Identification of the metalloproteinase Adamts1 and Nitric Oxide as new therapeutic targets in aortic diseases

Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 30-06-2017Esta tesis tiene embargado el acceso al texto completo hasta el 30-12-2018El principal origen de las enfermedades cardiovasculares es el remodelado vascular patológico. Este proceso es el causante de la degeneración quística de la media, que produce un debilitamiento de la pared aórtica y, por lo tanto, un aumento del riesgo de aneurismas. Un aneurisma es una dilatación localizada de una arteria y puede ser causa de una disección arterial. Algunos desórdenes genéticos, como es el caso del Síndrome de Marfan, tienen predisposición a padecer aneurismas aórticos. Actualmente no existe ningún tratamiento farmacológico para frenar o disminuir el tamaño del aneurisma y prevenir su disección. Trabajos previos indican que las metaloproteasas de matriz extracelular tienen un papel clave durante el proceso de remodelado vascular. Por otra parte, estudios anteriores muestran que la metaloproteasa extracelular Adamts1 podría tener un papel importante en la homeostasis y patología vascular. Sin embargo, el papel específico de Adamts1 en la homeostasis vascular y en el desarrollo de aneurismas aórticos es desconocido. El objetivo principal de este trabajo ha sido determinar, por una parte, los mecanismos y agentes moleculares por los cuales Adamts1 se expresa en la vasculatura y, por otra parte, las funciones de esta metaloproteasa en la homeostasis vascular y en el desarrollo de la patología de aneurismas aórticos. En primer lugar, dilucidamos que diferentes agentes remodeladores como son VEGF, Ang-II, IL1-β y TNF-α, inducen la expresión de Adamts1 de manera diferencial en células vasculares dependiente de estímulo. Esta regulación es debida a una activación diferencial de los factores de transcripción, de tal manera que, la activación de la ruta de señalización de Calcineurina-NFAT por VEGF y de la fosforilación de C/EBPβ por Ang-II, IL1β y TNF-α inducen el aumento de la expresión de Adamts1 en células vasculares in vitro e in vivo. Finalmente, hemos descrito el papel funcional de Adamts1 en la pared vascular. En este caso, hemos observado que los ratones deficientes en Adamts1 poseen características similares al Síndrome de Marfan como son: mayor longitud de huesos largos, hipercifosis, enfisema pulmonar y una mayor incidencia de aneurismas aórticos. Por otra parte, hemos analizado en detalle los mecanismos moleculares en los que esta metaloproteinasa está involucrada en aneurismas. En este caso, hemos comprobado que la deficiencia de Adamts1 produce un aumento de expresión de la óxido nítrico sintasa inducible (NOS2) y un aumento de óxido nítrico (NO). Posteriormente, hemos descrito que tanto el modelo de ratón del Síndrome de Marfan estudiado, como los pacientes con este desorden presentan niveles disminuidos de Adamts1 que correlacionan con niveles aumentados de NOS2 y NO. Además, hemos probado que la actividad de NOS2 sería la responsable de la aortopatía inducida en ambos modelos, tanto en los ratones con Síndrome de Marfan como en los deficientes para Adamts1, ya que inhibidores específicos de NOS2 reducen la dilatación aórtica y la