Mechanisms of tolerance induction to foreign proteins

Tese de doutoramento, Ciências Biomédicas (Imunologia), Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina, 2013Several immune mediated diseases, such as autoimmunity and allergy or transplant rejection are consequence of inappropriate immune responses towards specific antigens. The therapeutic induction of robust immune tolerance has, therefore been considered the Holy Grail of immunology since the pioneering work of Medawar and colleagues who have demonstrated the feasibility of tolerance induction. Immune tolerance is defined as the unresponsive state to a set of antigens by an immune system that remains immune competent to respond to unrelated antigens. A wealth of mechanisms has evolved to achieve immune tolerance to self as well as many environmental antigens. These mechanisms include negative selection in the thymus together with the production of regulatory T cells dedicated to the prevention of auto reactivity; cytokines like IL-10; immune privileged sites; and peripheral control of effector T cells by apoptosis, anergy, competition, and differentiation of several types of regulatory immune cells. In the last twenty years much emphasis has been given to a powerful regulatory T (Treg) cell population initially characterized by the high expression of CD25 (the alpha chain of the IL-2R), that express the transcription factor Foxp3. Over the years a significant amount of information on Tregs has been acquired which empowered the immunologists to devise new strategies to differentiate and expand these cells and ultimately to use them as cellular therapies. One strategy known to induce immune tolerance takes advantage of biological agents such as monoclonal antibodies (MAbs) that can specifically target certain molecules modulating immune responses. Several studies in different animal models of immune disorders have shown the efficacy of MAbs at inducing long term specific immune tolerance. Non depleting anti-CD4 MAb has been shown able to induce immune tolerance in transplantation and autoimmunity by inducing a specific Treg population. In the work presented in this thesis we have shown that non depleting anti-CD4 can induce robust tolerance to soluble antigens in a mouse model of allergic asthma – a Th2-driven pathology. CD4-blockade at the time of allergen exposure can lead to antigen-specific tolerance therefore sparing the immune response to other antigens. Based on these findings, where the allergen is administered together with an adjuvant, we revisited immune tolerance to therapeutic proteins using a mouse model of hemophilia. It had been reported that tolerance induced with MAbs (such as anti-CD4) was difficult to induce to proteins like factor VIII. We hypothesized that an adjuvant, such as alum, that in the animal models of allergy allows tolerance induction to model antigens and allergens, may be useful to facilitate tolerance to FVIII. We confirmed that indeed tolerance induction to FVIII can be induced when alum is used as an adjuvant – a counter-intuitive finding given the tendency of adjuvants to boost, rather than inhibit, immune responses. We believe that for proper tolerization of antigen-specific cells it is essential to have adequate antigen presentation. Therefore an adjuvant can facilitate the process. This hypothesis will be addressed in future studies. Finally, we investigated the cellular and molecular mechanisms underlying the induction of tolerance to proteins using non-depleting anti- CD4. We anticipated that induction of Foxp3+ T cells would be a major mechanism given prior studies that have clearly established induced Foxp3+ Tregs in tolerance induction in transplantation and autoimmunity. However, we found that tolerance to proteins in alum could be induced in Foxp3-deficient mice, but not in the absence of IL-10. In addition to the dominant tolerance mechanism IL-10-dependent we found evidence for a recessive mechanism based on the activation-cell death and anergy of antigen-specific cells following activation under the cover of anti-CD4. We believe it may be possible to take advantage of both Foxp3- independent and Foxp3-dependent mechanisms to achieve a more robust state of immune tolerance.Várias doenças causadas pelo sistema imunitário, como doenças autoimunes, alergias ou rejeição de transplantes, são causadas por uma resposta inadequada a alguns antigénios. Uma possível forma de tratar estas doenças consiste na indução de tolerância específica