IMUNOTERAPIA COM VENENO DE HIMENÓPTEROS: A EXPERIÊNCIA DE UMA CONSULTA

Resumo: Na Europa a prevalência de alergia ao veneno de himenópteros estima-se em 20%. As reacções sistémicas graves são indicação para imunoterapia específica com veneno de himenópteros após confirmação de atopia. Esta é eficaz em 91-100% dos casos de alergia ao veneno de vespa e 77-80% dos casos de alergia ao veneno de abelha. Apresentamos quatro casos clínicos de doentes com reacções sistémicas ao veneno de himenópteros que efectuaram imunoterapia. Três crianças apresentavam alergia ao veneno de abelha e uma ao veneno de vespa. Tinham IgE específica para o veneno de himenópteros, classes IV a VI. A duração da imunoterapia variou entre quatro e sete anos, com diminuição da classe de IgE específica em todos os doentes no final do tratamento. Três crianças tiveram contacto com o alergénio, durante ou após terminarem a imunoterapia, e nenhuma delas desencadeou uma reacção sistémica. A duração da imunoterapia continua a ser controversa. A ausência de reacção após contacto com o alergénio é sugestiva de sucesso do tratamento

Valoración del perfil de sensibilización de los pacientes alérgicos a veneno de Apis Mellifera en la seguridad y eficacia del tratamiento con inmunoterapia subcutánea

La sensibilización al veneno de himenópteros supone un importante problema de salud, no tanto por su prevalencia como por el riesgo de desencadenar una reacción anafiláctica cuando un paciente es picado por uno de estos insectos. El abordaje terapéutico de estos pacientes exige, además del tratamiento sintomático y urgente de la reacción experimentada por la picadura, el tratamiento etiológico mediante inmunoterapia específica con veneno de himenópteros . La inmunoterapia con veneno de himenópteros es un tratamiento eficaz y seguro en la mayoría de los pacientes, aunque es conocido que el uso de la inmunoterapia con veneno de abeja (Apis mellifera) se asocia a mayor riesgo de aparición de reacciones sistémicas (RS) y una menor protección frente a las picaduras en comparación con la inmunoterapia a véspidos, la causa de este hecho aún permanece desconocida . La falta de respuesta a la inmunoterapia se asocia generalmente a mala tolerancia al extracto, lo que impide con frecuencia alcanzar dosis eficaces. El veneno de abeja es una mezcla compleja de proteínas alergénicas con función enzimática, junto con otras moléculas farmacológicamente activas responsables del dolor y la inflamación . Hasta la actualidad se han identificado 12 alérgenos diferentes en el veneno de abeja. El más prevalente de ellos es la fosfolipasa A2 (Api m1), la hialuronidasa (Api m 2) es un marcador de reactividad cruzada que sensibiliza al 50% de los pacientes alérgicos al veneno de abeja y la melitina (Api m 4) es un péptido de 2,84 kDa muy abundante en el veneno, al que se atribuye una baja alergenicidad. Estos tres componentes alergénicos, que constituyen la mayoría del peso seco del veneno, son los mejor conocidos hasta el momento y los disponibles actualmente para uso clínico. Sin embargo, aún no ha sido determinada su relevancia real, ni la influencia sobre la seguridad y la eficacia de la inmunoterapia con veneno de abeja. La posibilidad de identificar fenotipos de sensibilización a veneno de abeja proporcionada por el diagnóstico molecular, abre una vía para explorar el problema aún no resuelto de la mala tolerancia-escasa eficacia de esta inmunoterapia. En nuestra experiencia al analizar en consulta los primeros pacientes a los que se les realizó el diagnóstico molecular basado en IgE específica frente a las proteínas del veneno de abeja Api m 1, Api m 2, y Api m 4, tuvimos la impresión clínica de que la sensibilización a Api m 4 podría jugar un papel importante en pacientes complicados como factor relacionado con la tolerancia y eficacia a la inmunoterapia con veneno de abeja. Este hecho sienta las bases de nuestro estudio. Poder avanzar en este terreno nos permitirá ofrecer una mayor calidad asistencial a nuestros pacientes. Por lo tanto nuestro estudio se dividirá en dos fases cuyos objetivos son: FASE 1: Describir el perfil de sensibilización alergénico frente al veneno de Apis mellifera basado en Api m 1, Api m 2 y Api m 4. Conocer la importancia epidemológica de las sensibilizaciones encontradas, y saber sí la IgE a Api m 4 es un biomarcador de mala tolerancia a la inmunoterapia con veneno de abeja, así como conocer si la IgE a Api m 1 y Api m 2 son biomarcadores de utilidad clínica. FASE 2: En la fase 2 valoraremos si la IgE a Api m 4 es un marcador fenotípico crítico en la enfermedad alérgica a veneno de Apis mellifera (fenotipos A y B). Describir la seguridad, eficacia y cambios inmunológicos en ambos fenotipos. Y valorar la adecuación de uso de dos extractos alérgénicos acuosos de veneno de abeja según fenotipos de sensibilización

