Listeria monocytogenes biofilms produced under nutrient scarcity and cold stress: disinfectant susceptibility of persistent strains collected from the meat industry in Spain

Tese de mestrado em Microbiologia Aplicada, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2017Listeria monocytogenes é uma bactéria gram-positiva que pertence ao reino Bacteria, filo Firmicutes, classe Bacilli, ordem Bacillales, família Listeriaceae e género Listeria. Caracteriza-se por ser anaeróbia facultativa e por possuir baixo conteúdo em G+C (38%) no seu genoma, sendo caracterizada por bastonetes curtos não esporulados com 0,4 μm de diâmetro e com comprimento entre 1 a 1,5 μm. Esta bactéria é capaz de crescer na presença de concentrações elevadas de sal (10%), bem como em ambientes com grandes variações de pH (pH 4-9). Possui mobilidade entre 10 ºC e 25 ºC e tem a capacidade de crescer entre 1 e 45 ºC, com uma temperatura ótima entre 30 ºC e 37 ºC. Sendo um patogéneo psicrotrófico, consegue crescer a temperaturas de refrigeração (2-4 °C), o que dificulta o seu controlo na indústria alimentar. O carácter saprófito de L. monocytogenes torna este organismo muito versátil, tendo sido isolado de uma grande variedade de ambientes: solo, água, esgoto e fezes de animais, bem como de alimentos crus, processados e de produtos refrigerados prontos a comer (Ready-To-Eat (RTE)). Devido ao facto de os produtos RTE serem consumidos sem a necessidade de aquecimento prévio, estes apresentam um elevado risco para o consumidor. O aumento do consumo de produtos RTE, motivado pelas mudanças de hábitos dos consumidores, e as dificuldades existentes no controlo da temperatura, particularmente, na distribuição alimentar, contribuem para a recorrência deste microrganismo na indústria alimentar. A sua presença nos alimentos tem uma importância considerável, quer pela mortalidade que provoca, principalmente em crianças, idosos, grávidas e imunocomprometidos, quer pelos custos associados a despesas hospitalares, indemnizações e retiradas de produtos do mercado. Nas indústrias de processamento de alimentos, os equipamentos e utensílios são reconhecidos como os principais locais para a aderência microbiana e a formação de biofilme. A aderência de microrganismos a superfícies que estão em contacto com os alimentos, pode levar a potenciais problemas sanitários e económicos, uma vez que os biofilmes atuam como reservatórios de recontaminação. Praticamente todos os microrganismos são capazes de realizar esta aderência e formação de biofilme, sendo L. monocytogenes um dos patogéneos envolvidos em contaminações persistentes nas indústrias alimentares. Sabendo que a maioria dos microrganismos vive na forma de biofilme, urge identificar as vantagens desta estrutura séssil no processo de desinfeção, quando comparado com a forma planctónica. O principal objetivo deste trabalho foi assim comparar a suscetibilidade de biofilmes de estirpes persistentes de L. monocytogenes a dois compostos químicos - cloreto de benzalcónio (BAC) e ácido peracético (PAA) - e a um desinfetante comercial que contém PAA (P3-Oxonia). Foram testadas doze estirpes de L. monocytogenes, das quais nove estirpes recolhidas da indústria de carne espanhola e três estirpes laboratoriais usadas como controlos de resistência ao BAC. De forma a simular as condições ambientais nas indústrias de processamento alimentar, os biofilmes foram produzidos a 25 ºC durante 48 h e a uma temperatura de refrigeração (11 ºC), durante sete dias, em cupões de aço inoxidável (SSC). Para a produção dos biofilmes foram usadas condições que pretenderam similar, quer condições de limpeza mais eficaz, quer condições de limpeza menos eficaz, representada pela incubação dos biofilmes em meio rico diluído (TSB-YE/10) e meio rico (TSB-YE), respetivamente. Os biofilmes foram avaliados pela enumeração de células viáveis em cupões de aço inoxidável. Sempre que necessário, as concentrações e tempos de contato com os desinfetantes foram aumentados de forma a atingir o limiar de redução logarítmica de 4 Log (European Standard EN 13697 2001). Os resultados obtidos mostraram que diferentes condições nutritivas para o crescimento dos biofilmes não se refletiram em diferenças significativas (p > 0.5) na formação dos biofilmes, principalmente quando produzidos a 11 ºC. No entanto, os biofilmes incubados em TSB/10 (25 ºC) e em