Transmission electron microscopy in oral cytopathology : a pilot study

Introduction: Cytopathology is a collection method that allows cell analysis through the different techniques. The oral mucosa exfoliated cells observation demonstrates morphological, biochemical and/or molecular aspects depending on the type of processing of the sample. Aim:This study tested the use of oral cytopathology associated with transmission electron microscopy (TEM) to observe the morphology of cells, mainly in relation to the cell nucleus, the cytoplasmic membrane, and cell junctions. Materials and Methods: Exfoliated epithelial cells from the oral mucosa were analyzed by TEM from individuals exposed to tobacco and alcohol, with leukoplakia or with a histopathological diagnosis of squamous cell carci-noma. Results: The cytoplasmic cell-cell junctions in the malignant samples lost the characteristic irregular pattern formed by the numerous interdigitations and the junctional process of normal cells and started to present a straight cytoplasmic surface. The nuclei of cells from leukoplakia and squamous cell carcinoma samples showed heterogeneous staining, while non-lesional cells were homogeneous. Discussion: The analysis of oral cytopathological smears by TEM contributes to the un-derstanding of the changes that occur during the process of malignancy of the oral mucosa, especially with regard to the cytoplasmic membrane and intercellular junctions. Conclusion: TEM may be a good analytical method to investigate morphological changes in exfoliated cells of the oral epitheliumIntrodução: A citopatologia é um método de coleta que permite a análise celular por meio de diferentes técnicas. A observação das células esfoliadas da mucosa bucal demonstra aspectos morfológicos, bioquímicos e/ou moleculares dependendo do tipo do processamento empregado. Objetivo: Este estudo testou o emprego da técnica de citopatologia bucal associada à microscopia eletrônica de transmissão (MET) para observar a morfolo-gia das células, principalmente com relação à membrana citoplasmática, as junções celulares e ao núcleo da célula. Materiais eMétodos: Células epiteliais esfoliadas da mucosa bucal foram analisadas por MET de indivíduos expostos a tabaco e álcool, apresentando leucoplasia ou com diagnóstico de carcinoma espinocelular. Resultados:As junções citoplasmáticas célula-célula nas amostras malignas perderam o padrão irregular característico formado pelas inúmeras interdigitações e o processo juncional das células normais e passaram a apresentar uma superfície citoplasmática reta. O núcleo das células das amostras de leucoplasia e do carcinoma espinocelular apresentou coloração heterogênea, enquanto as células não lesionais foram homogêneas. Discussão: A análise de esfregaços citopatológicos bucais por MET contribui para o entendimento das alterações que ocorrem durante o processo de malignidade da mucosa bucal, principal-mente no que diz respeito à membrana citoplasmática e as junções intercelulares. Conclusão: A MET pode ser um bom método analítico para investigar alterações morfológicas em células esfoliadas do epitélio buca

Microscopia eletrônica de transmissão em citopatologia bucal - um estudo piloto

Cytopathology is a collection method that allows cell analysis through the different techniques. The oral mucosa exfoliated cells observation demonstrates morphological, biochemical and/or molecular aspects depending on the type of processing of the sample. Aim: This study tested the use of oral cytopathology associated with transmission electron microscopy (TEM) to observe the morphology of cells, mainly in relation to the cell nucleus, the cytoplasmic membrane, and cell junctions. Materials and Methods: Exfoliated epithelial cells from the oral mucosa were analyzed by TEM from individuals exposed to tobacco and alcohol, with leukoplakia or with a histopathological diagnosis of squamous cell carcinoma. Results: The cytoplasmic cell-cell junctions in the malignant samples lost the characteristic irregular pattern formed by the numerous interdigitations and the junctional process of normal cells and started to present a straight cytoplasmic surface. The nuclei of cells from leukoplakia and squamous cell carcinoma samples showed heterogeneous staining, while non-lesional cells were homogeneous. Discussion: The analysis of oral cytopathological smears by TEM contributes to the understanding of the changes that occur during the process of malignancy of the oral mucosa, especially with regard to the cytoplasmic membrane and intercellular junctions. Conclusion: TEM may be a good analytical method to investigate morphological changes in exfoliated cells of the oral epithelium.A citopatologia é um método de coleta que permite a análise celular por meio de diferentes técnicas. A observação das células esfoliadas da mucosa bucal demonstra aspectos morfológicos, bioquímicos e/ou moleculares dependendo do tipo do processamento empregado. Objetivo: Este estudo testou o emprego da técnica de citopatologia bucal associada à microscopia eletrônica de transmissão (MET) para observar a morfologia das células, principalmente com relação à membrana citoplasmática, as junções celulares e ao núcleo da célula. Materiais e Métodos: Células epiteliais esfoliadas da mucosa bucal foram analisadas por MET de indivíduos expostos a tabaco e álcool, apresentando leucoplasia ou com diagnóstico de carcinoma espinocelular. Resultados: As junções citoplasmáticas célula-célula nas amostras malignas perderam o padrão irregular característico formado pelas inúmeras interdigitações e o processo juncional das células normais e passaram a apresentar uma superfície citoplasmática reta. O núcleo das células das amostras de leucoplasia e do carcinoma espinocelular apresentou coloração heterogênea, enquanto as células não lesionais foram homogêneas. Discussão: A análise de esfregaços citopatológicos bucais por MET contribui para o entendimento das alterações que ocorrem durante o processo de malignidade da mucosa bucal, principalmente no que diz respeito à membrana citoplasmática e as junções intercelulares. Conclusão: A MET pode ser um bom método analítico para investigar alterações morfológicas em células esfoliadas do epitélio bucal.