EVALUACI 3N DEL EFECTO TRIPANOCIDA DEL VENENO DE CASCABEL (CROTALUS DURISSUS CUMANENSIS Y C. VEGANDRIS) SOBRE EL TRYPANOSOMA CRUZI EN CULTIVOS IN VITRO (MEDIO LIT)

El inter\ue9s de realizar dicha investigaci\uf3n parte de lograr un m\ue9todo efectivo para disminuir la reproducci\uf3n del T. cruzi, el cual fue descubierto por el Dr. Carlos Chagas en el a\uf1o 1909. La importancia del trabajo realizado radica en que los tratamientos utilizados anteriormente no han logrado una cura aceptable para la enfermedad. La muestra estuvo estructurada en 36 tubos de ensayo en el laboratorio de Toxicolog\ueda del Decanato de Veterinaria de la UCLA, divididos en dosis de veneno (1,5mg y 3mg) de la cascabel CDC y CD y espec\uedficos: 8 con cepa YBM (veneno CDC), 8 con cepa YBM (veneno CV), 8 con cepas G-79 (veneno CDC), 8 con cepas G-79 (veneno CD) y 4 sin veneno cepa control. Se observ\uf3 por microscopia antes de aplicar el veneno la cantidad de par\ue1sitos por mililitro que se encontraban en el cultivo, posteriormente se contabiliz\uf3 nuevamente para determinar la efectividad del veneno sobre ellos, evidenciando efecto Tripanocida del veneno CDC sobre el crecimiento en ambas cepas; al igual que el efecto Tripanocida del veneno CV, correspondiente. Los resultados sin embargo, indican que al aplicar mayores dosis con el veneno de CDC, el parasito se inmuniza y lograr multiplicarse. Se recomienda evaluar el efecto del veneno sobre perros o ratones infectados, adem\ue1s de tomar en cuenta el agregado de bajas dosis del veneno de CDC.PALABRAS CLAVES DEL AUTOR : Trypanosoma cruzi, medio LIT, veneno de cascabel, cepas (YBM, G79) ABSTRACT EVALUATION OF THE TRYPANOCIDAL ACTION OF THE VENOM OF RATTLESNAKES (CROTALUS DURISSUS CUMANENSIS AND C. VEGANDRIS) ON TRYPANOSOMA CRUZI IN VITRO (HALF LIT) The purpose of this investigation was to evaluate the Tripanocida effect in the rattlesnake venom on Trypanosoma cruzi by LIT culture medium, which was discovered by Dr. Carlos Chagas in 1909. The importance of this investigation work lies on the fact that it hasn't achieved an acceptable cure to the elimination of the disease. The sample of this research was structured in 36 test tubes in the laboratory of toxicology veterinary deanery of the UCLA, divided into doses of venom (1,5mg y 3mg) of the rattlesnake Crotalus durissus cumanensis and Crotalus vegrandis, specifically: and 8 with strain YBM (poison CDC), 8 with YBM (poison CV), 8 strains G-79 (poison CDC), 8 with strains G-79 (poison CD) and 4 without poison that represent the control strain. By using the microscope was observed before applying poison the amount of parasites per milliliter in the culture, subsequently was recorded again to determine the effectiveness of the poison on them. It was evident from the venom CDC tripanocida effect on growth in both strains, as well the tripanocida effect of the venom CV accordingly. However, the results indicate that by applying higher doses venom CDC, the parasite is immunized and multiply. It is recommended to evaluate the effect of the venom on dogs or mice infected, as well as notice the addition of low doses of venom CDC. KEY WORDS: Trypanosoma cruzi, LIT culture medium, Rattlesnake venom, Strains (YBM, G79).<br