TSB (11 ºC) mostraram maior suscetibilidade ao BAC e ao P3-Oxonia, sugerindo um processo de desinfeção mais eficiente nestas condições de formação. Estes resultados enfatizam a necessidade de uma limpeza eficiente dos equipamentos e utensílios em uso na indústria alimentar, particularmente aqueles mantidos à temperatura ambiente. Quando comparada a suscetibilidade ao BAC de biofilmes crescidos em condições de riqueza ou de escassez de nutrientes, verificou-se maior diferenciação na resposta ao BAC em biofilmes crescidos sob stress nutritivo, do que em biofilmes crescidos em condições de grande disponibilidade de nutrientes. A concentração de P3-Oxonia necessária para atingir a redução de 4 Log em todas as estirpes em estudo foi de 2% (v/v) por 10 minutos. Os resultados dos ensaios de suscetibilidade ao BAC e ao PAA foram comparados com resultados anteriores de suscetibilidade, das mesmas estirpes, na forma planctónica. No geral, a concentração de BAC e o tempo de exposição dos biofilmes necessários para atingir a redução de 4 Log, foi de 5120 mg/L durante 5 minutos. As estirpes que mostraram maior resistência ao BAC no estado de biofilme incluíram estirpes previamente classificadas no estado planctónico, como resistentes ao BAC (MIC = 20 mg/L) e sensíveis ao BAC (MIC = 1,25-2,5). No caso do PAA, a concentração e o tempo de exposição mais elevados para atingir a redução de 4 Log foi de 2000 mg/L (5 minutos), tendo todas as estirpes a mesma suscetibilidade no estado planctónico (MIC = 200 mg/L). Os resultados anteriores mostram que, no caso do BAC e do PAA, as concentrações requeridas para atingir a redução de 4 Log no estado de biofilme foram consideravelmente elevadas quando comparadas com a resistência das células na forma planctónica. Isto confirma a ideia de que os biofilmes são dotados de uma maior resistência aos desinfetantes. A diferença considerável entre os valores de MIC do BAC e as concentrações necessárias para atingir a redução de 4 Log nas células do biofilme sugere que o BAC é um composto menos eficiente na eliminação de biofilmes, quando comparado com o PAA. Esta diferença de eficiência dos dois compostos poderá estar condicionada pelo diferente modo de ação, bem como por distintas respostas bacterianas ao stress. O PAA caracteriza-se pela sua capacidade oxidativa e pela elevada reatividade através da geração de aniões superóxido e radicais hidroxilo que afetam o DNA bacteriano e outros constituintes celulares. A sua baixa massa molecular constitui uma vantagem aquando da penetração no biofilme. Pelo contrário, o BAC é um agente que atua essencialmente na membrana celular e o estado de biofilme surge como uma barreira física à penetração do BAC nas células. Isto ocorre quer pela elevada massa molecular do BAC, quer pela presença do glicocálix, de natureza polianiónica, que neutraliza o BAC retendo-o, e reduzindo assim a sua capacidade de difusão na matriz do biofilme dificultando o alcance das células. Sete das 12 estirpes usadas neste trabalho possuem marcadores de resistência ao BAC: três possuem o gene qacH, enquanto quatro estirpes apresentam o gene bcrAB. No entanto, os ensaios de suscetibilidade dos biofilmes mostraram que das cinco estirpes mais resistentes ao BAC, apenas uma delas possui um destes marcadores genéticos. Estes resultados indicam que estirpes com marcadores de resistência como bcrABC e qacH não apresentam necessariamente menor suscetibilidade ao BAC no estado de biofilme. No presente trabalho, a ação do desinfetante foi considerada eficaz quando se registou uma redução de células do biofilme de 4 Log. Outros autores têm sugerido que tal eficácia apenas se verifica quando há uma redução de 5 Log. Considerando este requisito, a concentração mais elevada de BAC aplicada, 5120 mg/L (5 minutos), não seria suficiente para eliminar nenhum dos biofilmes das 12 estirpes testadas. Estes resultados sugerem que a persistência de L. monocytogenes na indústria alimentar poderá não estar relacionada com fenómenos de resistência das bactérias aos desinfetantes, mas com a aplicação de concentrações dos desinfetantes insuficientes para eliminar biofilmes. Os resultados aqui apresentados enfatizam a necessidade de trabalhos futuros com vista à clarificação da suscetibilidade de biofilmes a desinfetantes. A escolha do desinfetante, as condições de aplicação que incluem a concentração