e robusta. A tolerância imunitária é definida como a ausência de resposta por parte do sistema imunitário a um dado antigénio, mantendo-se competente para responder a antigénios distintos. Existem vários mecanismos que asseguram tolerância imunitária a antigénios do próprio e vários antigénios ambientais, tais como a selecção negativa no timo de linfócitos autorreactivos juntamente com o desenvolvimento de células T reguladoras (Treg) que suprimem autorreactividade; locais imunoprivilegiados como a placenta; citoquinas imunorreguladoras como a IL-10; e o controlo na periferia de linfócitos maturos através de apoptose, anergia, competição e diferenciação de diferentes populações celulares reguladoras. Nos últimos vinte anos tem sido dada muita ênfase a uma população de células T reguladoras caracterizada pela elevada expressão de CD25 (a cadeia alfa do receptor de IL-2) e de Foxp3 (um factor de transcrição). Com a aquisição de informação sobre as Tregs, os imunologistas têm tido a capacidade de desenvolver novas estratégias para diferenciar e expandir esta população celular, sendo inclusivamente utilizadas Tregs como terapia celular em ensaios clínicos. Uma forma eficaz de induzir tolerância imunitária em modelos animais consiste na utilização de anticorpos monoclonais (MAbs), dirigidos a moléculas envolvidas na activação de linfócitos. Vários estudos em modelos animais de patologias do sistema imunitário demonstram a eficácia destes MAbs na indução de uma tolerância robusta a longo prazo. O anti-CD4 não depletante, em particular, é bastante eficaz na indução de tolerância imunitária em transplantação e autoimunidade induzindo uma população de Tregs. No trabalho descrito nesta tese demonstrámos que o anti-CD4 não depletante é capaz de induzir tolerância num modelo animal de asma alérgica, que é uma patologia dependente de uma resposta imunitária do tipo Th2. O bloqueio do CD4 concomitante com a exposição ao alergénio leva à indução de um estado de tolerância específica para esse antigénio, mantendo-se a competência do sistema imunitário para responder a outros antigénios diferentes. Com base nestes resultados, onde para a indução de tolerância utilizámos antigénios administrados juntamente com um adjuvante (alum), decidimos estudar a indução de tolerância a outras proteínas. Com efeito, estudos prévios mostraram ser particularmente difícil induzir tolerância a factor VIII (FVIII) em modelos animais de hemofilia, utilizando anti-CD4 ou outros anticorpos indutores de tolerância. Decidimos reavaliar a indução de tolerância a FVIII em hemofilia com base na hipótese que um adjuvante poderia facilitar esse processo. Com efeito verificámos que a administração de FVIII com alum permite a obtenção de tolerância robusta ao factor de coagulação com anti-CD4. Estes resultados poderão parecer contra-intuitivos pois os adjuvantes são conhecidos pela sua capacidade de potenciar respostas imunitárias e não de as inibir. No entanto é provável que para indução terapêutica de tolerância seja necessário que o antigénio a tolerar seja apresentado de forma eficaz à maioria de células T efectoras específicas durante o período em que o anti-CD4 se mantém em níveis terapêuticos. Um adjuvante poderá assim facilitar a apresentação de antigénios pelas células dendríticas durante este período. Esta hipótese será avaliada em experiências futuras. Finalmente, procurámos identificar os mecanismos celulares e moleculares associados à indução de tolerância imunitária a proteínas em adjuvante. Como está descrito na literatura que o anti-CD4 promove, em transplantação e autoimunidade, a diferenciação de Tregs Foxp3+, assumimos que o mesmo mecanismo estaria envolvido na indução de tolerância a proteínas em alum. Contudo, verificámos ser possível indução de tolerância em animais deficientes em Foxp3. No entanto o estado de tolerância depende de IL-10, pois não é possível induzir tolerância em animais na ausência desta citoquina. Para além deste mecanismo de tolerância dominante dependente de IL-10 também está envolvido um componente recessivo, que depende da anergia e apoptose de células efectoras específicas É possível que a combinação de estratégias que promovem mecanismos indutores de tolerância independentes de Foxp3 e outras estratégias que promovam tolerância mediada por Treg possam ser explorados de um modo sinergético para alcançar um estado de tolerância mais robusto e em situações mais estringentes.Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, SFRH/BD/49093/2008