degeneración de la media en ambos modelos de ratón. Por lo tanto, en este trabajo hemos descrito nuevos mecanismos moleculares y dianas terapéuticas que están presentes en enfermedades aórticas, y que hoy en día no tienen tratamiento. Todos estos resultados aportan nuevos mediadores como son ADAMTS1 y NOS2 en enfermedades aórticas, especialmente en el Síndrome de Marfan.The main cause of cardiovascular diseases is the pathological vascular remodeling. This process is the cause of the cystic medial degeneration of the aortic wall that produces a weakening and, therefore, an increased risk of aneurysms. An aneurysm is a localized dilation of an artery and may be causative of an arterial dissection. Some genetic disorders such as Marfan Syndrome are prone to aortic aneurysms. Currently, there is no pharmacological treatment to slow or decrease the size of the aneurysm and to prevent its dissection. Previous studies indicate that extracellular matrix metalloproteinases play a key role during the vascular remodeling process. Moreover, previous reports show that extracellular metaloprotease Adamts1 could play an important role in homeostasis and vascular pathology. However, the specific role of Adamts1 in vascular homeostasis and in the development of aortic aneurysm is unknown. The main objective of this work was to determine, on one hand, the mechanisms and molecular mediators by which Adamts1 is expressed in the vasculature and, on the other hand, the functions of this metalloprotease in vascular homeostasis and in the development of aortic aneurysm. First, we elucidate that different remodeling agents such as VEGF, Ang-II, IL1-β and TNF-α induce the expression of Adamts1 differentially in stimulus-dependent vascular cells. This regulation is due to a differential activation of transcription factors: VEGF through Calcineurin-NFAT pathway and the phosphorylation of C/EBPβ by Ang-II, IL1β and TNF-α induce a increase in the expression of Adamts1 in vascular cells in vitro and in vivo. Finally, we have described the functional role of Adamts1 in the vascular wall. In this case, we have observed that Adamts1-deficient mice have characteristics similar to Marfan Syndrome such as: longer bone length, hyperkinesis, and pulmonary emphysema and a higher incidence of aortic aneurysms. On the other hand, we have analyzed in detail the molecular mechanisms in which this metalloproteinase is involved in aneurysms. In this case, we have found that Adamts1 deficiency induces an increase of expression of inducible nitric oxide synthase (NOS2) and in Nitric Oxide (NO). Subsequently, we have found that both, mice and patients with Marfan Syndrome have decreased levels of Adamts1 that correlate with increased levels of NOS2 and NO. The activity of NOS2 would be responsible for the induced aortopathy in both models, since specific inhibitors of NOS2 reduce the aortic dilation and the degeneration of the Tunica Media in Marfan and Adamts1-deficient mice. Therefore, in this work we have described new molecular mechanisms and therapeutic targets that are present in aortic diseases, that nowadays have no treatment. All these results provide new mediators targets such as ADAMTS1 and NOS2 in aortic diseases, specifically in Marfan Syndrome