aplicada e o tempo de exposição deverão ser os adequados à erradicação de biofilmes na indústria alimentar.The contamination of food products with Listeria monocytogenes has been related to the presence of biofilms in the production lines, since biofilms can protect the cells from the action of sanitizers. The main goal of this work was to compare the susceptibility of biofilms of persistent strains of L. monocytogenes to the compounds benzalkonium chloride (BAC) and peracetic acid (PAA) and to a hydrogen peroxide/peracetic acid commercial disinfectant (P3-Oxonia). Twelve strains of L. monocytogenes, including nine BAC resistant and BAC sensitive persistent strains collected from the meat industry in Spain and three laboratory strains used as controls for BAC resistance, were used to compare the biofilm-forming ability and the disinfectant susceptibility of the strains. The assays tried to mimic food industry conditions. Consequently, biofilms were produced during 48 h at 25 ºC or during seven days at a refrigeration temperature (11 ºC), on stainless steel coupons (SSC), in dirty and clean biofilm-forming conditions, respectively in tryptone soy yeast extract broth (TSB-YE) and in nutrient-limiting, 1/10 diluted TSB-YE. Biofilms were evaluated by enumeration of viable cells on SSC. Concentration and contact time of the disinfectants were raised as needed to achieve the 4 Log reduction threshold in accordance with the European Standard EN 13697 2001. The results indicate that, in general, nutrient growth conditions and temperature had no significant effect (p>0.05) on biofilm formation. Biofilm growth conditions in TSB-YE/10 at 25 ºC and in TSB-YE at 11 ºC showed to be the ones where disinfection treatment with BAC, and particularly with P3, was more effective. Moreover, biofilms formed under nutritional stress (clean condition) tend to differentiate more their response to BAC, than biofilms grown in rich nutrient conditions (dirty condition). The concentrations and contact times of BAC required to achieve the 4 Log reduction threshold achieved 5120 mg/L for 5 min. Among the biofilms that showed the highest resistance to BAC, strains classified in planktonic as BAC resistant (MIC = 20 mg/L) and BAC sensitive (MIC = 1.25-5 mg/L) were included. Concentrations and contact times of PAA required to achieve the same 4 Log reduction threshold reached 2000 mg/L for 5 min, while all strains showed the same susceptibility to PAA in the planktonic state (MIC = 200 mg/L or 1600 mg/L depending on the method used). Concentrations and contact times of P3-Oxonia to achieve the 4 Log reduction threshold achieved the 2% (v/v) for 10 min. The results presented here emphasize the need for an efficient cleaning of equipment and utensils in the food industry especially those maintained at room temperature. The considerable difference between the referenced MICs of BAC and the concentrations required to achieve the 4 Log reduction in the biofilm form suggests that BAC is less effective than PAA in eliminating biofilm cells. PAA mode of action and its small molecular size constitute possible advantages for its efficiency. Overall, the resistant or sensitive character of planktonic L. monocytogenes cells to BAC did not dictate their response in biofilm form

Co-creation as a tool to develop trustand intention to purchase green products

Consumers expect companies to become more ecological conscious and to develop more green alternatives products. However, the skepticism towards companies’ green claims, have putting consumers unwilling to trust and purchase this type of products. Literature shows that co-creation increases levels of trust and intention to purchase among consumers. Individuals tend to have higher levels of attraction towards people with similar attitudes. Furthermore, companies that develop co-creation are perceived as being more consumercentric, causing positive attitudes that will lead to higher intentions to purchase. However there is little information about the impact of co-creation is the green industry. Therefore, this investigation aims to examine if using co-creation in green products will lead to higher levels of trust and intention to purchase. Through an online survey, our findings where that consumers had a higher level of trust as well as higher level of intention to purchase when it was