Métodos alternativos para a detecção de pirogênios em produtos e ambientes sujeitos a Vigilância Sanitária: avanços e perspectivas no Brasil a partir do reconhecimento internacional do Teste de Ativação de Monócitos

Introduction: The detection of pyrogens is essential for the quality control of injectable products. The Rabbit Pyrogen Test remains widely used, despite the existence of alternative methods such as the Monocyte Activation Test (MAT). Objective: To review the use of alternative methods for pyrogen testing, pointing out advances and perspectives from the recognition of MAT by the European pharmacopoeia and its acceptance for regulatory purposes in Brazil. Method: A search was performed on the PubMed and BVS databases, with further classification, categorization by topic and critical analysis of the results. Results: Twenty-four papers were identified, addressing topics such as applications of MAT, its validation and comparisons with in vivo tests. MAT presented better results when compared to other tests, both in the evaluation of biological products and in the detection of non-endotoxin pyrogens. Limitations to diffusion include difficulties in obtaining whole human blood as a source of monocytes, for which several alternatives have been proposed. Conclusions: MAT is a promising method, with application in safety evaluation of new technologies. Its application in Brazil depends on a national implementation policy, which might include greater integration between BraCVAM, Concea and RENAMA in search for its recognition for regulatory purposes.Introdução: A detecção de pirogênios é imprescindível no controle da qualidade de produtos injetáveis. O Teste de Pirogênio em coelhos ainda tem larga aplicação, apesar da existência de métodos alternativos como o Teste de Ativação de Monócitos (MAT). Objetivo: Revisar o uso dos métodos alternativos no teste de pirogênio, apontando avanços e perspectivas a partir do reconhecimento do MAT pela Farmacopeia Europeia e sua aceitação para fins regulatórios no Brasil. Método: Uma busca foi realizada nas bases PubMed e BVS, com posterior classificação, categorização por assuntos e análise crítica dos resultados. Resultados: Foram identificados 24 trabalhos, abordando temas como as aplicações do MAT, sua validação e comparação com testes in vivo. O MAT apresentou melhores resultados quando comparado a outros testes, tanto na avaliação de produtos biológicos como na detecção de pirogênios não-endotoxinas. Limitações para sua difusão incluem a dificuldade de obtenção de sangue total humano como fonte de monócitos, para o qual diversas alternativas têm sido propostas. Conclusões: O MAT se mostra um método promissor, com aplicação na avaliação da segurança de novas tecnologias. Sua aplicação no Brasil depende de uma política nacional de implantação, que inclua maior Integração entre BraCVAM, Concea e RENAMA na busca por seu reconhecimento para fins regulatórios

Métodos alternativos ao uso de animais para a detecção de pirogênio: oportunidades e desafios no controle da qualidade de produtos biológicos.

A necessidade de alternativas ao uso de animais no teste de pirogênio foi guiada pelo principio dos 3R’s, culminando no desenvolvimento e aceitação pela Farmacopeia Europeia do método alternativo in vitro, o Teste de Ativação de Monócitos (Monocyte Activation Test- MAT, 2.6.30/ 2010). O MAT utiliza como matriz, fontes de monócitos humanos (sangue total, PBMC, linhagem), respeitando o conceito dos 3R’s e excluindo riscos inerentes à extrapolação inter-espécies. É um método promissor e eficiente, que detecta um amplo espectro de pirogênios e supri limitações dos testes atuais preconizados pelas farmacopeias, o teste in vitro Teste de Endotoxina Bacteriana e o Teste de Pirogênio em Coelhos. Apesar das vantagens abordadas, alguns obstáculos técnico-científicos e regulatórios devem ser transpostos para a implantação efetiva do MAT na rotina industrial, em especial de produtos biológicos

A PROBLEMÁTICA DA TEMPERATURA CORPORAL ENQUANTO UM PROCEDIMENTO DE ENFERMAGEM: CONCEITOS E MECANISMOS REGULADORES

The present study showes the body temperature regulation mechanisms, the conceptions related to the temperature and their alterations and describes pyrexia and malignant hyperthermia phenomena.O presente estudo mostra a problemática da temperatura corporal enquanto um procedimento de enfermagem. Apresenta conceitos relacionados à temperatura e suas alterações, e descreve duas entidades nosológicas relacionadas com a elevação da temperatura: febre e hipertermia maligna

