Expressão de genes associados à obesidade em testículos e esperma de ratos sujeitos a restrição calórica e administração de GLP-1

Caloric restriction (CR), due to its negative energy balance and GLP-1, for being an incretin, constitute two weight loss protocols that remain poorly investigated, particularly its impact on male reproductive function, whose proper functioning depends on a balanced energy homeostasis. That energy homeostasis has been related to genes linked to energy metabolism control, namely the obesity-related genes (ORGs), such as fat mass and obesity associated (FTO), melanocortin-4 receptor (MC4R), glucosamine-6- phosphate deaminase 2 (GNPDA2) and transmembrane protein 18 (TMEM18). Thus, this project aimed to use an animal model to study the potential of CR and GLP-1 administration in the regulation of those ORGs expression in testes and sperm of Wistar rats and verify if there is an impact on sperm quality. Firstly, we observed that CR promoted a lower weight gain and a decrease in insulin resistance. On the other hand, GLP-1 administration, beyond the expected increase in active GLP-1 levels, did not promote any change in glucose metabolism, hormonal profile and consequently in body weight. Furthermore, CR promoted an increase in sperm head defects, while the GLP-1 administration improved sperm morphology. Regarding the ORGs we observed the presence of FTO, MC4R and TMEM18 transcripts in rat testes and identified those transcripts, for the first time, in rat sperm. Additionally, we identified, for the first time, the presence of GNPDA2 transcripts in rat testes and sperm. The corresponding proteins were also identified in rat testes, being that they all presented distinct cellular locations. CR and GLP-1 administration promoted an increase in the expression of the ORGs in testes, however in spermatozoa the expression was not altered. We also identified the presence of NFE2L2 (encodes for an important antioxidant transcription factor) transcripts in rat testes and sperm and verified that their abundance is increased, in testes, by CR and GLP-1 administration. Then we explored, individually, the role the ORGs at the testicular and sperm levels, namely in the response to CR and GLP-1 administration and we obtained some clues related to the potential involvement of each of the ORGs in the male reproductive function. Overall, we were able to perceive that CR and GLP-1 administration promoted a general association of all ORGs with an improvement in oxidative status both in testes and sperm.A restrição calórica (CR), pelo seu balanço energético negativo e o GLP-1, por ser uma incretina, constituem dois protocolos de perda de peso, que permanecem pouco investigados, principalmente no que toca ao seu impacto na função reprodutiva masculina, cujo correto funcionamento depende de uma homeostase energética equilibrada. Essa homeostase energética tem sido relacionada a genes ligados ao controlo do metabolismo energético, nomeadamente os genes relacionados à obesidade (ORGs), como gene de obesidade e de massa de gordura associada (FTO), recetor de melanocortina-4 (MC4R), glucosamina-6-fosfato desaminase 2 (GNPDA2) e proteína transmembranar 18 (TMEM18). Assim, este projeto teve como objetivo utilizar um modelo animal para estudar o potencial da CR e da administração de GLP-1 na regulação da expressão desses ORGs nos testículos e esperma de ratos Wistar e verificar se há impacto na qualidade espermática. Primeiramente, observamos que a CR promoveu menor ganho de peso e diminuição da resistência à insulina. Por outro lado, a administração de GLP-1, além do esperado aumento nos níveis de GLP-1 ativo, não promoveu qualquer alteração no metabolismo da glucose, no perfil hormonal e consequentemente no peso corporal. Para além disso, a CR promoveu um aumento nos defeitos da cabeça dos espermatozoides, enquanto a administração de GLP-1 melhorou a morfologia espermática. Em relação aos ORGs, observamos a presença de transcritos de FTO, MC4R e TMEM18 em testículos de ratos e identificamos esses transcritos, pela primeira vez, em esperma de ratos. Além disso, identificamos, pela primeira vez, a presença de transcritos GNPDA2 em testículos e esperma de ratos. As proteínas correspondentes também foram identificadas em testículos de ratos, sendo que todas apresentavam localizações celulares distintas. A CR e a administração de GLP-1 promoveram um aumento na expressão dos ORGs nos testículos, porém no esperma a expressão não foi alterada. Também identificamos a presença de transcritos de NFE2L2 (codifica para um importante fator de transcrição antioxidante) em testículos e esperma de ratos e verificamos que sua abundância é aumentada nos testículos, pela CR e administração de GLP-1. Em seguida, exploramos, individualmente, o papel dos ORGs nos níveis testicular e espermático, nomeadamente na resposta à CR e à administração de GLP-1 e obtivemos algumas pistas relacionadas com o envolvimento potencial de cada um dos ORGs na função reprodutiva masculina. No geral, pudemos perceber que as duas intervenções promoveram uma associação geral de todos os ORGs com uma melhoria no estado oxidativo dos testículos e esperma.Mestrado em Bioquímic