said the product was developed by co-creation than when it was mentioned that the product was only developed by the company. Previous studies had reported that perceived brand greenness causes impact on trust and intention to purchase, however, surprisingly, our results confirm that brand greenness didn’t have any impact. By understanding the outcomes of this study, companies can start using co-creation in the development of green products to foster trust and sales. Limitations and suggestions for future research are also discussed.Os consumidores esperam que empresas se tornem mais ecológicas e desenvolvam produtos ecológicos. No entanto, o ceticismo em torno das suas reivindicações ambientais tem posto os consumidores reticentes em confiar e comprar produtos verdes. Literatura mostra que a cocriação aumenta os níveis de confiança e intenção de compra dos consumidores. Indivíduos tendem a deter elevados níveis de atração por pessoas com atitudes semelhantes. Além disso, as empresas que desenvolvem cocriação são percebidas como sendo mais centradas no consumidor, causando atitudes positivas que levarão a uma maior intenção de compra. No entanto, pouca informação existe sobre o impacto da cocriação na indústria verde. Esta investigação pretende analisar se utilizar cocriação em produtos verdes irá aumentar os níveis de confiança e intenção de compra. Através de um questionário online, resultados mostram que os consumidores tiveram níveis de confiança e intenção de compra mais elevados quando foi referido que o produto foi desenvolvido através de cocriação do que quando foi mencionado que o produto só foi desenvolvido pela empresa. Estudos anteriores indicam que a perceção da marca como sendo verde causa impacto na confiança e intenção de compra, no entanto, os nossos resultados confirmam que a marca não teve qualquer impacto. Os resultados deste estudo poderão impulsionar empresas na utilização de cocriação no desenvolvimento de produtos verdes, com o objetivo de promover confiança e vendas. Limitações e sugestões para futuras pesquisas também serão discutida

Interdisciplinary Week in Game Design: A Learning Experience

[EN] Interdisciplinarity promotes competencies like asking meaningful questions about a complex problem, examine, and synthesize multiple sources of information, methods, and perspectives, in order to integrate knowledge and ways of thinking across two or more established disciplines to produce cognitive advancement. The Interdisciplinary Week of Game Design challenges the students to demonstrate an interdisciplinary understanding of a complex problem that students define, organized by teams, having as its starting point a given theme. Teamwork between members of different academic years favors the sharing of knowledge among peers with different aptitudes, technical skills, and degrees of competence.Barroso, B.; Barbedo, I. (2023). Interdisciplinary Week in Game Design: A Learning Experience. En 9th International Conference on Higher Education Advances (HEAd'23). Editorial Universitat Politècnica de València. 263-271. https://doi.org/10.4995/HEAd23.2023.1637526327

Interdisciplinary week in game design: a learning experience

Interdisciplinarity promotes competencies like asking meaningful questions about a complex problem, examine, and synthesize multiple sources of information, methods, and perspectives, in order to integrate knowledge and ways of thinking across two or more established disciplines to produce cognitive advancement. The Interdisciplinary Week of Game Design challenges the students to demonstrate an interdisciplinary understanding of a complex problem that students define, organized by teams, having as its starting point a given theme. Teamwork between members of different academic years favors the sharing of knowledge among peers with different aptitudes, technical skills, and degrees of competence.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Microbiological evaluation in oral health units: detection of antibiotic resistant bacteria

Abstract in proceedings of the Fourth International Congress of CiiEM: Health, Well-Being and Ageing in the 21st Century, held at Egas Moniz’ University Campus in Monte de Caparica, Almada, from 3–5 June 2019.This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Genetic aetiology of glycaemic traits: approaches and insights.