Gisela Bock & Anne Cova (eds), Writing Women’s History in Southern Europe 19th-20th Centuries

At a time when women’s history was celebrating over 40 years of existence, several eminent historians from different European countries and a new generation of young scholars mainly from Portugal gathered in Serra da Arrábida in September 1999 for a Conference which aimed at reporting on the stage of southern European women’s history writing. The Conference proceedings were published three years later by Celta Editora, together with nine brief overviews of recent research conducted in Portuga..

Removal of benzene and toluene from a refinery waste air stream by water sorption and biotrickling filtration

ABSTRACT The paper presents the results of an analysis of a two-stage pilot plant for the removal of toluene and benzene from the exhaust air of an industrial wastewater treatment plant (WWTP). The two-stage air process combines a water scrubber and a biotrickling filter (BTF) in sequence, and treats air stripped from the liquid phase compartments of the WWTP. During the experimental period, the pilot plant treated an airflow of 600 Nm 3 h -1 . Average concentrations of the waste air stream entering the water scrubber were 10.61 mg Nm -3 benzene and 9.26 mg Nm -3 toluene. The water scrubber obtained medium-high removal efficiencies (averages 51% and 60%, for benzene and toluene, respectively). Subsequent passage through the BTF allowed a further reduction of average concentrations, which decreased to 2.10 mg Nm -3 benzene and to 0.84 mg Nm -3 toluene, thereby allowing overall average removal efficiencies (REs) of 80% and 91% for benzene and toluene, respectively. Results prove the benefits obtained from a combination of different removal technologies: water scrubbers to remove peak concentrations and soluble compounds, and BTFs to remove compounds with lower solubility, due to the biodegradation performed by microorganisms

Analysis of factors and drivers in graduates success among Portugal, India and Italy –defining success

Success emerges as a very wide concept. This project aims to understand the factors and drivers in graduates’ success across Portugal, India and Italy. The present research is focused on the factors that account for these graduates’ definition of success. The study analyzed the topic following an exhaustive exploratory research, which started with the collection of secondary data to support and better understand the topic, followed by a valuable qualitative research which used in-depth interviews to obtain rich insights. These first two steps retrieved the guidelines to create a questionnaire for the quantitative component. After analyzing the results and establish the most adequate relationships, it was found that this generation of business graduates identify success as being composed by career and personal achievement, albeit they highly associate overall success as a well balanced and meaningful life, in detriment to material goods. These results are of great value to the higher education institutions, who have the power to interfere in these factors and better tailor their services offer to students’ expectations and aspirations

Um Macau “Imaginado” em Língua Portuguesa

http://dx.doi.org/10.5902/217921947870 Resumo: Apesar da decisão de manter o Português como segunda língua oficial da Região Administrativa Especial de Macau (RAEM), pouca ou nenhuma atenção é prestada à definição de uma política de língua ou à reforma educativa necessária ao processo de implementação de um verdadeiro bilinguismo ou, preferencialmente, trilinguismo que, tal como aconteceu em países e regiões vizinhas, contribua para o desenvolvimento económico e social de Macau. Esse desinvestimento político, aliado à falta de um sentimento de pertença à terra ou coesão comunitária entre a população que reside no território, impediu um processo de construção identitária no qual o Português e a sua herança histórico-cultural funcionem como mais-valias do desenvolvimento e afirmação da RAEM, não apenas na região onde se situa geograficamente, mas no mundo

Gisela Bock & Anne Cova (eds), Writing Women’s History in Southern Europe 19th-20th Centuries

At a time when women’s history was celebrating over 40 years of existence, several eminent historians from different European countries and a new generation of young scholars mainly from Portugal gathered in Serra da Arrábida in September 1999 for a Conference which aimed at reporting on the stage of southern European women’s history writing. The Conference proceedings were published three years later by Celta Editora, together with nine brief overviews of recent research conducted in Portuga..