Standard methods for Apis mellifera venom research

Honey bees have a sting which allows them to inject venomous substances into the body of an opponent or attacker. As the sting originates from a modified ovipositor, it only occurs in the female insect, and this is a defining feature of the bee species that belong to a subclade of the Hymenoptera called Aculeata. There is considerable interest in bee venom research, primarily because of an important subset of the human population who will develop a sometimes life threatening allergic response after a bee sting. However, the use of honey bee venom goes much further, with alleged healing properties in ancient therapies and recent research. The present paper aims to standardize selected methods for honey bee venom research. It covers different methods of venom collection, characterization and storage. Much attention was also addressed to the determination of the biological activity of the venom and its use in the context of biomedical research, more specifically venom allergy. Finally, the procedure for the assignment of new venom allergens has been presented. Las abejas meliferas tienen un aguijon que les permite inyectar sustancias venenosas en el cuerpo de un oponente o atacante. El aguijon es un ovipositor modificado que solo se manifiesta en el insecto hembra, siendo este una caracteristica que define a las especies de abejas que pertenecen al subclado de himenopteros llamada Aculeata. Hay un interes considerable en la investigacion del veneno de abeja, principalmente debido a que un porcentaje importante de la poblacion humana desarrollara una respuesta alergica - a veces mortal - a la picadura de abeja. Sin embargo, el uso del veneno de la abeja melifera abarca mucho mas, con presuntas propiedades curativas en terapias antiguas e investigaciones recientes. El presente trabajo tiene como objetivo estandarizar metodos seleccionados para la investigacion del veneno de las abejas meliferas. Cubre diferentes metodos de recoleccion, caracterizacion y almacenamiento de veneno. Tambien se presto mucha atencion a la determinacion de la actividad biologica del veneno y su uso en el contexto de la investigacion biomedica, mas especificamente la alergia al veneno. Finalmente, se ha presentado el procedimiento para la asignacion de nuevos alergenos de veneno

Neutralização do veneno de Bitis parviocula (serpente da Montanha da Etiópia) pelo antiveneno do Instituto Africano de Pesquisa Médica (SAIMR)