Glycaemic traits such as fasting and post-challenge glucose and insulin measures, as well as glycated haemoglobin (HbA1c), are used to diagnose and monitor diabetes. These traits are risk factors for cardiovascular disease even below the diabetic threshold, and their study can additionally yield insights into the pathophysiology of type 2 diabetes. To date, a diverse set of genetic approaches have led to the discovery of over 97 loci influencing glycaemic traits. In this review, we will focus on recent advances in the genetic aetiology of glycaemic traits, and the resulting biological insights. We will provide a brief overview of results ranging from common, to low- and rare-frequency variant-trait association studies, studies leveraging the diversity across populations, and studies harnessing the power of genetic and genomic approaches to gain insights into the biological underpinnings of these traits

Satisfacción profesional y competencia emocional de enfermeras en servicios de admisión hospitalar

Introduction: Nurses’ job satisfaction and emotional competence are important for the safety and quality of the care provided so it is essential to measure them. Objectives: To characterize nurses’ job satisfaction and emotional competence and to evaluate the association between both variables and the nurses’ sociodemographic and professional characteristics. Methods: Descriptive-correlational, exploratory, cross-sectional quantitative study. Application of a questionnaire to 44 nurses in a hospital in the north of Portugal which includes sociodemographic and professional characterization, “Escala da Satisfação Profissional” (Job Satisfaction Scale); e “Escala Veiga de Competência Emocional” (Emotional Competence Veiga Scale). The questionnaire was validated for this study. Results: The results show that nurses are moderately satisfied professionally and perceive themselves with moderate emotional competence. Nurses’ age is positively correlated with self-motivation. Conclusion: It is essential that health organizations systematically assess nurses’ job satisfaction and emotional competence in order to implement interventions that enhance these two variables, such as nursing clinical supervision programs.Introdução: A satisfação profissional e a competência emocional dos enfermeiros são preponderantes para a segurança e qualidade dos cuidados prestados, tornando-se indispensável a sua avaliação. Objetivos: Caracterizar a satisfação profissional e a competência emocional dos enfermeiros e avaliar a associação entre estas duas variáveis e as características sociodemográficas e profissionais dos enfermeiros. Métodos: Estudo descritivo-correlacional, exploratório, transversal do tipo quantitativo. Procedeu-se à aplicação de um questionário a 44 enfermeiros num hospital do norte de Portugal que engloba: caracterização sociodemográfica e profissional; “Escala da Satisfação Profissional”; e “Escala Veiga de Competência Emocional”, sendo as escalas testadas e validadas. Resultados: Os resultados revelam que os enfermeiros encontram-se moderadamente satisfeitos a nível profissional, e percecionam-se com moderada competência emocional. A idade dos enfermeiros está positivamente correlacionada com a competência emocional de automotivação. Conclusão: É essencial que as organizações de saúde avaliem de forma sistemática a satisfação profissional e a competência emocional dos enfermeiros, implementando intervenções que potenciem estas duas variáveis, nomeadamente programas de supervisão clínica em enfermagem.Introducción: La satisfacción profesional y la competencia emocional de las enfermeras son primordiales para la seguridade y calidad de la atención brindada, por lo que es fundamental medirlas. Objetivos: Caracterizar la satisfacción profesional y la competencia emocional de las enfermeiras y evaluar la asociación entre estas dos variables y las caracteristicas sociodemográficas y profesionales de las enfermeras. Métodos: Estudio cuantitativo descriptivo-correlacional, exploratorio, transversal de tipo cuantitativo. Aplicación de un cuestionario a 44 enfermeras de un hospital del norte de Portugal, que incluye: caracterización sociodemográfica e y profesional; “Escala da Satisfação Profissional” y “Escala Veiga de Competência Emocional”. El cuestionario fue validado para este estúdio. Resultados: Los resultados revelan que las enfermeras están moderadamente satisfechas a nivel profesional y se percien a sí mismas com moderada competencia emocional. La edad de las enfermeras se correlaciona positivamente con la automotivación emocional. Conclusión: Es fundamental que las organizaciones de salud evalúen sistemáticamente la satisfacción laboral y la competencia emocional de las enfermeras, implementando intervenciones que potencien estas dos variables, a saber, los programas de supervisión clínica de enfermería.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Estudo paleoecológico e biostratigráfico do Cenomaniano da região de Lisboa (Lousa-Salemas) baseado em ostracodos e microfácies