Imagem corporal e vivências sexuais em mulheres com cancro da mama

Dissertação de Mestrado apresentada ao ISPA - Instituto UniversitárioEste trabalho teve como objectivo o estudo da imagem corporal e das vivências sexuais, em mulheres com cancro da mama. A amostra foi constituída por vinte mulheres com cancro da mama, submetidas a uma cirurgia (mastectomia ou cirurgia conservadora). Todas as participantes eram casadas ou viviam em união de facto. A metodologia utilizada foi: um questionário sócio-demógrafico, a Escala de Ajustamento Conjugal para pessoas com Deficiência Adquirida e a Escala de Imagem Corporal “Como Me Relaciono Com o Meu Corpo”. Os resultados obtidos apontaram para a inexistência de relação entre as variáveis imagem corporal e qualidade das vivências sexuais, não se podendo concluir que exista, de facto, uma mudança na vida sexual causada pela alteração da imagem corporal fomentada pela mastectomia ou cirurgia conservadora. Constatou-se, no entanto, a existência de problemática ao nível da imagem corporal.ABSTRACT: The main objective of this work is the study of the corporal image and sexual experiences in women with breast cancer. The sample was constituted by twenty womens with breast cancer that have been submitted to a surgery (mastectomy or conservative surgery). All the participants were married or live in civil union. To evaluate the variables in study it was used: a social-demographic questionary, Marital Adjustment Checklist for the Disabled and the corporal image scale “Como Me Relaciono Com o Meu Corpo”. The obtained results point to inexistence of relations between the variables corporal image and quality of sexual experiences, not being able to conclude that there is, in fact, a change in the sexual life cause by the change of the corporal image by the mastectomy or conservative surgery. However, it was noted the existence of some problems linked with the corporal image

Tempos de diagnóstico e resultados económicos

As limitações de orçamento impostas ao setor da saúde em Portugal têm tornado a tele-saúde numa necessidade nas diferentes especialidades médicas no âmbito da teleconsulta, auxílio de diagnósticos diferenciais, auxílio na interpretação, partilha de exames complementares de diagnóstico e até na área da educação médica. Com a tecnologia ao dispor da ciência, impera rentabilizar e potenciar os recursos físicos e materiais já existentes em hospitais nacionais, que por falta de equipa qualificada se tornam devolutos com consequências importantes na resposta às necessidades dos utentes associados aos serviços hospitalares. É neste contexto nacional e com os olhos postos nos benefícios globalmente aceites, que em 2015 foi criada a Norma de Orientação Clínica para Telepatologia/Patologia Digital tendo por base a experiência do serviço de Telepatologia implementado em Janeiro de 2013 no serviço de Anatomia Patológica do Centro Hospitalar Universitário da Cova da Beira. O projeto contou com uma alteração no desenho do processo das análises de amostras de material biológico o que justificou a pertinência do estudo que teve a finalidade de quantificar os ganhos no tempo de diagnóstico e os resultados económicos decorrentes da implementação de um serviço que prescindiu da dependência do processo associado ao envio das amostras para análise externa ao Centro Hospitalar Universitário da Cova da Beira, EPE. Através do estudo foi possível concluir que houve um ganho médio de cerca de 8 dias após a implementação do projeto de Patologia Digital aparentemente não relacionado com o facto do número de exames anuais realizados pelo laboratório ter diminuído nem com a diferença entre o número de exames por mês, por técnico. Foi ainda possível a comparação entre o processo de análise de uma amostra pelo serviço de Anatomia Patológica anterior à criação deste modelo de telepatologia, e o processo de análise das mesmas após a sua implementação, que inclui macroscopia realizada pelo Técnico de Anatomia Patológica sob supervisão do Anatomopatologista, digitalização da totalidade da lâmina e o envio para análise remota por parte do médico patologista. Por fim, a avaliação deste processo revelou não haver perda de qualidade na avaliação da amostra suportando que a existência de um banco de imagens e o processo de dupla verificação está associado a melhorias do diagnóstico.The Portuguese health system’s budget constraints have made telemedicine a necessity in different medical specialties for consultation, differential diagnosis assistance, helping with interpretation, sharing complementary exams and even for medical education purposes. With technology within science’s reach, it’s logical and of key importance to maximize the existing resources which by lack of qualified personnel fall victim to abandonment or underutilization, greatly impacting the ability to fulfil the community’s healthcare expectations and needs. Within this context, and by taking into account the globally accepted telehealth benefits, 2015 saw the creation of “Norma de Orientação Clínica para Telepatologia/Patologia Digital” which built on the experimental Telepathology service implemented in January 2013 at Centro Hospitalar da Cova da Beira’s Anatomical Pathology service. The experiment redesigned the process of analyzing biological material samples which highlights the relevance of this research as a way to quantify the improvements regarding the necessary amount of time for a diagnosis as well as the economical advantages of no longer depending on external laboratories to provide such service to Centro Hospitalar Universitário da Cova da Beira, EPE. By the end of this research it was possible to establish that on average, there was an 8-day gain after the Patologia Digital project took off with results apparently neither related with a decrease in the number of exams per year nor the difference in number of exams per month per technical professional. It was also possible to compare the analysis process of the same sample through the previous process and through the new process including macroscopy done by the Anatomical Pathology technician under the Anatomopathologist’s supervision, full digitization of the slide and sending it to a remote location to be analyzed by a Medical Pathologist. In addition, the evaluation of this process revealed no reduced quality concerning the accuracy on evaluating a sample, further supporting the idea that an image pool and double-checking are associated with improvements in diagnosis

