Aislamiento e identificacion de secuencias parciales de genes implicados en la bionsintesis de antocianinas en F. chiloensis ssp. chiloensis f. chiloensis

52 P.Las antocianinas son sintetizadas desde un brazo metabólico de los flavonoides. Las enzimas participantes en tales procesos utilizan los productos generados desde la ruta metabólica fenilpropanoide (p-coumaroil CoA) y las generadas en el metabolismo de ácidos grasos (malonil CoA). La biosíntesis de antocianinas se inicia con la reacción catalizada por la enzima chalcona sintasa y consecutivamente participan las enzimas: chalcona isomerasa, flavanona 3-hidroxilasa, dihidroflavonol 4-reductasa y antocianidina sintasa. En la presente memoria se analizaron las secuencias nucleotídicas parciales que codifican para la síntesis de táles enzimas. Para ello se extrajo muestras de RNA de la especie F. chiloensis ssp. chiloensis f. chiloensis, que se caracteriza por presentar bajos niveles de antocianinas. El RNA obtenido fue utilizado para la generación de cDNA, necesario para las reacciones de PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) realizadas, cuyos productos de amplificación obtenidos, mediante la utilización de partidores específicos, fueron utilizados para la transformación de células competentes, necesarias para obtener una alta cantidad de clones de los productos de amplificación generados. Consiguientemente se realizó una PCR de colonias y sus productos de amplificación fueron secuenciados en Macrogen Inc., Korea. Una vez recibidas las secuencias fueron depuradas y transformadas a secuencias aminoacídicas para su siguiente análisis. Este último consistió en compararlas, mediante alineamientos múltiples, con la estructura primaria de las mismas enzimas, pero pertenecientes a otras especies. Los resultados evidenciaron la existencia de dominios conservados en varias especies de la misma familia a la cual pertenece la especie en estudio. Pero estos dominios desaparecen, en cierta medida, cuando los alineamientos se hacen con especies de diferente familia. Por otra parte, las secuencias obtenidas contienen aminoácidos altamente conservados e importantes desde el punto de vista funcional de las enzimas en estudio. Por lo tanto se puede establecer que, las secuencias parciales de los genes analizados contienen factores que son constantes en las especies analizadas e importantes para el desarrollo de una función enzimática apropiada para la vía biosintética en estudio

Evaluación de la actividad in vitro de 3 chalconas sintéticas contra parásitos intracelulares de Leishmania infantum

Determina la actividad anti-Leishmania de tres chalconas de origen sintético contra parásitos de Leishmania infantum, causantes de leishmaniosis visceral. La identidad de las chalconas fue confirmada a través de espectros RMN de protón y fueron etiquetadas como “chalcona 40”, “chalcona 4β” y “chalcona 4γ”. Se desarrollaron tres modelos de evaluación in vitro los cuales emplearon promastigotes procíclicos, amastigotes axénicos y amastigotes intramacrofágicos. Adicionalmente se evaluó la citotoxicidad de los compuestos utilizando macrófagos peritoneales de ratón BALB/C y la línea celular “Raw Cell”. Las tres chalconas fueron poco activas y selectivas contra los promastigotes, sin embargo, para los amastigotes axénicos la actividad y selectividad fue mayor, observándose en la chalcona 43 un IC50 de 2,6 μM, una citotoxicidad (CC50) de 421,4 μM y un índice de selectividad (IS) de 162, IS= CC50/IC50). En el modelo de amastigotes intrarmacrofágicos se observó la mayor actividad en la chalcona 42 (11,1 μM) con una moderada actividad citotóxica (70,7 μM) presentando una selectividad similar a la chalcona 43 de 7. Se concluye que las chalconas 42 y 43 son los compuestos más activos del estudio contra los amastigotes axénicos e intramacrofágicos de L. infantum.Tesi

Estudo dos efeitos da chalcona sintética Ea2 em células de glioblastoma humano

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia.Gliomas correspondem ao tipo de câncer intracraniano mais comum, chegando a 80% dos tumores que atingem essa região. O glioblastoma multiforme representa o tipo mais agressivo, com sobrevida de aproximadamente 12 meses após o diagnóstico. O tratamento para esse tumor costuma incluir ressecção cirúrgica, quimioterapia e radioterapia. Entretanto, mesmo com mais de quatro décadas de pesquisas, houve pouca melhora nos índices de sobrevivência e na qualidade de vida dos pacientes. Desta forma, a procura por tratamentos alternativos a serem aplicados junto às terapias tradicionais se faz evidente. Nesse aspecto, as chalconas apresentam uma opção promissora. As chalconas são precursoras na biossíntese de flavonoides e são usadas tradicionalmente para tratar doenças inflamatórias ou infecciosas, embora na última década tem-se demonstrado o efeito antitumoral dessas moléculas em variados tipos de câncer. Esse trabalho teve como objetivo avaliar o potencial citotóxico de dezessete chalconas sintéticas em células de gliobastoma multiforme. Constatamos que dentre as dezessete chalconas testadas a chalcona Ea2 foi a mais eficiente em reduzir a viabilidade celular. Posteriormente a Ea2 foi capaz de inibir a migração das células da linhagem GBM1. A análise de apoptose e necrose, por citometria de fluxo, demonstrou que a chalcona Ea2 parece aumentar levemente os níveis de apoptose, embora a análise estatística não indique um aumento significativo nestes níveis. Entretanto, os níveis de necrose também se mantiveram baixos. Sendo assim, mais experimentos são necessários para averiguar o potencial terapêutico da Ea2