Construyendo una facultad de medicina innovadora en Portugal : la experiencia de la Universidad de Minho

Hallelujah!’, proclaimed in October 8, 2001, 27 years after the first proposal delivered to the Portuguese government, the project’s founder, Professor Joaquim Pinto Machado, at the beginning of educational activities at the School of Medicine (formerly School of Health Sciences), University of Minho (SM-UMinho), Braga, Portugal. This manuscript reviews the strategy implemented and the outcomes 15 years after welcoming the first medical students.‘¡Aleluya!’. Así, 27 años después de la primera propuesta presentada al gobierno portugués, el fundador del proyecto, el Profesor Joaquim Pinto Machado, proclamaba el 8 de octubre de 2001 el inicio de las actividades educativas de la nueva Facultad de Medicina (anteriormente Escuela de Ciencias de la Salud) de la Universidad de Minho (SM-UMinho), Braga, Portugal. Este artículo revisa la estrategia utilizada para la implementación de la nueva facultad y los resultados 15 años después de dar la bienvenida a los primeros estudiantes de medicinainfo:eu-repo/semantics/publishedVersio

Análise da evolução da legislação, como fator fundamental na melhoria das condições de trabalho

Dissertação apresentada para cumprimento dos requisitos necessários à obtenção do Grau de Mestre em Segurança e Higiene no TrabalhoO presente projeto de dissertação centra-se no estudo da evolução da legislação, como fator fundamental na melhoria das condições de trabalho tendo como agentes fundamentais de análise, Convenções da OIT, Diretivas-Quadro, e a sua influência na legislação nacional de segurança e saúde no trabalho. Procede-se a uma análise histórica da evolução das condições de trabalho, apresenta-se uma breve epítome legislativa portuguesa desde a revolução industrial até à entrada em vigor de primeira Lei-Quadro da segurança e saúde no trabalho em 1991, enunciando-se os principais diplomas e, evidenciando-se as razões da sua aplicação. Seguidamente é dissecada a importância das Organizações Internacionais (OIT e U.E.), em matéria de estabelecimentos de valores e regras de harmonização que são comuns aos países mais desenvolvidos, e que se vieram a revelar de extrema importância, para a legislação nacional, dando origem a um conjunto de normas que vieram revolucionar o sistema de SST no regime laboral português. No estudo elaborado revela-se a importância da introdução das Leis-Quadro, no panorama legislativo nacional, assumindo um papel estruturante no direito da SST, e estabelecendo a matriz orientadora de todos os seus intervenientes, o que lhe confere um caráter unitário, apesar de em torno delas, serem regularmente elaborados aspetos parciais da SST. Efetuou-se uma investigação do número de acidentes e dos índices de sinistralidade desde 1985 até 2010, tendo em apreciação os dados disponibilizados pelo GEE, ACT e Pordata, analisando a redução da sinistralidade laboral, nos setores de atividade com os mais elevados índices de sinistralidade, ou, que apresentam especial perigosidade. Este trabalho tem como objetivo verificar o impacto das Leis-Quadro, Leis setoriais, na diminuição dos acidentes de trabalho, estudando a sinistralidade antes e depois da sua aplicação, a nível global e setorial. De acordo com os resultados obtidos, podemos concluir que, com a aplicação efetiva de Leis-Quadro , de leis específicas aplicadas aos sectores com elevados índices de sinistralidade, com uma fiscalização hábil, prática e efetiva do acervo nacional, se verifica uma redução significativa no total de acidentes de trabalho e nos índices de incidência. Antes de concluir, revela-se a decomposição da atuação da ACT, avaliando a sua metodologia de intervenção (áreas de atuação, número de visitas, trabalhadores visitados, contraordenações aplicadas), através da averiguação dos Relatórios Anuais de Atividade, da Atividade Inspetiva, apresentando-se um conjunto de sugestões de medidas legislativas e estratégicas. Finalmente, apresenta-se as reflexões, conclusões e pistas de continuidade do trabalho em termos futuros.Abstract:This dissertation project focuses on the study of the evolution of the legislation as a fundamental factor in the improvement of the labour conditions, having as fundamental elements of analysis the ILO Conventions, Policy Framework and their influence on the national legislation regarding occupational safety and health. It is also presented a brief review of the Portuguese legislative history, since the Industrial Revolution until the entry into force of the First Framework Law of Safety and Health at Work in 1991, where the principal legislation was presented and the reasons for their application was evidenced. Then, it is analysed the importance of the International Organizations (ILO and EU) with regard to establishments values and harmonization rules are common to most developed countries, which have come to be of extreme importance for national legislation to give a set of standards that have revolutionized the OSH system in Portuguese work. In the study carried out, it is revealed the importance of the introduction of the Framework Law and the national regulatory picture, assuming a pivotal role in OSH law and establishing the guiding matrix of all its stakeholders , which gives a unitary character, although around them, are regularly drafted partial aspects of OSH. We conducted an investigation of the number of accidents and the accident rate from 1985 to 2010, taking into consideration the data provided by GEE, ACT and Pordata, analysing the reduction of occupational accidents in the sectors of activity with the highest levels of accidents, or that present particularly dangerous conditions. This study aims to determine the impact of Framework Laws and specific laws in the reduction of accidents, studying the claims before and after application, the global and specific level. According to the obtained results, we can conclude that with the effective implementation of Framework Laws and specific laws applied to sectors with high accident rates, along with a skilful, practical and effective supervision of the national library, there is a significant reduction in the total of accidents and incidence rates. Before concluding, it is clarified the ACT´s procedure, evaluating their intervention methodology (areas of operation , number of visits , visited workers applied offenses) , by investigating the Inspective the Annual Activity Reports Activity, presenting a set of suggestions for legislative and strategic measures. Finally, it is presented the reflections, conclusions and suggestions for the development of labour in the future

