Studies on the Properties and the Activity Regulation of N-Acetyl-β-D-glucosaminidase from Green Crab (Scylla serrata)

以锯缘青蟹（Scyllaserrata）内脏为材料，通过含0.2mol/LNaCl的0.01mol/LTris-HCl（pH7.5）缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100凝胶柱过滤层析、DE-32离子交换柱层析，获得了比活力为7,990U/mg的电泳单一纯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂（NAGase,EC3.2.1.52）。该酶的等电点为4.68，分子量约为132kD，每个酶蛋白分子含有约1097个氨基酸残基，其中非极性占39.1%,碱性占7.1%，酸性占24.0%，极性不带电荷的占29.8%。该酶含两个分子量约为65.8kD的同型亚基，肽链间不含二硫键而肽链内含有二硫键...N-Acetyl-β--D-glucosaminidase (NAGase, EC 3.2.1.52) was purified from viscera of green crab (Scylla serrata), by extraction with 0.01 mol/L Tris-HCl buffer (pH 7.5) containing 0.2 mol/L NaCl and ammonium sulfate fractionation, then chromatography on Sephadex G-100 and DEAE-cellulose (DE-32). The purified enzyme was a single band on polyacrylamide gel electrophoresis with specific activity to be 7,...学位：理学博士院系专业：生命科学学院生物化学与生物技术系_生物化学与分子生物学学号：B20032602

锯缘青蟹NAGase在DMSO溶液中的失活动力学

以二甲亚砜(DMSO)为效应物,研究其对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明,酶的剩余活力随着DMSO浓度增高而迅速下降,当DMSO浓度达4.0 mol/dm3时,酶活力几乎完全丧失.该酶在低于2 mol/dm3的DM-SO溶液中的失活作用表现为可逆过程.导致酶活力丧失50%的DMSO浓度(IC50)为0.75 mol/dm3.应用酶失活过程的底物反应动力学方法测定了游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)在不同浓度DMSO溶液中的微观失活速度常数k+0和k+′0,k+0明显大于k+′0,说明游离酶较酶-底物络合物对DMSO更为敏感,底物对酶被DMSO失活有保护作用.随着DMSO浓度增加,逆向微观复活速度常数k-0不断下降,这说明NAGase在高浓度DMSO中失活的可逆性减弱

河口港湾水体污染物迁移转化模式──厦门港石油烃有限水体迁移和风化混合模型

本文将有限水体迁移模式与生物、化学降解模式相结合，讨论了受潮汐控制的河口、港湾水体中污染物的迁移转化模式，并将模式应用于计算厦门港水体中石油烃含量的分布，其结果与现场调查基本吻合.国家自然科学基

草鱼碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质研究

用Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-纤维素和葡聚糖凝胶层析,从草鱼肠中提取出碱性磷酸酶(ALP).提取倍数为6.74,比活为684 U/mg蛋白.酶液经PAGE呈现单一带,该酶催化对硝基苯磷酸二钠(pNPP)水解反应的最适pH值为10.41,最适温度为27℃,Km值为1.01 mmol/L,酶的热稳定性与pH稳定性研究表明:该酶在pH 6.6~11.5区间和在温度低于45℃下稳定.研究金属离子对酶活力影响的结果表明:一价金属离子Li+、Na+和K+对酶活力没有影响;二价金属离子Mg2+、Mn2+和Co2+对酶有不同程度的激活作用;Zn2+对酶有抑制作用