Spontaneous Regression of an Oral Manifestation of Plasmablastic Lymphoma: Literature Review and Commentary about the Phenomena

Plasmablastic Lymphoma (PBL) is a hematolymphoid malignant disease that has a predilection for the oral cavity and jaw. The aim of this paper is report a total resolution of oral manifestation of PBL without any oncological treatment; this process is extremely rare and we discuss the mechanism which can occur. We present a case of PBL in left maxilla and oral mucosa in a woman HIV-positive patient. After an incisional biopsy an unusual outcome of spontaneous regression of the disease occurred, we reported the diagnostic process, the management and the follow up of case. We revised the similar cases reported in the literature and we will discuss the hypotheses how the phenomenon can occur. Although the PBLs are aggressive lesions, with questionable prognosis, the spontaneous regression can occur and the patient should be monitored for the risk of metastases and possible recurrence of the disease

Oral leukoplakia loss of heterozygosity : profiles comparison between different populations

OBJETIVO: A perda de heterozigosidade (LOH) é capaz de avaliar as alterações genéticas de lesões potencialmente malignas. Este ensaio avalia as regiões cromossômicas polimórficas que estão próximas ou na região dos oncogenes e genes supressores de tumor conhecidos. Os objetivos desta tese foram três principais: 1) Avaliar a frequência de perda de heterozigosidade de leucoplasias bucais com diferentes graus de severidade histopatológico em regiões cromossômicas próximas aos genes supressores de tumores. 2) Comparar e correlacionar o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos da British Columbia (Canadá) e Rio Grande do Sul (Brasil). 3) Avaliar os danos ao DNA que podem ocorrer durante o processamento e armazenamento das amostras de tecido parafinado. MÉTODOS: Amostras de leucoplasia bucal (com e sem displasias), fixadas em formalina tamponada 10% e parafinadas, obtidas nos laboratório de patologia bucal do Canadá e do Brasil foram selecionadas e microdissectadas. Procedeu-se a extração de DNA, amplificação por PCR das seguintes regiões microssatélites: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) e 17p13.1 (tp53 e D17S786). Após o produto do PCR foi separado e visualizado em gel de poliacrilamida por autoradiografia. RESULTADOS: Observou-se uma forte correlação entre o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos com leucoplasia bucal de ambos os países, independentemente da etnicidade. Além disso, pode-se notar que amostras de tecidos parafinados submetidos a mais de 24 horas de fixação em formalina tamponada 10% não serão, em sua maioria, boas amostras para análises de DNA. CONCLUSÃO: As lesões potencialmente malignas, provavelmente não são influenciadas em sua etiopatogênia pelas diferenças étnicas. O modelo de risco genético validado por Zhang e colaboradores (2012) parece ser aplicável em nossa comunidade, sendo necessário a sua validação, respeitando procedimentos técnicos padronizados. Ainda, vale ressaltar, que é imprescindível que a comunidade científica passe a adotar metodologias que preservem o material genético das peças dos bancos de tecidos parafinados, que são de inestimável valor para a pesquisa biomédica.OBJECTIVE: Loss of heterozygosity (LOH) can evaluate genetic alterations of pre-malignant lesions. This assay evaluates the chromosomal polymorphic regions that are present in tumor suppressor genes and oncogenes. The main objectives of this thesis were: 1) Evaluate the frequency of LOH of oral leukoplakias with different histopathological degrees at chromosomal regions of tumor suppressor genes. 2) Compare the profile of LOH between individuals from British Columbia (Canada) and Rio Grande do Sul (Brazil). 3) Evaluate the DNA damage that may occur with FFPE (formalin-fixed paraffin-embedded) tissues. METHODS: FFPE samples of oral leukoplakia (with and without dysplasia), obtained in Canadian and Brazilian oral pathology laboratories were selected and microdissected. DNA extraction and PCR amplification of the following microsatellite regions were conducted: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) and 17p13.1 (tp53 and D17S786). PCR products were separated and visualized on polyacrylamide gel by autoradiography. RESULTS: A strong correlation between the LOH profile among individuals with oral leukoplakia from both countries was observed, regardless ethnicity. Furthermore, FFPE tissues subjected to more than 24 hours of fixation in 10% buffered formalin are not, generally, good samples for DNA analysis. CONCLUSION: Pre-malignant lesions etiopathogenesis may not be influenced by ethnicity. The genetic risk model validated by Zhang et al. (2012) seems to be applicable in our community, requiring its own validation, respecting standardized procedures. Still, it is important to emphasize that it is imperative that a scientific community adopts methodologies that preserve the genetic material FFPE tissues that are an invaluable resource for biomedical research

