切片护色中具有防褐变功能.实验结果表明:马铃薯PPO催化L-多巴形成的褐变物质在475 nm波长处有特征性的吸收峰,并且该吸收峰随着NaHSO3浓度的增加明显降低.NaHSO3的抑制作用表现为不可逆效应,既可以延长酶促反应的迟滞时间,也降低了稳态的酶活力.当NaHSO3浓度增至0.12 mmol/L时,酶促反应的迟滞时间从0延长至56 s,稳态的酶活力下降了35.5%.在马铃薯切片保鲜实验中,对照组在第3天褐变指数达到2,第6天已经完全褐变,而50 mmol/L NaHSO3处理的实验组在第6天褐变指数仅为0.6,有效遏制了马铃薯切片的酶促褐变,实验显示,NaHSO3通过抑制马铃薯PPO活力实现防褐变的效应

4-氨基苯甲酸对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用机理研究

报道了4-氨基苯甲酸(4-aminobenzoic acid)对蘑菇酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的影响和抑制效应.结果表明,4-氨基苯甲酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用.导致单酚酶活力和二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为0.35和0.30 mmol/L.4-氨基苯甲酸对单酚酶的迟滞时间有明显的延长效应,1.0 mmol/L可使单酚酶的迟滞时间从30.5 s延长到155.1 s,增加了4.4倍.4-氨基苯甲酸对二酚酶的抑制作用表现为混合型可逆抑制作用,抑制常数(KI和KIS)分别为0.259和1.46 mmol/L

巴戟天多糖的分离与纯化新方法

以巴戟天(Morinda officinalisHow)为原料,运用多种理化方法,提取纯化巴戟天粗多糖,经红外吸收光谱比较和鉴定确认提取物中有多糖特征吸收.采用苯酚—硫酸法测定多糖含量,以多糖的纯度和提取率为主要指标,对提取方法进行优化.结果表明,用乙醇-水提取法进行提取,用Sevag法除蛋白,氯化十六烷基吡啶(CPC)结合醇沉法进行纯化.正交实验结果表明提取纯化巴戟多糖最隹条件是乙醇浓度为85%,CPC浓度为0.4%,粗多糖浓度为10%的条件下,纯化多糖的纯度为89.7%,多糖的提取率为10.2%

Effects of Some Metal Ions on the Activity of Polyphenol Oxidase from Potato

以马铃薯多酚氧化酶为对象,研究金属离子对该酶活性的影响.实验结果表明,lI+、k+、bA2+和Mg2+对酶活力几乎没有影响,CA2+和nA+对酶活力有微弱的抑制作用,Cu2+则表现出较强烈的抑制作用,其IC50为0.248 MMOl/l.Al3+、fE3+、Cd2+、CO2+、Mn2+和zn2+则对马铃薯多酚氧化酶有不同程度的激活作用.本研究为探讨多酚氧化酶的催化活性和催化机理提供理论基础.In this paper,we studied the effects of some metal ions on the activity of polyphenol oxidase purified from potato.The results showed that Li+,K+,Ba2+ and Mg2+ had no effects on the enzyme activity.Ca2+ and Na+ showed a slight inhibition.Cu2+ could strongly inhibit the enzyme and the IC50 value was estimated to be 0.248 mmol/L.Al3+,Fe3+,Cd2+,Co2+,Mn2+ and Zn2+ activated the activity of polyphenol oxidase.This paper laid the foundation for the studies of the enzyme activity,catalytic mechanism of polyphenol oxidase.国家自然科学基金(30570408);福建省重点科技项目(2007N0051

Inhibition Effect of Protocatechuik Acid on Tyrosinase Acitivity and Melanin Content in Mouse Melanoma B16 Cell

酪氨酸酶是生物体内黑色素合成的关键酶,其抑制剂有着广泛的应用前景.从天然药物的有效成分中筛选安全的酶抑制剂具有重要意义.以小鼠黑色素瘤b16细胞为模型,研究了天然药物有效成分原儿茶酸对黑色素生成和酪氨酸酶活力的影响.实验结果显示:原儿茶酸可显著降低细胞的黑色素含量,浓度为10μMOl/l时使黑色素含量降低60%.进一步研究发现,原儿茶酸对小鼠黑色素瘤b16细胞粗提取和共培养体系中的酪氨酸酶均有较强的抑制作用.对粗提酪氨酸酶的活力半抑制浓度(IC50)约为160μMOl/l,与共培养体系中酪氨酸酶活力的抑制、抑制剂浓度和作用时间有关,10μMOl/l作用54H可使酪氨酸酶活力下降88%.本研究为原儿茶酸作为酪氨酸酶抑制剂的开发应用奠定了基础.Tyrosinase(EC 1.14.18.1)plays an important role in melanogenesis,thus tyrosinase inhibitors have multiple potential applications.Screening safe inhibitors from natural herbal medicines is of important significances.In this study,the inhibitory effect of protocatechuik acid,an activite ingredient of Chinese traditional Medicinces,on melanin content and tyrosinase activity from mouse melanoma cell(B16cell)were studied.The results showed that protocatechuik acid can decrease 60% of melanin content in mouse B16cell.Further research demonstrated that protocatechuik acid has significant inhibitory effect on crude tyrosinase from both mouse B16cell and co-culture system.It can significantly decrease tyrosinase activity.The IC50of protocatechuik acid on crude tyrosinase is about 160μmol/L.The inhibition effects were related with time of duration and concentration.The inhibition rate was about 88%after treated with 10μmol/L protocatechuik acid for 54h.The study provided a fundamental framework for the research and application of protocatechuik acid as tyrosinase inhibitor.国家自然科学基金项目(31071611); 福建省科技计划项目(2010N5013

L-半胱氨酸作为化妆品美白添加剂的作用机理

酪氨酸酶(EC 1.14.18.1)是黑色素形成的关键酶,其抑制剂的研究是当前美白添加剂研究的热点.研究了L-半胱氨酸(L-Cys)对蘑菇酪氨酸酶和小鼠B16黑色素瘤细胞粗提的酪氨酸酶的抑制效应,实验结果表明,L-Cys对2种来源的酪氨酸酶有较强的抑制作用,其半效抑制浓度分别为1.75,15μmol/L.对小鼠B16黑色素瘤细胞粗提的酪氨酸酶的抑制主要表现为显著延长酶促反应的迟滞时间,同时显著降低酶的活力.进一步对L-Cys在细胞毒性方面进行了研究,结果表明,在200μmol/L浓度下,L-Cys对小鼠黑素瘤细胞B16的生长未显示出明显影响,对细胞状态、代谢MTT的能力、细胞增殖率等均无影响,无明显细胞毒性,是一种有潜力的增白剂,为L-Cys作为美白添加剂提供了依据