Tese de mestrado em Geologia, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, em 2018A sucessão exposta no corte de Lousa-Salemas, maioritariamente do Cenomaniano médio, é caracterizada por alternância entre margas, calcários margosos e calcários compactos, fossilíferos, ricos em ostracodos, moluscos, algas e foraminíferos bentónicos, reflectindo ambiente sobretudo lagunar a marinho pouco profundo. Neste estudo, foram identificados fósseis de vários organismos, como moluscos bivalves (incluindo ostreídeos), gastrópodes, ostracodos (num total de 42 espécies), serpulídeos, equinodermes, algas calcárias (dasicladáceas, carófitas e outras), foraminíferos aglutinados (textularídeos indiferenciados, lituolídeos e outros aglutinados grosseiros), foraminíferos porcelanosos (miliolídeos em geral, incluindo alveolinídeos), foraminíferos hialinos e calpionelídeos. Para além dos fósseis, foram ainda identificados extraclastos de quartzo e raros feldspatos, intraclastos, pelóides e raros oncóides, porosidade e evidências de pedogénese e exposição subaérea, como rizoconcreções, “root-mat”, ferruginização e estruturas microalgais. No estudo dos ostracodos foram identificadas várias espécies típicas de meio lagunar marinho, salobro, mesmo oligohalino. A espécie Fossocytheridea merlensis domina a maior parte dos níveis da sequência de Lousa-Salemas, e a sua grande abundância, muitas vezes aparecendo em monoespecificidade, indica períodos salobros na laguna. O aparecimento das espécies Heterocypris berthoui e Globotalicypridea vulcanosa indicam meio oligohalino. Por outro lado, o aparecimento de espécies marinhas ornamentadas como Paracaudites (Dumontina) grekoffi, Cythereis cacemensis supralmargemensis e Trachyleberidea sp. e de espécies de carapaça lisa e fina como Cytherella aff. medwayensis, Asciocythere aff. burgausensis e Bairdoppilata aff. pseudoseptentrionalis, bem como diminuição ou mesmo desaparecimento de F. merlensis, indicam meio lagunar marinho. Relativamente ao estudo das microfácies, verificou-se que a maioria das lâminas estudadas varia entre biomicrite a bioextramicrite wackestone e packstone, embora também se tenha verificado a existência de grainstones, mudstones e boundstones, cujos principais elementos figurados carbonatados e outros aspectos particulares composicionais presentes nas lâminas indicam o meio em que o nível se formou. Os níveis lagunares salobros caracterizam-se por apresentarem abundantes moluscos (inclusive ostreídeos), ostracodos e alguns foraminíferos aglutinados grosseiros (sobretudo Buccicrenata aff. hedbergi, Pseudocyclammina rugosa, Charentia cuvillieri e Daxia cenomana), juntamente com extraclastos de quartzo e alguma ferruginização incipiente. Verificou-se que quando há aumento de miliolídeos (por exemplo Quinqueloculina robusta e Nummoloculina regularis) face aos aglutinados grosseiros, juntamente com aparecimento de abundantes fragmentos de equinodermes e de dasicladáceas (Neomeris cretacea, Heteroporella lepina e Salpingoporella hasi), estes níveis caracterizam meio lagunar marinho. Por outro lado, a ausência ou fraca representação de bio-elementos, aumento significativo dos extraclastos (sobretudo quartzo) e a pedogénese intensa com exposição subaérea associada (como “root-mat”, rizoconcreções e ferruginização abundante), indicam níveis de meio margino-continental. No topo da sequência ocorrem níveis em que há grande aumento de miliolídeos, incluindo o aparecimento de espécies do género Praealveolina, indicando a passagem para meio marinho pouco profundo de plataforma interna aberta. Com base nos dois tipos de estudos efectuados observou-se então, ao longo de toda a sequência, intercalação entre três ambientes principais, lagunar margino-continental, lagunar salobro, lagunar marinho, passando no topo a um quarto ambiente, marinho aberto, pouco profundo, que indica a passagem do Cenomaniano médio para o Cenomaniano superior. O ambiente lagunar salobro caracteriza-se pela abundância em F. merlensis, e ocasionalmente também por Perissocytheridea estribeirensis ou Gen. Ind. sp. 3, juntamente com bivalves (incluindo ostreídeos) e foraminíferos aglutinados. O ambiente lagunar marinho caracteriza-se pela diminuição ou desaparecimento da espécie F. merlensis e pelo aparecimento de espécies tipicamente marinhas dos géneros Cythereis, Cytherella, Bairdoppilata e Asciocythere, e das espécies P. (Dumontina) grekoffi, Trachyleberidea sp. e Paracypris sp., bem como pela presença abundante de miliolídeos, equinodermes, dasicladáceas e por vezes foraminíferos hialinos. O ambiente lagunar margino-continental é caracterizado por pedogénese e exposição subaérea, podendo chegar a ser oligohalino quando se verifica a presença das espécies H. berthoui e G. vulcanosa, juntamente com F. merlensis e Lycopterocypris? sp.. O aparecimento dos alveolinídeos e abundância em outros macro e microorganismos marinhos marca a passagem para meio marinho pouco profundo, aberto. A sequência de Lousa-Salemas é assim uma boa evidência