Public keys quality

Dissertação de mestrado em Matemática e ComputaçãoThe RSA cryptosystem, invented by Ron Rivest, Adi Shamir and Len Adleman ([Rivest et al., 1978]) is the most commonly used cryptosystem for providing privacy and ensuring authenticity of digital data. RSA is usually used in contexts where security of digital data is priority. RSA is used worldwide by web servers and browsers to secure web traffic, to ensure privacy and authenticity of e-mail, to secure remote login sessions and to provide secure electronic creditcard payment systems. Given its importance in the protection of digital data, vulnerabilities of RSA have been analysed by many researchers. The researches made so far led to a number of fascinating attacks. Although the attacks helped to improve the security of this cryptosystem, showing that securely implementing RSA is a nontrivial task, none of them was devastating. This master thesis discusses the RSA cryptosystem and some of its vulnerabilities as well as the description of some attacks, both recent and old, together with the description of the underlying mathematical tools they use. Although many types of attacks exist, in this master thesis only a few examples were analysed. The ultimate attack, based in the batch-GCD algorithm, was implemented and tested in the RSA keys produced by a certificated Hardware Security Modules Luna SA and the results were commented. The random and pseudorandom numbers are fundamental to many cryptographic applications, including the RSA cryptosystems. In fact, the produced keys must be generated in a specific random way. The National Institute of Standards and Technology, responsible entity for specifying safety standards, provides a package named "A Statistical Test Suit for Random and Pseudorandom Number Generators for Cryptography Applications" which was used in this work to test the randomness of the Luna SA generated numbers. All the statistical tests were tested in different bit sizes number and the results commented. The main purpose of this thesis is to study the previous subjects and create an applications capable to test the Luna SA generated numbers randomness, a well as evaluate the security of the RSA. This work was developed in partnership with University of Minho and Multicert.O RSA, criado por Ron Rivest, Adi Shamir e Len Adleman ([Rivest et al., 1978]) é o sistema criptográfico mais utilizado para providenciar segurança e assegurar a autenticação de dados utilizados no mundo digital. O RSA é usualmente usado em contextos onde a segurança é a grande prioridade. Hoje em dia, este sistema criptográfico é utilizado mundialmente por servidores web e por browsers, por forma a assegurar um tráfego seguro através da Internet. É o sistema criptográfico mais utilizado na autenticação de e-mails, nos inícios de sessões remotos, na utilização de pagamentos através de cartões multibanco, garantindo segurança na utilização destes serviços. Dada a importância que este sistema assume na proteção da informação digital, as suas vulnerabilidades têm sido alvo de várias investigações. Estas investigações resultaram em vários ataques ao RSA. Embora nenhum destes ataques seja efetivamente eficaz, todos contribuíram para um aumento da segurança do RSA, uma vez que as implementações de referência deste algoritmo passaram a precaver-se contra os ataques descobertos. Esta tese de mestrado aborda o sistema criptográfico RSA, discutindo algumas das suas vulnerabilidades, assim como alguns ataques efetuados a este sistema, estudando todos os métodos matemáticos por estes usados. Embora existam diversos ataques, apenas alguns serão abordados nesta tese de mestrado. O último ataque, baseado no algoritmo batch-GCD foi implementado e foram feitos testes em chaves RSA produzidas por um Hardware Security Module Luna SA certificado e os resultados obtidos foram discutidos. Os números aleatórios e pseudoaleatórios são fundamentais a todas as aplicações criptográficas, incluindo, portanto, o sistema criptográfico RSA. De facto, as chaves produzidas deverão ser geradas com alguma aleatoriedade intrínseca ao sistema. O Instituto Nacional de Standards e Tecnologia, entidade responsável pela especificação dos standards de segurança, disponibiliza um pacote de testes estatísticos, denominado por "A Statistical Test Suit for Random and Pseudorandom Number Generators for Cryptography Applications". Estes testes estatísticos foram aplicados a números gerados pelo Luna SA e os resultados foram, também, comentados. O objetivo desta tese de mestrado é desenvolver capacidade de compreensão sobre os assuntos descritos anteriormente e criar uma aplicação capaz de testar a aleatoriedade dos números gerados pelo Luna SA, assim como avaliar a segurança do sistema criptográfico RSA. Este foi um trabalho desenvolvido em parceria com a Universidade do Minho e com a Multicert