Abordagem criativa das isometrias para a criatividade em matemática

Mestrado em DidácticaA criatividade tem sido considerada o motor do progresso e todas as áreas disciplinares incluindo, portanto, a matemática devem contribuir para o seu desenvolvimento. A este não será alheio um ensino também ele criativo. No caso especifico das transformações geométricas isométricas, os ambientes de geometria dinâmica e, em particular, o GeoGebra, como complemento de ferramentas tradicionais, pode constituir-se uma mais valia nesse processo. Neste contexto, o presente trabalho propõe-se analisar o potencial de novas tecnologias no desenvolvimento de competências geométricas relacionadas com as isometrias e os frisos e, simultaneamente, no desenvolvimento da criatividade e das representações em relação à mesma em alunos do 1º ciclo do ensino básico. Para isso, desenvolveu-se um estudo de caso (exploratório) centrado em dois pares de alunos do 4º ano de escolaridade que resolveram autonomamente, por recurso àquelas tecnologias, uma bateria de tarefas essencialmente de natureza exploratória. Os dados foram recolhidos principalmente através das técnicas de inquirição, observação direta e participante e análise documental. A análise de conteúdo a que foram submetidos permitiu concluir que a implementação de uma abordagem criativa, centrada em sequências de tarefas a resolver com recurso a tecnologias tradicionais conjugadas com o GeoGebra, potencia uma apropriação mais sólida dos conceitos geométricos em causa e sua aplicação. Além disso, contribuiu ainda para o desenvolvimento de atitudes favoráveis em relação à matemática e à geometria em particular Os dados evidenciam, também, que tal abordagem permite obter indícios do desenvolvimento da criatividade nos alunos e de alterações a algumas das suas representações.Creativity has been considered the progress engine of knowledgement, therefore, all school subjects, including Mathematics, must contribute to its development, improving a creative teaching method. In the specific case of isometric geometric transformations, the dynamic geometry environments and, in particular, the Geogebra, as complement of traditional tools, can become one more value in this process. In this context, the present work pretends to analyze the potential of new technologies in the development of geometric skills related to isometries and the friezes. Simultaneously, we pretend to analyze the development of creativity and its representations in first cycle students of basic education. For this specific study of case (exploratory), data was centered in two pairs of students from the fourth year who had solved autonomously a battery of exploratory tasks using technology. The data was collected mainly through inquiry techniques, direct and participant / active observation and documentary analysis. Its content analysis allowed us to conclude that the implementation of a creative approach, centered on sequences of tasks to be solved using traditional technologies combined with GeoGebra, enhances a more solid appropriation of the focused geometric concepts and its application. Moreover, it has also contributed to the development of positive attitudes towards Mathematics and particularly to Geometry. The data has also showed us that with this approach we can obtain some evidence of the development of creativity in students and also some changes to some of their representations

Caracterização da fundação de infra-estruturas de transporte com recurso ao georadar : identificação das camadas de apoio

Estágio realizado no LNEC e orientado pelo Prof.ª Doutora Simona FontulTese de mestrado integrado. Engenharia Civil (Especialização em Geotecnia). Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 200

Purification and characterization of a thrombolytic enzyme produced by a new strain of Bacillus subtilis

Fibrinolytic enzymes with a direct mechanism of action and safer properties are currently requested for thrombolytic therapy. This paper reports on a new enzyme capable of degrading blood clots directly without impairing blood coagulation. This enzyme is also non-cytotoxic and constitutes an alternative to other thrombolytic enzymes known to cause undesired side effects. Twenty-four Bacillus isolates were screened for production of fibrinolytic enzymes using a fibrin agar plate. Based on produced activity, isolate S127e was selected and identified as B. subtilis using the 16S rDNA gene sequence. This strain is of biotechnological interest for producing high fibrinolytic yield and consequently has potential in the industrial field. The purified fibrinolytic enzyme has a molecular mass of 27.3 kDa, a predicted pI of 6.6, and a maximal affinity for Ala-Ala-Pro-Phe. This enzyme was almost completely inhibited by chymostatin with optimal activity at 48°C and pH 7. Specific subtilisin features were found in the gene sequence, indicating that this enzyme belongs to the BPN group of the S8 subtilisin family and was assigned as AprE127. This subtilisin increased thromboplastin time by 3.7% (37.6 to 39 s) and prothrombin time by 3.2% (12.6 to 13 s), both within normal ranges. In a whole blood euglobulin assay, this enzyme did not impair coagulation but reduced lysis time significantly. Moreover, in an in vitro assay, AprE127 completely dissolved a thrombus of about 1 cc within 50 min and, in vivo, reduced a thrombus prompted in a rat tail by 11.4% in 24 h compared to non-treated animals.This work was supported by Direcao Regional da Ciencia e Tecnologia - DRCT-Acores (Medida 2.2.2/I/025/2008) . Duarte Toubarro received a post-doctoral grant (SFRH/BPD/77483/2011; M3.1.a/F/050/2016) from FundacAo para a Ciencia e Tecnologia, Portugal; Jorge Frias received a doctoral grant (SFRH/BD/131698/2017) . The authors are grateful to Dr. Teresa Sampaio and Nelia Arruda, from Dr. Forjaz Sampaio Medical Center, for helping with the plasma anticoagulation assays. Duarte Toubarro and Nelson Simoes designed the study and helped with the paper's redaction. Jorge Frias performed the experiments, analyzed the data and wrote the paper. Alexandra Fraga and Jorge Pedrosa performed thrombolytic assays in a rat model. Claudia Botelho and Jose Teixeira participated in the discussion and redaction of the paper.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