Longitudinal evaluation of the proliferation rates of cells from the oral mucosa in subjetics exposed and not exposed to tabaco and have ceased the smoking habit

OBJETIVO: O primeiro objetivo deste trabalho foi avaliar, através da citopatologia e da técnica de AgNOR, as taxas de proliferação celular da borda de língua e assoalho de boca de indivíduos que abandonaram o hábito tabágico e de indivíduos que nunca fumaram, ao longo de um ano. O segundo objetivo foi avaliar a influência da condição de higiene bucal na velocidade de proliferação da mucosa bucal de sujeitos não expostos ao tabaco e ao álcool. MÉTODOS: Foram incluídos na amostra inicial 99 indivíduos. As coletas foram realizadas em borda de língua e assoalho de boca, em um momento inicial (baseline), após em média 6 meses (6 meses) e após 12 meses (12 meses). Os participantes foram divididos em três grupos de acordo com os seguintes critérios: Grupo Controle (GC) (n=44): indivíduos atendidos na Faculdade de Odontologia da UFRGS (FO-UFRGS), que nunca fumaram, e que ingeriam até 2 doses (28g) de álcool por semana. Grupo de indivíduos que abandonaram o tabagismo (GAT) (n=22): indivíduos em acompanhamento no Grupo de Apoio ao Fumante do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (GAF-HCPA), que fumavam no momento do inicial do trabalho, e que ao longo do tempo cessaram o hábito tabágico, alcoolistas ou não. Grupo de Tabagistas (GT) (n=33): indivíduos em acompanhamento no GAF-HCPA, que fumavam no momento do inicial do trabalho, e que não cessaram o hábito tabágico ao longo do acompanhamento, alcoolistas ou não. As amostras foram sujeitadas à técnica de AgNOR e quantificadas por três examinadores previamente calibrados. A média de AgNOR por núcleo (mAgNOR) e a porcentagem de células com mais de 3 AgNORs (pAgNOR>3) foram calculados nas 50 primeiras células, nucleadas, não sobrepostas, e bem distendidas. Os dados da condição de higiene bucal (perda dentária, sangramento gengival e profundidade de sondagem) foram obtidos nos registros dos prontuários disponíveis na FO-UFRGS. RESULTADOS: Na coleta baseline, os grupos expostos ao fumo (GAT e GT) apresentaram os valores da velocidade de proliferação celular maiores quando comparados aos indivíduos do GC. Ao longo do tempo, os indivíduos do GAT apresentaram uma redução da taxa de proliferação celular em ambos os sítios analisados, até atingir valores semelhantes aos do GC. Os resultados deste estudo, ainda, sugerem que a variação individual de mAgNOR dos indivíduos do GC, ao longo de um ano de acompanhamento, é de no máximo 23% para o sítio borda de língua, e de 18% para o sítio assoalho de boca. Indivíduos com mais de 3 dentes perdidos apresentam valores superiores de mAgNOR quando comparado com sujeitos com menos de 3 dentes perdidos, no sítio borda de língua (p3) were calculated from the first 50 well-arranged, non-overlapping nucleated cells. Oral health data (missing teeth, gingival bleeding and probing depth) were collected from each patient’s record. RESULTS: At baseline collection the exposed groups to tobacco (ATG and SG) had higher proliferation rate, compared to the CG. Over time, individuals of ATG showed a reduction in cell proliferation in both sites analyzed, reaching values similar to the CG. The present findings show that that individuals not exposed to carcinogens maintain a relatively steady cell proliferation rate in the oral mucosa, with up to 23% of variation in the border of tongue and 18% in the floor of the mouth. Furthermore, it was observed that individuals, not exposed to tobacco and alcohol, with more than three missing teeth presented significantly higher mAgNOR in the border of the tongue (p<0.01). CONCLUSIONS: Individuals not exposed to tobacco and alcohol maintain the count of AgNOR similar over 12 months, with a scarcely variation. More over the smoking habit cassation decreases the proliferation rate of oral mucosa over 1 year of follow-up