BACKGROUND: The Ethiopian mountain adder (Bitis parviocula) is a viperid known only from a few locations in southwestern Ethiopia. METHODS: a total of 30 µg of B. arietans and B. parviocula venoms were run on a 10-20% Tricine gel. To assay lethality dose fifty (LD50), five groups of eight mice for each venom were used. Hemorrhagic activity for crude venom was tested. Fibrinogenolytic activity of crude venom was measured using (2.5 mg/mL) of fibrinogen solution and (0.03 mg/mL) of crude venom. Gelatinase activity of the venom was tested on a Kodak X-OMAT TM film. Crude venoms of B. parviocula and B. arietans were tested for their abilities to affect clotting time, clotting rate and platelet function on whole human blood. RESULTS: The (SAIMR) antivenom was confirmed in this study to neutralize the lethal activity of venom from Bitis parviocula. The ED50s of SAIMR antivenom on B. parviocula and B. arietans neutralized half of 18.2 and 66.7 mg of venom, respectively. The hemorrhagic activities (MHDs) of B. parviocula and B. arietans were 0.88 and 1.7 µg, respectively. Bitis arietans and B. parviocula venoms degradated &#945; and &#946; chains at different times. The &#947; chains remained unaffected. Bitis parviocula venom did not exhibit gelatinase activity, while B. arietans had a MGD of 6.9 µg. At 3 mg/mL, the crude venoms of B. parviocula and B. arietans did not significantly affect clotting time or clotting rate. CONCLUSIONS: The SAIMR antivenom is very effective in neutralizing the venom of B. parviocula and should be considered in treating envenomations by these snakes.BACKGROUND: Serpente das Montanhas da Etiópia (Bitis parviocula) é um viperídeo conhecido somente em poucas localizações do sudoeste da Etiópia. MÉTODOS: Um total de 30 µg de veneno de B. arietans e B. parviocula foram corridos em gel de 10 a 20% de tricina. Para se estabelecer a quinquagésima dose de letalidade (LD50) foram usados cinco grupos de oito camundongos para cada veneno. A atividade hemorrágica para o veneno cru foi testada. A atividade fibrogenolítica do veneno cru foi medida usando 2,5 mg/mL de solução de fibrinogênio e 0,03 mg/mL de veneno cru. A atividade de gelatinase do veneno foi testada em um filme KODAK X-OMAT TM. Venenos crus de B. parviocula e B. arietans foram testados no que diz respeito à sua capacidade de afetar o tempo de coagulação, a velocidade de coagulação e a função plaquetogênica em sangue humano total. RESULTADO: o antiveneno SAIMR foi confirmado neste estudo no que diz respeito à neutralização da atividade letal do veneno de Bitis parviocula. ED50s do antiveneno SAIMR sobre a B. parviocula e B. arietans neutralizou metade de 18,2 e 66,7 mg respectivamente do veneno. As atividades hemorrágicas (MHDs) de B. parviocula e B. arietans foram respectivamente 0,88 e 1,7 µg. Os venenos de B. arietans e B. parviocula degradaram cadeias &#945; e &#946; em tempos diferentes. A cadeia &#915; permaneceu não afetada. O veneno da B. parviocula não mostrou atividade de gelatinase, enquanto o de B. arietans teve um MGD de 6,9 µg. A nível de 3 mg/mL os venenos crus de B. parviocula e B. arietans não afetaram significantemente o tempo e a velocidade de coagulação. CONCLUSÕES: O antiveneno SAIMR é bastante efetivo para neutralizar o veneno da B. parviocula e deveria ser considerado para o tratamento de envenenamentos por estas serpentes

Actinoporinas:un veneno letal

En la Naturaleza, tanto plantas como animales han desarrollado distintos mecanismos para sobrevivir. Los guepardos pueden alcanzar una velocidad de 120 km/h, lo que les permite cazar a sus presas con mayor facilidad; los leones y los tigres tienen grandes garras y potentes mandíbulas. Por otro lado, aquellos animales o plantas que no tienen libertad de movimiento recurren a los venenos, que les permiten atacar a sus predadores o presas sin necesidad de moverse

Resposta imune e capacidade de neutralização de anticorpos produzidos em ovinos jovens imunizados com veneno de Crotalus durissus terrificus nativo e irradiado com Cobalto 60