A e-Saúde nas organizações, uma abordagem pela perspectiva dos enfermeiros. Estudo de caso de serviços hospitalares

O presente trabalho de investigação tem como principal objectivo perceber se os impactos da introdução, implementação e do desenvolvimento de projectos de SI/TIC afectam a percepção dos Enfermeiros quanto aos benefícios da e-Saúde, em Serviços Hospitalares. Para tal, foi aplicado um Inquérito por Questionário utilizando uma escala de Likert de quatro pontos, a um total de 111 Enfermeiros de uma Organização de Saúde, através da qual foram avaliados a Motivação para a utilização dos SI/TIC, decorrente da facilidade da utilização e da intenção efectiva de utilização pelos mesmos, os seus Impactos, positivos e negativos, as suas Barreiras, e os seus Benefícios. A análise dos dados quantitativos foi feita com recurso ao programa SPSS® Versão 18.0. Os resultados demonstram que, globalmente, a percepção dos Enfermeiros quanto aos benefícios da e-Saúde é afectada, de uma forma positiva, pela introdução, implementação e pelo desenvolvimento de projectos de SI/TIC, na Organização de Saúde estudada; ABSTRACT: This research work has as main objective to understand if the impacts of introduction, implementation and development project of IS/ICT affect the perceptions of nurses about the benefits of e-Health, in Hospital Services. To this end, we applied a survey by questionnaire using a Likert scale of four points, a total of 111 nurses from a Health Organization, through which we evaluated the motivation for the use of IS/ICT, due to the ease of use and the actual intention to use the same, their impacts, positive and negative, their barriers, and their benefits. The quantitative analysis was performed using the SPSS ® Version 18.0. The results show that, overall, the perception of nurses regarding the benefits of e-health is affected in a positive way, by the introduction, implementation and development projects of IS/ICT in the Health Organization study

As características da liderança na era digital

Mestrado em Ciências EmpresariaisO ritmo de mudança que as organizações enfrentam nos dias de hoje requer uma liderança mais flexível e com elevada adaptabilidade. Líderes com essas capacidades trabalham de maneira mais eficaz num ambiente em rápida mudança e altamente digital. Neste contexto digital, torna-se fundamental a necessidade de apresentar novas propostas de liderança, que sejam mais pertinentes e ajustadas às alterações da realidade das organizações. A literatura reforça a constante transformação do conceito de liderança e a sua elevada dependência do contexto onde é exercida. Desse modo, torna-se fundamental no atual contexto organizacional de transformação digital discutir as características da liderança e o seu impacto nas organizações e na sociedade. Tendo por base a análise de maturidade digital das organizações e das características dos seus líderes, pretende este estudo validar se o progresso rumo à maturidade digital altera a liderança nas organizações e identificar quais as características predominantes apenas num contexto de maturidade digital. Com esta amostra, os resultados deste estudo não permitem reforçar que o progresso rumo à maturidade digital modifica o perfil de liderança e as suas características nas organizações. Apesar da predominância nos diversos estádios de maturidade digital de características como a eficácia e motivação, a assertividade, o foco em resultados e o empowerment, com esta amostra não foi possível concluir que as mesmas são comuns apenas em organizações em maturação digital.Today's organizations must deal with a fast pace of change. This requires a more flexible and adaptable leadership. Leaders with these characteristics are more effective in a highly digital and fast changing environment. Within the context of this digital environment, it is paramount to bring forward new kinds of leadership. These new leaderships must be more adequate and tailored to the specific conditions present in each organization. The mutable nature of the concept of leadership and its high dependence on context is stressed in the literature. Therefore, it is fundamental to discuss the characteristics of leadership and its impact on organizations and society, especially under the spotlight of digital transformation. Drawing from an analysis on the digital maturity of organizations and the characteristics of their leaders, this study aims to: (i) determine if the route towards digital maturity shapes the leadership within organizations, and (ii) identify the key leadership characteristics required in a context of digital maturity. The results of this study do not reinforce that progress towards digital maturity changes the leadership profile and its characteristics in organizations. Despite the predominance of characteristics such as effectiveness and motivation, assertiveness, focus on results and empowerment, it was not possible to conclude from this sample that they are present only in organizations undergoing digital maturity.info:eu-repo/semantics/publishedVersio