Métodos alternativos à experimentação animal: aspectos éticos, históricos e legais no Brasil

Currently millions of animals have been used in experiments around the world. The pain, distress and death experienced by animals have been a subject of intense debate in recent years. There is a demand for the substitution of traditional techniques, which use animals indiscriminately by other methods. These assays are based on the 3Rs approach (Reduction, Refinement and Replacement), that reduce the number of living beings, refine the tests to increase the animal welfare or replace them for in vitro techniques. Brazil is under the regulatory process and compulsory use of some of these alternative tests. On the other hand, seven Brazilian states already have local laws banning animal testing with products and ingredients for cosmetics purposes. This review provides a brief description of the substitutive methods according to their purpose in assessing the safety profile of chemical compounds, besides the associated technical and ethical advantages, and the history of legal advances in Brazilian law. The current scenario represents both a breakthrough and a challenge for industry and regulatory agencies towards readjustment and judgment, and in the med-term it is an important transition to the incorporation of new technologies by Science and changing paradigms regarding ethical scientific conduct.  Anualmente milhões de animais são usados em experimentos pelo mundo. A dor, o sofrimento e o sacrifício dos animais têm sido temas de intenso debate nos últimos anos. Existe uma demanda para a substituição de técnicas tradicionais usando animais indiscriminadamente por outros métodos. Estes baseiam-se na abordagem dos 3Rs (Reduction, Refinement e Replacement), que reduzem o número de cobaias, aprimoram os testes para aumentar o bem-estar animal ou os substituem, usando técnicas in vitro. O Brasil encontra-se em processo de regulamentação e obrigatoriedade do uso de alguns desses testes alternativos. Por sua vez, sete estados brasileiros já possuem leis locais proibindo teste animal com produtos e ingredientes para fins cosméticos. Esta revisão fornece uma breve descrição dos métodos substitutivos conforme suas finalidades na avaliação do perfil de segurança de compostos químicos, as vantagens técnicas e éticas associadas, além do histórico dos avanços jurídicos na legislação brasileira. O cenário atual representa tanto um avanço quanto um desafio para a indústria e para os órgãos regulatórios competentes no sentido de readequação e correto julgamento, sendo em médio prazo um importante alinhamento a incorporação de novas tecnologias pela Ciência e as mudanças de paradigmas no tocante à conduta científica ética

Estimativa da incerteza em ensaio de detecção de endotoxina bacteriana pelo método de gelificação

Desde a publicação da ISO 17025:1999, o interesse em métodos para estimativa da incerteza em ensaios qualitativos, do tipo "passa/não passa", têm ganho grande importância. Uma forma de estimar e informar a incerteza deste tipo de ensaio é o uso das probabilidades de respostas-falsas, particularmente falsos-positivos e falsos-negativos, determinados a partir do teorema de Bayes. O objetivo deste artigo é estabelecer um método para a estimativa de incerteza em ensaios de detecção de endotoxina bacteriana pelo método in vitro Limulus Amebocyte Lysate (LAL). Considerando a confirmação da sensibilidade do LAL e a validação do teste, a probabilidade de uma resposta falsa corresponde à soma da probabilidade dos resultados falso-negativos e falso-positivos. A partir dos resultados obtidos foi verificado que a etapa da confirmação da sensibilidade do LAL contribui para a incerteza de forma mais significativa (67,6%) que a etapa de validação do teste (32,4%). Através de um procedimento simples, descrito neste artigo, e de dados obtidos a partir da confirmação da sensibilidade do LAL e validação do teste para um produto em questão é possível obter uma estimativa de incerteza razoável para o ensaio de detecção de endotoxinas bacterianas pelo método de gelificação.Since the publication of ISO 17025:1999, the interest in methods for estimation of the uncertainty in qualitative analysis, such as 'pass/fail', have became more important. The usual form of estimating and informing the uncertainty in this kind of analysis is the use of false-response rates, particularly false-positive and false-negative, determinated from Bayes theorem. The aim of this paper is establish a method for estimation of the uncertainty in the detection of bacterial endotoxins by in vitro Limulus Amebocyte Lysate (LAL) test. Considering the confirmation of LAL sensitivity and the validation of the test, the probability of a false-response corresponds to the sum of false-negative and false-positive result probabilities. From results obtained was verified that the confirmation of LAL sensitivity contributed to the uncertainty in a more significant way (67,6%) than the validation of the test (32,4%). Through this simple procedure and data obtained from the confirmation of LAL sensibility and the validation of the test is possible to obtain a reasonable estimation of the uncertainty of the detection of bacterial endotoxins by gel-clot test