The ELISA technique was used to evaluate and compare young ovine humoral immune response during crotalic antiserum production. Animals were clinically evaluated throughout this process, and the neutralizing capacity of antisera raised against natural (NV) and Cobalt-60 irradiated (IrV) venoms of Crotalus durissus terrificus (C.d.t.) was verified by means of in vitro challenges. Three groups of six animals each were used: G1 received NV; G2 was inoculated with IrV; and G3 was used as control. Animals received six immunizations during 84 days at 14-day intervals. ELISA of antibody profile showed significant difference (p&lt;5%) between experimental groups (G1&lt;G2). These results justify the use of gamma radiation to detoxify Crotalus durissus terrificus venom like alternative to antiserum production. The neutralizing capacity of antiserum raised against IrV was fivefold higher than that of antiserum raised against NV. Results showed a new possibility of using ovines to produce commercial crotalic antiserum, which may be employed in the treatment of human and animal envenomation. Production cost might be reduced by the subsequent utilization of hyperimmunized ovines as food.A técnica de Elisa foi utilizada para avaliar e comparar a resposta imune humoral de ovinos jovens para a produção de soro anticrotálico. Durante o processo de soroprodução, foi realizada a avaliação clínica dos animais. A capacidade de neutralização do soro produzido a partir de veneno de serpente Crotalus durissus terrificus, nativo (VN) e irradiado (VIr) com Cobalto-60 foi verificada por meio de desafios in vitro. Um grupo de seis animais recebeu veneno nativo, o segundo grupo recebeu veneno irradiado e o terceiro grupo foi o controle. Os animais receberam seis imunizações durante 84 dias com intervalo de 14 dias. Houve diferença significativa (p&lt;5%) no teste de ELISA do perfil de anticorpos produzidos pelos grupos experimentais (VN &lt; VIr). O grupo imunizado com veneno irradiado apresentou perfil de anticorpos maior que o grupo imunizado com veneno nativo. A capacidade de neutralização do soro produzido a partir do VIr foi cinco vezes maior quando comparado ao soro produzido com VN. Estes resultados justificam o uso da radiação gama na destoxicação do veneno de Crotalus durissus terrificus como alternativa na produção de antiveneno

Un método de bajo costo para probar los efectos citotóxicos del veneno de Crotalus vegrandis (Serpentes: Viperidae) en cultivos de células renales

The pathogenesis of the renal lesion upon envenomation by snakebite has been related to myolysis, hemolysis, hypotension and/or direct venom nephrotoxicity caused by the venom. Both primary and continuous cell culture systems provide an in vitro alternative for quantitative evaluation of the toxicity of snake venoms. Crude Crotalus vegrandis venom was fractionated by molecular exclusion chromatography. The toxicity of C. vegrandis crude venom, hemorrhagic, and neurotoxic fractions were evaluated on mouse primary renal cells and a continuous cell line of Vero cells maintained in vitro. Cells were isolated from murine renal cortex and were grown in 96 well plates with Dulbecco's Modified Essential Medium (DMEM) and challenged with crude and venom fractions. The murine renal cortex cells exhibited epithelial morphology and the majority showed smooth muscle actin determined by immune-staining. The cytotoxicity was evaluated by the tetrazolium colorimetric method. Cell viability was less for crude venom, followed by the hemorrhagic and neurotoxic fractions with a CT50 of 4.93, 18.41 and 50.22 µg/mL, respectively. The Vero cell cultures seemed to be more sensitive with a CT50 of 2.9 and 1.4 µg/mL for crude venom and the hemorrhagic peak, respectively. The results of this study show the potential of using cell culture system to evaluate venom toxicity.La patogénesis de la lesion renal ha sido relacionada a la miolisis, hemólisis, hipotensión y/o el efecto directo del veneno. Tanto el cultivo primario o el cultivo celular continuo proveen una alternativa in vitro para la evaluación cuantitativa de la toxicidad de venenos de serpiente. El veneno crudo de Crotalus vegrandis fue fraccionado por una cromatografía de exclusión molecular. La toxicidad del veneno crudo de C. vegrandis, sus fracciones hemorrágicas y neurotóxicas fueron evaluadas en células renales primarias de ratón y una línea continua de células Vero mantenidas in vitro. Las células fueron aisladas de la corteza renal murina y se cultivaron en placas de 96 pozos con medio Dulbecco (DMEM). Allí fueron tratadas con el veneno crudo y sus fracciones. Las células de la corteza renal murina tuvieron una morfología de células epiteliales y la mayoría se tiñeron con un anticuerpo anti-músculo actina. La citotoxicidad fue evaluada por el método colorimétrico del tetrazolium. La viabilidad de las células fue menor en las células tratadas con el veneno crudo, seguida por la fracción hemorrágica y neurotóxica, con un CT50 de 4.93, 18.41 y 50.22 µg/mL, respectivamente. Los cultivos de células Vero parecieron ser más sensibles con un CT50 de 2.9 y 1.4 µg/mL para el veneno crudo y el pico hemorrágico, respectivamente. Los resultados de este estudio muestran la potencialidad de usar sistemas de cultivo celular para evaluar la toxicidad de los venenos