da transgressão progressiva que terá ocorrido durante o Cenomaniano na região de Lisboa.The Lousa-Salemas section, mostly of middle Cenomanian age, is characterized by an alternation of fossiliferous marls, marly limestones and limestones, rich in ostracods, molluscs, calcareous algae and benthic foraminifera, reflecting coastal lagoon to open marine environments. In this study, several organisms were identified, such as bivalves (including oysters), gastropods, ostracods (a total of 42 species), serpulids, echinoderms, calcareous algae (dasycladales, charophytes, and others), agglutinated foraminifers (undetermined textularids, lituolids and other), porcellaneous foraminifers (miliolids in general and alveolinids), hyaline foraminifera and calpionelids. In addition to the fossils, quartz and rare feldspars, intraclasts, pellets and rare oncoids were also identified, as well as porosity and evidence of pedogenesis and subaerial exposure, such as rhizocretions, root-mat, ferruginization and microbial-algal structures. In the study of the ostracods several species were identified, typical of marine, brackish or oligohaline environments. The species Fossocytheridea merlensis dominates most of the levels of the studied sequence, and its great abundance (often appearing in monospecificity), indicates brackish periods in the lagoon. The appearance of the species Heterocypris berthoui and Globotalicypridea vulcanosa indicate oligohaline environment. On the other hand, the appearance of ornamented species such as Paracaudites (Dumontina) grekoffi, Cythereis cacemensis supralmargemensis and Trachyleberidea sp. and of smooth and thin carapace species such as Cytherella aff. medwayensis, Asciocythere aff. burgausensis and Bairdoppilata aff. pseudoseptentrionalis, as well as the decreasing or even disappearance of F. merlensis, indicates a marine lagoon setting. In the study of microfacies, most of the samples studied range from biomicrite to bioextramicrite wackestones and packstones, although there are also grainstones, mudstones and boundstones present in the section. The identification of the carbonate elements and other particular compositional aspects can provide the environment in which the level was formed. Thus, four main environments were established: marginal lagoon with continental exposure, brackish lagoon, marine lagoon and open shallow-marine. The brackish levels are characterized by abundant molluscs (including oysters), ostracods and some coarsely-walled agglutinated foraminifera (mainly Buccicrenata aff. hedbergi, Pseudocyclammina rugosa, Charentia cuvillieri and Daxia cenomana), and also by grains of quartz and some incipient ferruginization. On the other hand, when there is an increase in miliolids (for example, Quinqueloculina robusta and Nummoloculina regularis) and appearance of abundant fragments of echinoderms and dasycladales (Neomeris cretacea, Heteroporella lepina and Salpingoporella hasi), this characterizes as a marine lagoon environment. The absence or weak representation of bio-elements, the significant increase of extraclasts (mainly quartz) and the pedogenesis with associated subaerial exposure (such as root-mat, rhizoconcretions and abundant ferruginization) indicates marginal environment with a strong continental influence in the lagoon. At the top of the sequence there is a large increase of miliolids, including the appearance of species of the genus Praealveolina, indicating the transition into an open shallow-marine environment. Based on the two type of studies, an intercalation of three main environments was recognized throughout the sequence, marginal lagoon with continental exposure, brackish lagoon and marine lagoon, and at the top of the succession a fourth environment was also observed, open shallow-marine, that indicates the transition from middle Cenomanian to upper Cenomanian. The brackish lagoon is characterized by abundance of F. merlensis and occasionally Perissocytheridea estribeirensis and Gen. Ind. Sp. 3, along with bivalves (including oysters) and agglutinated foraminifera. The marine lagoon is characterized by the decrease or disappearance of F. merlensis species and by the appearance of typical marine species belonging to the genus Cythereis, Cytherella, Bairdoppilata and Asciocythere along with other marine species such as P. (Dumontina) grekoffi, Trachyleberidea sp. and Paracypris sp., as well as abundant presence of miliolids, echinoderms, dasycladales and hyaline foraminifera. The marginal with continental exposure lagoon is characterized by pedogenesis and subaerial exposure, sometimes with oligohaline water when in the presence of the ostracods H. berthoui and G. vulcanosa as well as F. merlensis and Lycopterocypris? sp.. The appearance of alveolinids and abundance in other marine macro and microorganisms indicates an open shallow-marine environment. Thus, the sequence of Lousa-Salemas is an evidence of the progressive marine transgression that has occurred during Cenomanian times in the Lisbon region