Longitudinal evaluation of the proliferation rates of cells from the oral mucosa in subjetics exposed and not exposed to tabaco and have ceased the smoking habit

OBJETIVO: O primeiro objetivo deste trabalho foi avaliar, através da citopatologia e da técnica de AgNOR, as taxas de proliferação celular da borda de língua e assoalho de boca de indivíduos que abandonaram o hábito tabágico e de indivíduos que nunca fumaram, ao longo de um ano. O segundo objetivo foi avaliar a influência da condição de higiene bucal na velocidade de proliferação da mucosa bucal de sujeitos não expostos ao tabaco e ao álcool. MÉTODOS: Foram incluídos na amostra inicial 99 indivíduos. As coletas foram realizadas em borda de língua e assoalho de boca, em um momento inicial (baseline), após em média 6 meses (6 meses) e após 12 meses (12 meses). Os participantes foram divididos em três grupos de acordo com os seguintes critérios: Grupo Controle (GC) (n=44): indivíduos atendidos na Faculdade de Odontologia da UFRGS (FO-UFRGS), que nunca fumaram, e que ingeriam até 2 doses (28g) de álcool por semana. Grupo de indivíduos que abandonaram o tabagismo (GAT) (n=22): indivíduos em acompanhamento no Grupo de Apoio ao Fumante do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (GAF-HCPA), que fumavam no momento do inicial do trabalho, e que ao longo do tempo cessaram o hábito tabágico, alcoolistas ou não. Grupo de Tabagistas (GT) (n=33): indivíduos em acompanhamento no GAF-HCPA, que fumavam no momento do inicial do trabalho, e que não cessaram o hábito tabágico ao longo do acompanhamento, alcoolistas ou não. As amostras foram sujeitadas à técnica de AgNOR e quantificadas por três examinadores previamente calibrados. A média de AgNOR por núcleo (mAgNOR) e a porcentagem de células com mais de 3 AgNORs (pAgNOR>3) foram calculados nas 50 primeiras células, nucleadas, não sobrepostas, e bem distendidas. Os dados da condição de higiene bucal (perda dentária, sangramento gengival e profundidade de sondagem) foram obtidos nos registros dos prontuários disponíveis na FO-UFRGS. RESULTADOS: Na coleta baseline, os grupos expostos ao fumo (GAT e GT) apresentaram os valores da velocidade de proliferação celular maiores quando comparados aos indivíduos do GC. Ao longo do tempo, os indivíduos do GAT apresentaram uma redução da taxa de proliferação celular em ambos os sítios analisados, até atingir valores semelhantes aos do GC. Os resultados deste estudo, ainda, sugerem que a variação individual de mAgNOR dos indivíduos do GC, ao longo de um ano de acompanhamento, é de no máximo 23% para o sítio borda de língua, e de 18% para o sítio assoalho de boca. Indivíduos com mais de 3 dentes perdidos apresentam valores superiores de mAgNOR quando comparado com sujeitos com menos de 3 dentes perdidos, no sítio borda de língua (p3) were calculated from the first 50 well-arranged, non-overlapping nucleated cells. Oral health data (missing teeth, gingival bleeding and probing depth) were collected from each patient’s record. RESULTS: At baseline collection the exposed groups to tobacco (ATG and SG) had higher proliferation rate, compared to the CG. Over time, individuals of ATG showed a reduction in cell proliferation in both sites analyzed, reaching values similar to the CG. The present findings show that that individuals not exposed to carcinogens maintain a relatively steady cell proliferation rate in the oral mucosa, with up to 23% of variation in the border of tongue and 18% in the floor of the mouth. Furthermore, it was observed that individuals, not exposed to tobacco and alcohol, with more than three missing teeth presented significantly higher mAgNOR in the border of the tongue (p<0.01). CONCLUSIONS: Individuals not exposed to tobacco and alcohol maintain the count of AgNOR similar over 12 months, with a scarcely variation. More over the smoking habit cassation decreases the proliferation rate of oral mucosa over 1 year of follow-up