Comparación de caracteres corporales y del veneno de <i>Bothrops alternatus</i> entre poblaciones de las provincias de Buenos Aires y Entre Ríos, Argentina

Comparamos caracteres corporales y producción de veneno de ejemplares de Bothrops alternatus de una población aislada geográficamente (Olavarría, región de Tandilia, Buenos Aires) con otra en su área de distribución continua de Concordia (Entre Ríos). Estudiamos el largo corporal, peso, separación entre dientes inoculadores, cantidad de veneno y de proteínas en el veneno por ejemplar. No se hallaron diferencias en los caracteres estudiados entre ambas poblaciones (p > 0.05). Las hembras fueron mayores que los machos en ambas muestras,entre un 12-18% (p 0.5; Olavarría: 142 ± 65 mg/animal,Concordia: 160 ± 80 mg/animal), aún ajustando la cantidad de veneno producida respecto al tamaño, mediante el cociente veneno/largo corporal (p >0.6). Tampoco hubo diferencias en el contenido proteico, siendo para ambas muestras de 0.697 ± 0.096 mg de proteínas/mg de veneno seco. Nuestros datos sugieren que los ejemplares de la población aislada de Tandiliano presentan variaciones en el tamaño corporal o en la cantidad de veneno producida, respecto a los ejemplares de Concordia.Asociación Herpetológica Argentina (AHA

Caracterización bioquímica y acción biológica del veneno de la anémona de mar Phymactis papillosa var. rubra - viridis

Publicación a texto completo no autorizada por el autorEstudia bioquímicamente el veneno de Phymactis papillosa var. rubra-viridis, una de las 8 variedades de esta especie. Las anémonas son colectadas en la bahía de Ancón y luego trasladadas al laboratorio, donde el veneno es obtenido mediante shock hipotónico, colocando 7 ejemplares en un beaker con 30 ml de agua destilada, durante 60 minutos. Luego, el material es filtrado en papel Whatman y centrifugado a 12000 rpm por 30 minutos. El sobrenadante es liofilizado. El análisis electroforético del veneno soluble de Phymactis papillosa var. rubra-viridis muestra la presencia de 5 bandas proteicas con pesos moleculares entre 5 y 25.1 kDa. El veneno soluble es fraccionado por cromatografía de filtración en una columna de Sephadex G-50, obteniéndose cuatro picos de proteína (I, II, III y IV). Tanto en el veneno soluble como en las fracciones colectadas se mide actividad proteolítica, hialuronidasa, fosfolipasa, fosfatasa ácida y fosfatasa alcalina; así como, actividad hemolítica y neurotóxica. Se evidencia actividad proteolítica sobre caseína, en el veneno soluble y en los picos I y III. No se detecta actividad de hialuronidasa, fosfolipasa, fosfatasa ácida y fosfatasa alcalina. La actividad hemolítica, ensayada sobre eritrocitos humanos, se encuentra en el veneno soluble y en el pico II. Finalmente, tanto el veneno soluble como el pico III muestran ser neurotóxicos al ser inyectados intraperitonealmente en ratones albinos. Se concluye que el veneno soluble de P. papillosa var. rubra-viridis tiene actividad proteolítica, hemolítica y neurotóxica.Tesi