Characterisation of exudates, growth and performance of brassica rapa lines under controlled environment conditions and the impact of soil microorganisms on the uptake of phosphate by the plant

O fósforo (P) é um nutriente de elevado interesse e procura pelas indústrias agrícolas e um fator limitante nos solos de produções agrícolas como por exemplo Brassica rapa. Porém a presença de P no solo não significa que se encontra disponível para absorção pelas plantas. Para a resolução deste problema, os profissionais recorrem à adição de P nos solos, acabando por levar a problemas de eutrofização, quando este é perdido no meio. As fosfatases excretadas pelas plantas e microrganismos participam numa das reações envolvidas na absorção de P pelas plantas. No caso da indústria agrícola, se não houver uma evolução nos procedimentos aplicados atualmente, com a demanda atual e/ou futura, a escassez de nutrientes nos solos pode tornar-se uma realidade afetando negativamente o sector agrícola. Uma das soluções para contrariar esta corrente é uso de rizobactérias promotoras do crescimento de plantas (PGPR), como Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida e Flavobacterium johnsoniae. O objetivo deste trabalho laboratorial foi avaliar a excreção enzimática in vitro de ácido e alcalino fosfatases (AcP e AlP) por três diferentes PGPR (P. fluorescens, P. putida e F. johnsoniae) e pela B. rapa subsp. trilocularis line R-o-18 na presença e ausência de P e a diferentes pHs. Para a análise da atividade enzimática dos microrganismos e da planta recorreu-se ao uso da técnica de zimografia. O estudo da atividade enzimática foi realizado ao longo de 21 dias de crescimento da planta, em três solos diferentes, dois com P adicionado, como controlos (+) (John Innes no. 3 e solo arenoso) e um sem adição de P, como controlo (-) (solo de turfa e areia), e em Murashige and Skoog (MS) com P adicionado como controlo (+) e sem P adicionado como controlo (-). Os tempos foram avaliados aos 7, 14 e 21 dias. Os resultados mostraram-se significativamente diferentes aos diferentes pHs, e aos diferentes tempos de crescimento (p < 0.05). Contudo, os três solos com e sem adição de P a pH 6.5 e os meios de MS com e sem P adicionado a pHs 6.5 e 11 apresentam resultados não significativamente diferentes de atividade enzimática. A avaliação feita a B. rapa inoculada com as PGPR crescida nos dois diferentes meios MS, apresentam resultados estatisticamente similares entre si. Em conclusão, pela técnica da zimografia, a análise feita nos primeiros 21 dias de crescimento de B. rapa, a concentrações de P diferentes e com o uso PGPR não afetaram significativamente a secreção enzimática e consequentemente a sua atividade.Phosphorus (P) is a nutrient of high interest and demand for agricultural industries and is a limiting factor in the soils to produce plants such as Brassica rapa. However, the presence of P in the soil does not mean that it is available for absorption by plants. In order to solve this problem, the farmers add more phosphorus to the crops, which if lost from the field can lead to eutrophication problems. One of the reactions involved in the uptake of P by plants is related to the phosphatases excreted by plants and microorganism present in the environment. In the case of the agricultural industry, if there is no evolution in the current procedures used, current and future demands for food will trigger nutrient scarcity in soils, adversely affecting the agricultural sector. One of the solutions to counteract this chain is the use of plant growth promoting rhizobacteria (PGPR), such as Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida and Flavobacterium johnsoniae. The objective of this work was to evaluate the in vitro enzymatic excretion of acid and alkaline phosphatases (AcP and AlP) by three different PGPRs (P. fluorescens, P. putida and F. johnsoniae) and by B. rapa subsp. trilocularis line R-o-18 in the presence and absence of P and at different pHs. For the analysis of the enzymatic activity of microorganisms and plant, zymography technique was used. The study of the enzymatic activity was performed during 21 days of plant growth in three different soils, two with P added, as (+) controls (John Innes no. 3 and sandy soil) and one without P added, as (-) control (peat and sand soil), and Murashige and Skoog (MS) mediums with P added as (+) control and without P added as (-) control. The times were evaluated at 7, 14 and 21 days. The results were significantly different at different pHs, and at different growth times (p <0.05). However, the three soils with and without addition of P at pH 6.5 and the MS medium with and without P added at pHs 6.5 and 11 presented results non-significantly different of enzymatic activity. The evaluation made to B. rapa inoculated with the PGPR grown in the two different MS mediums presents statistically similar results among themselves. In conclusion, the analysis made with zymography technique, in the first 21 days of growth of B. rapa, at different concentrations of P and with the use of PGPR did not significantly affect the enzymatic secretion and consequently its activity