金属离子对锯缘青蟹NAGase活力的影响

本文研究了几种金属离子对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.其结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有明显影响,Mg2+、Ca2+和Ba2+对该酶均有激活作用,激活程度依次为Ca2+>Ba2+>Mg2+.A l3+、Fe3+、Cd2+、Pb2+和Hg2+对该酶具有一定的抑制作用,2.0μmol/dm3的Hg2+可以使酶活力完全丧失.Co2+对酶的效应是先激活后抑制,Mn2+对酶仅有轻微的激活作用.Cd2+和Fe3+对锯缘青蟹NAGase的抑制作用都呈竞争性-反竞争性混合Ⅱ型效应,Cd2+的抑制常数KI和KIS分别为23.9、5.0 mmol/dm3,Fe3+的抑制常数KI和KIS分别为395.5、135.6μmol/dm3.KI>KIS,说明酶-底物络合物(ES)与抑制剂的亲和力比游离酶(E)与抑制剂的亲和力大

产物及其类似物对锯缘青蟹NAGase酶活力的影响

以产物N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖(NAG)及其类似物-葡萄糖(glu)、半乳糖(gal)、果糖(fru)和蔗糖(suc)为效应物,研究它们对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响及抑制作用机理.结果表明,上述效应物对酶均表现为可逆的抑制作用.NAG有较强的抑制作用,其IC50为0.011 mol/dm3.但产物类似物对该酶的抑制作用均弱于NAG.NAG对该酶的抑制作用机理表现为反竞争性抑制,抑制常数KIS为4.37×10-3mol/dm3;glu、gal、suc则表现为非竞争性抑制,抑制常数KI分别为0.125、0.394、0.474 mol/dm3;而fru则表现为竞争性抑制,抑制常数KI为0.455mol/dm3

锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶在甲醛溶液中的失活动力学研究

研究甲醛对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAGase EC 3.2.1.52)活力的影响,结果表明:随着甲醛浓度的增大,酶活力呈指数下降,导致酶活力下降50%的甲醛浓度(失活半衰期,IC50)为0.60 mol/L.酶在低浓度甲醛溶液中的失活过程显示为可逆失活.用底物反应动力学方法考察酶在甲醛溶液中的失活动力学,测定游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)在甲醛溶液中失活的微观速度常数,并比较游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)的正向反应的微观失活速度常数k+0>k′+0,表明底物对酶被甲醛的失活作用有一定的保护作用.正向的失活速度常数k+0和k′+0随着甲醛浓度的增大而增大,而逆向的速度常数k-0随着甲醛浓度的增大而减小,表明随着甲醛浓度的增大,酶变性越来越快,而活力恢复越来越难

丙酮对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与构象的影响

以丙酮为效应物,研究其对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰--βD-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响,结果表明:该酶的剩余活力随着丙酮浓度增大而呈指数下降,当丙酮浓度达25%,酶的剩余活力仅为20%,说明丙酮对青蟹NA-Gase有明显的失活作用.导致酶活力丧失50%的丙酮浓度为7.5%.在较低丙酮浓度(<10%)的失活是可逆的反应过程.动力学研究表明,该酶的失活过程属于混合型,并进一步测定游离酶(E)和酶底物络合物(ES)与丙酮的结合常数(KI和KIS),分别为4.06%和10.49%,KI<KIS,说明底物存在对酶被丙酮的失活作用有一定的保护作用.应用荧光发射光谱研究青蟹NAGase经丙酮微扰后的分子构象变化情况,结果表明:丙酮对酶分子构象有显著的影响,酶的内源荧光强度随丙酮浓度增大而降低,说明酶分子中的生色基团Trp和Tyr残基的微环境发生了变化

X射线双星系统的探测

搜寻X射线双星并建立大规模样本是解决众多科学问题(如\"银河系中有多少黑洞X射线双星?黑洞和中子星之间有无质量间隙?球状星团中有无黑洞?\"等)的基础.爱因斯坦探针卫星拥有更灵敏的探测能力,将在运行的几年之中,预计可以发现一批新的中子星和黑洞X射线双星,研究其空间和动力学质量分布成为解决上述问题的关键.国家重点研发计划(编号:2016YFA040080X);;国家自然科学基金(编号:1133305);;中国科学院战略性先导科技专项(编号:XDA15052100,XDB23040000)资助项