Esterilização de soros e vacinas por radiação gama de cobalto

Diphteria, tetanus, anti-snake venom sera and Diphteria-Pertussis-Tetanus vaccine were submited to different intensities of gamma radiation, in order to: verify the resistance of their specific activities to the action of gamma rays; evaluate the possibility of using this type of energy to sterilize some heterogenous hyperimmune sera and vaccines commonly utilized in Public Health. The results, according to the range employed, show the possibility of sterilizing the products tested, without any alteration to specific biological and chemical properties.Os soros antitetânico, antidiftérico e antibotrópico-crotálico e, ainda, a vacina diftérica-pertussis-tetânica foram submetidos a diferentes intensidades de radiação gama, com os seguintes intuitos: verificação da resistência das atividades específicas destes produtos à ação dos raios gama; avaliação das possibilidades de utilização deste tipo de energia radiante para a esterilização de alguns soros hiperimunes heterólogos e vacinas, mais comumente utilizados em saúde pública. Os resultados obtidos, segundo os parâmetros empregados, mostraram a possibilidade de esterilização sem alterações das atividades específicas, de ordem biológica ou química, dos produtos experimentados

Nursing actions at blood cultures

A hemocultura é um exame de importância singular em suspeitas clínicas de bacteremia, pois seu resultado possibilita a identificação do agente etiológico e contribui para a determinação da conduta terapêutica específica. Assim, realizou-se este estudo objetivando avaliar como os enfermeiros, técnicos e auxiliares de enfermagem realizavam a coleta de sangue para hemocultura. Os dados foram obtidos através de observação direta e entrevista estruturada individual com 12(42,86%) funcionários da enfermagem que trabalhavam nas unidades de internação de clínica médica de um hospital de ensino, público e geral do interior paulista. Os resultados evidenciaram que diversas condutas são adotadas no que refere a anti-sépticos, volume de sangue coletado, coleta em picofebril, uso de máscaras e luvas, lavagem de mãos, dentre outros. É bastante preocupante esta questão, uma vez que estes aspectos podem interferir no resultado da hemocultura.The blood culture is a very important exam indicated in clinical evidences of bacteremia. Its result contributes to identify the etiologic agent and to determine the specific therapeutic decision. So, this investigation was carried out in order to evaluate how the nurses, nursing technicians and auxiliaries used to collect blood for culture. The data was gathered through direct observation and structured individual interview with 12 (42,86%) nursing professionals that worked at the nursing section of medical clinics in a teaching, general and public hospital of the state of São Paulo. The results showed that several attitudes were adopted concerning the anti-septics, volume of blood collected, collecting in time of fever, use of mask and gloves, handwashing, etc. This situation is very worrying since these features can interfere in the result of blood culture.La hemocultura es un examen de importancia singular en sospechas clínicas de bacteremia, pues su resultado posibilita la identificación del agente etiológico y contribuye para la determinación de la conducta terapéutica específica. Así, los autores propusieron realizar un estudio para evaluar como los enfermeros, técnicos y auxiliares de enfermería han realizado la colecta de sangre para hemocultura. Los datos fueron obtenidos a través de la observación directa y entrevista estructurada individual com 12 (42.86%) profesionales de enfermería que trabajan en las unidades de hospitalización de clínica médica de un hospital de enseñanza del interior del estado de São Paulo. Los resultados evidencian que diversas conductas son adoptadas en lo que refiere a anti-sépticos, volumen de sangre colectada, colecta en pico febril, uso de máscaras y guantes, lavado de manos, entre otros. Esta cuestión es muy preocupante, una vez que estos aspectos pueden interferir en el resultado de la hemocultura

Estudo histológico do pulmão de ratos após sepse experimental de origem abdominal.

Trabalho de Conclusão de Curso - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Departamento de Clínica Cirúrgica, Curso de Medicina, Florianópolis, 199