Evaluation of the 1329L as a candidate to delete for production of a viral attenuated vaccine against ASFV

Tese de mestrado em Microbiologia Clínica, apresentada à Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa, 2009Viruses are obligate intracellular parasites and, as a consequence of many years of coevolution with their hosts, have evolved genes/strategies to manipulate and/or evade host cell biology and immune responses. Many of these viral evasion genes code for proteins that are non-essential for virus replication in vitro. They may, however, be considered as valuable ready made tools to extend, explore and manipulate the regulation of the basic cellular processes that they manipulate. African swine fever virus (ASFV) is a devastative acute pathogen of domestic pigs, principally in Africa where due to progressive urbanization and informal pig rearing, endemicity is growing. In its wild life hosts, both vertebrate (warthog and bush pig) and invertebrate (soft tick), however, the virus has evolved many genes to escape the full ferocity of the host immune response and is non-pathogenic. This project has focused on one such strategy, specifically, the ASFV gene I329L, which has been demonstrated to inhibit TLR signaling. Two important future possibilities have been defined by this work: 1) The demonstration that I329L is a non-essential virus gene will permit construction of an I329L deletion-mutant virus and work towards this has commenced with the successful subcloning of the flanking regions of I329L into the necessary transfer vector. The I329L deletion virus will further our understanding of the role of I329L in the pathogenesis of the ASFV infection and may justify the testing of an I329L deletion mutant as a vaccine. 2) The demonstration that I329L functions in mouse macrophages and the subsequent construction of a macrophage restricted I329L transgenic mouse will provide an in vivo system to determine the role of I329L in healthy and infected macrophages.Os Vírus são parasitas intracelulares que como consequência de evoluírem em conjunto com os seus hospedeiros, desenvolveram estratégias/genes de manipulação e/ou evasão das células e resposta imunitária do hospedeiro. Muitos destes genes de evasão codificam proteínas que são não essenciais para a replicação do vírus in vitro. Podem, no entanto ser consideradas ferramentas úteis no estudo e manipulação da regulação dos processos celulares que manipulam. O vírus da Peste Suína Africana (PSA) é um patogénio que causa doença aguda em porcos domésticos, principalmente em África, onde o seu estado endémico é cada vez maior devido principalmente a uma urbanização progressiva e também à criação doméstica de porcos. No entanto, nos seus hospedeiros selvagens tanto vertebrados como invertebrados, o vírus desenvolveu estratégias e genes que lhe permitem evadir fortes respostas imunitárias, sendo não-patogénico. Este projecto foca-se no estudo de um gene do ASFV, o I329L, no qual já foram previamente feitos estudos no nosso laboratório que demonstraram que inibe a via de sinalização TLR. Foram definidas duas abordagens para o estudo deste gene neste projecto: 1) A demonstração de que o I329L é um gene viral não essencial que permite a construção de um vírus de delecção mutante, tendo o trabalho neste sentido começado pela clonagem bem sucedida das regiões que flanqueiam o gene no vector de transferência apropriado. O vírus mutante para o I329L permitirá a melhor compreensão das funções deste gene na patogenicidade da infecção e poderá justificar a construção de uma vacina mutante por delecção. 2) A demonstração de que o I329L mantém a sua função em macrófagos de ratinho e a subsequente construção de um ratinho transgénico com expressão de I329L restrita a macrófagos, proporcionam um sistema in vivo que permitirá avaliar o papel do I329L em macrófagos infectados e não infectados