Oral leukoplakia loss of heterozygosity : profiles comparison between different populations

OBJETIVO: A perda de heterozigosidade (LOH) é capaz de avaliar as alterações genéticas de lesões potencialmente malignas. Este ensaio avalia as regiões cromossômicas polimórficas que estão próximas ou na região dos oncogenes e genes supressores de tumor conhecidos. Os objetivos desta tese foram três principais: 1) Avaliar a frequência de perda de heterozigosidade de leucoplasias bucais com diferentes graus de severidade histopatológico em regiões cromossômicas próximas aos genes supressores de tumores. 2) Comparar e correlacionar o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos da British Columbia (Canadá) e Rio Grande do Sul (Brasil). 3) Avaliar os danos ao DNA que podem ocorrer durante o processamento e armazenamento das amostras de tecido parafinado. MÉTODOS: Amostras de leucoplasia bucal (com e sem displasias), fixadas em formalina tamponada 10% e parafinadas, obtidas nos laboratório de patologia bucal do Canadá e do Brasil foram selecionadas e microdissectadas. Procedeu-se a extração de DNA, amplificação por PCR das seguintes regiões microssatélites: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) e 17p13.1 (tp53 e D17S786). Após o produto do PCR foi separado e visualizado em gel de poliacrilamida por autoradiografia. RESULTADOS: Observou-se uma forte correlação entre o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos com leucoplasia bucal de ambos os países, independentemente da etnicidade. Além disso, pode-se notar que amostras de tecidos parafinados submetidos a mais de 24 horas de fixação em formalina tamponada 10% não serão, em sua maioria, boas amostras para análises de DNA. CONCLUSÃO: As lesões potencialmente malignas, provavelmente não são influenciadas em sua etiopatogênia pelas diferenças étnicas. O modelo de risco genético validado por Zhang e colaboradores (2012) parece ser aplicável em nossa comunidade, sendo necessário a sua validação, respeitando procedimentos técnicos padronizados. Ainda, vale ressaltar, que é imprescindível que a comunidade científica passe a adotar metodologias que preservem o material genético das peças dos bancos de tecidos parafinados, que são de inestimável valor para a pesquisa biomédica.OBJECTIVE: Loss of heterozygosity (LOH) can evaluate genetic alterations of pre-malignant lesions. This assay evaluates the chromosomal polymorphic regions that are present in tumor suppressor genes and oncogenes. The main objectives of this thesis were: 1) Evaluate the frequency of LOH of oral leukoplakias with different histopathological degrees at chromosomal regions of tumor suppressor genes. 2) Compare the profile of LOH between individuals from British Columbia (Canada) and Rio Grande do Sul (Brazil). 3) Evaluate the DNA damage that may occur with FFPE (formalin-fixed paraffin-embedded) tissues. METHODS: FFPE samples of oral leukoplakia (with and without dysplasia), obtained in Canadian and Brazilian oral pathology laboratories were selected and microdissected. DNA extraction and PCR amplification of the following microsatellite regions were conducted: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) and 17p13.1 (tp53 and D17S786). PCR products were separated and visualized on polyacrylamide gel by autoradiography. RESULTS: A strong correlation between the LOH profile among individuals with oral leukoplakia from both countries was observed, regardless ethnicity. Furthermore, FFPE tissues subjected to more than 24 hours of fixation in 10% buffered formalin are not, generally, good samples for DNA analysis. CONCLUSION: Pre-malignant lesions etiopathogenesis may not be influenced by ethnicity. The genetic risk model validated by Zhang et al. (2012) seems to be applicable in our community, requiring its own validation, respecting standardized procedures. Still, it is important to emphasize that it is imperative that a scientific community adopts methodologies that preserve the genetic material FFPE tissues that are an invaluable resource for biomedical research