Plano de carreira para oficiais de Administração Militar: Reestruturação do plano de estudos do curso de Asdministração Militar

Tendo em conta o ambiente de mudança em que a sociedade é caracterizada, os recursos humanos são peças ativas no desenvolvimento das organizações, pelo que a formação assume cada vez mais um papel preponderante na sua gestão. É neste âmbito de inevitabilidade, mudança e necessidade de antecipação da formação dos oficiais de Administração Militar que surge o tema “Plano de Carreira para Oficiais de Administração Militar: Reestruturação do Plano de Estudos do Curso de Administração Militar” e os objetivos deste trabalho de investigação. O presente trabalho, perspetiva a necessidade proeminente para o Exército Português de oficiais pertencentes à Ordem dos Técnicos Oficiais de Contas, de para alcançar a eficiência e eficácia dos processos de apoio financeiro, onde o planeamento da formação assume especial atenção, pelo facto de na atualidade não permitir o acesso direto à Ordem dos Técnicos Oficiais de Contas. Desta forma, são analisadas, qual ou quais são as medidas a tomar, para fazer face às necessidades ao nível financeiro do Exército. Assim sendo a metodologia utilizada nesta investigação tem por base a fase exploratória, analítica e conclusiva, pelo que os dados que sustentam toda a investigação foram obtidos através da realização de uma pesquisa bibliográfica, bem como, através da aplicação de entrevistas e questionários. Conclui-se que a realização de alterações ao plano de estudos do curso de Administração Militar é uma mais-valia no âmbito pessoal, institucional e no reconhecimento por parte da sociedade civil, tendo sido propostos cenários para a realização das alterações. Em suma, a existência de Técnicos Oficiais de Contas no Exército, apresenta-se como uma necessidade e mais-valia para o Exército em geral, e para o serviço de Administração Militar em particular. Muitas outras alterações e cenários podem ser levantados. Contudo o principal objetivo é oferecer soluções para criar uma boa oferta formativa ao Curso de Administração Militar.Abstract Regarding the changing environment in which society is characterized, Human resources play an active part in the development of organizations, whereby the training is increasingly taking a leading role in their management. It’s in this context of inevitability to change and the need to anticipate the education of officers of Military Administration that appears the theme “Career Plan for officials of Military Administration, Restructuring the Course’s Study Plan of Military Administration” and also the goals of this research. This work aims to show the need for Officers of the Portuguese Army to take part in the Order of Chartered Accountants, to achieve efficiency and effectiveness in the processes of financial support. Where planning training takes special attention, because presently it doesn’t allow direct access to the Order of Chartered Accountants. Thus, we analyzed which or what steps to take to address the financial needs of the Army. Therefore the methodology used in this research is based on exploratory, analytical and conclusive stages. The data supporting all the research was obtained by conducting a bibliographic investigation, as well as through the application of interviews and questionnaires. It is concluded that making changes to the plan of studies of the Military Administration course is a personal and institutional asset capable of establishing a renewed recognition by the civil society. Scenarios have been proposed to carry out these changes. In short, the existence of Chartered Accountants in the Army presents itself as a necessity and added value to the Army in general and for the service of the Military Administration in particular. However the main purpose is create a good training offer to the Military Administration course