Optical Properties And Antiangiogenic Activity Of A Chalcone Derivate

Chalcones and their derivatives exhibit numerous pharmacological activities such as antibacterial, antifungal, cytotoxic, antinociceptive and anti-inflammatory. Recently, they have been assessed aiming for novel application in nonlinear optics and in the treatment of immune diseases and cancers. In this study, we investigate the optical properties of synthetic chalcona 1E,4E-1-(4-chlorophenyl)-5-(2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)penta-1,4-dien-3-one (CAB7β) and its antiangiogenic potential using the chorioallantoic membrane (CAM) with the S180 sarcoma cell line. Experimental and theoretical results show intense absorption in the UVA-UVC region, which is associated with a π → π* transition with intramolecular charge transfer from the trimethyl-cyclohexen-1-yl ring to the chlorophenyl ring. Quantum chemical calculations of the first hyperpolarizability, accounting for both solvent and frequency dispersion effects, are in very good concordance with hyper-Rayleigh scattering measurements. In addition, two-photon absorption allowed band centered at 650 nm was observed. Concerning antiangiogenic activity, CAB7β causes a significant reduction in the total number, junctions, length and caliber of blood vessels stimulated by S180 cells reducing the presence of blood vessels, inflammatory cells and others elements related to angiogenic process. It is found that CAB7β is a versatile compound and a promising candidate for linear and nonlinear optical applications, in therapy against sarcoma and phototherapy

Expressão de genes de resistência em resposta à infecção por nematóides.

A identificação de genes relacionados com a resistência de plantas a pragas e doenças é de grande importância para o entendimento dos mecanismos de defesa envolvidos durante o ataque de patógenos. Atualmente, vários desses genes, identificados em diferentes espécies vegetais, já foram caracterizados ao nível molecular e suas seqüências estão disponíveis em Bancos de Dados. Atualmente, com a conclusão do sequenciamento do Genoma Café, homólogos de genes de defesa tiveram suas seqüências estabelecidas. No entanto, estudos de genômica funcional são necessários para que o papel destes genes no mecanismo de resistência aos patógenos do café seja conhecido. Este trabalho tem como objetivo inicial caracterizar os mecanismos de defesa em café, através da identificação e avaliação da expressão de genes relacionados com a resistência a nematóides. Foram realizadas buscas de seqüências homólogas a genes de defesa no Banco de Dados do Genoma Café através do programa BLAST e foram identificados genes pertencentes a 12 categorias de genes de defesa. Em experimentos de infecção controlada, raízes de cafeeiros suscetíveis e resistentes foram infectadas pelo nematóide Meloidogyne exigua. Amostras de RNA extraído destas raízes serviram como molde para amplificação de transcritos correspondentes a 6 genes de resistência. Os resultados mostram que os genes avaliados neste estudo apresentam uma expressão basal em raízes infectadas pelo nematóide, sugerindo que a ativação da resposta de defesa é controlada por outras famílias de genes não testadas neste estudo

“Estudio de la formación de pirrolo[2,1-a]3,4- dihidroisoquinolinas a través del uso de energía alternativa de radiación de microondas, partiendo de la síntesis de chalconas intermediarias”

En el presente trabajo de investigación se describe la síntesis de derivados de pirrolo[2,1- a]isoquinolinas. La parte medular de este proceso de síntesis involucra reacciones de acoplamiento C-C tipo Heck, a través de procesos de catálisis mediadas con radiación de microondas. La síntesis inició con la reacción de condensación aldólica entre un aldehído aromático y derivados de acetofenona, produciendo los correspondientes compuestos carbonílicos α,β-insaturados también conocidos como chalconas. En el segundo paso de la ruta de síntesis, las chalconas se transformaron a los correspondientes derivados heterocíclicos de pirrol utilizando la metodología de van Leussen. En el tercer paso se llevó a cabo la Nalquilación del pirrol utilizando como agente alquilante al 4-metilbencensulfonato (22) producto obtenido a partir de la reacción de sulfonación del 2-bromofenetilo, para de esa manera generar la estructura adecuada en los derivados alquilados. Finalmente, la última etapa de la ruta de síntesis involucró la reacción intermolecular de Heck para llevar a cabo la ciclación de los derivados alquilados de pirrol, en presencia de sales de paladio y radiación de microondas, obteniendo buenos rendimientos del producto final (dihidroisoquinolina). Todos los compuestos de la ruta de síntesis fueron identificados utilizando la espectroscopia de Resonancia Magnética Nuclear de hidrógeno (RMN 1H) y de carbono- 13 (RMN 13C) como la herramienta principal de elucidación estructural además de Espectroscopia de Infrarrojo (IR)