Animação sociocultural: uma forma de educação permanente e ao longo da vida para um envelhecimento activo

Relatório de estágio de mestrado em Educação (área de especialização em Educação de Adultos e Intervenção Comunitária)O envelhecimento faz parte do ciclo de vida de um indivíduo e é um tema que preocupa a actualidade de Portugal. A população está cada vez mais envelhecida devido ao aumento da esperança média de vida e da diminuição da taxa de natalidade. Esta realidade provoca a reflexão sobre as infra-estruturas; apoios; políticas; que rodeiam a população idosa. Pelas suas características e pela mudança de papéis que ocorre nesta fase da vida, os idosos tornam-se mais vulneráveis, por vezes mais sós, sujeitos a depressões, isolamento e exclusão social. Nesta medida torna-se importante pensar no papel que as instituições podem ter para precaver ou atenuar estas situações, para além de satisfazerem as necessidades básicas da vida diária do idoso. Tendo sido o trabalho de intervenção realizado na Santa Casa da Misericórdia de Oliveira de Azeméis, procurou-se transmitir ao idoso a importância de desenvolver a educação ao longo da vida, e que através desta poderíamos contribuir para o envelhecimento activo e a sua qualidade de vida. Para impulsionar a educação ao longo da vida utilizamos como estratégia a animação sociocultural. Através desta foram desenvolvidas várias actividades-tipo (culturais, sociais, intelectuais-formativas, lúdico-recreativas). As actividades foram realizadas de acordo com um tema mensal e procuraram atingir os objectivos propostos pelas actividades-tipo. Estas actividades foram avaliadas mensalmente pelos idosos. Para além disso, foi feito um trabalho de animação sociocultural em contexto de apoio domiciliário. Com o presente relatório, apoiado na intervenção realizada, pretendemos reflectir criticamente sobre a animação sociocultural como estratégia de desenvolvimento da educação de adultos e intervenção comunitária.Aging is part of the life cycle of an individual and is a theme that concerns the actuality in Portugal. The population is increasingly aging due to increased life expectancy and decreasing birth rate. This reality stimulates the reflection on the infrastructure, support, policies, that surrounding the old population. By its characteristics and changing roles that occurs in this phase of life, the old people become more vulnerable, sometimes more alone, subject to depression, isolation and social exclusion. To that extent it is important to think in the role that institutions can take to prevent or attenuate these situations, in addition to meeting the basic needs of daily life for old people. Having been the work intervention conducted in the Santa Casa da Misericordia de Oliveira de Azeméis, we tried to convey to the old people the importance of developing of lifelong education, and that through this we could contribute to aging actively and with life quality. To impulse lifelong education we use as a strategy the socio-cultural animation. Through lifelong education various activities were developed (cultural, social, intellectual-formative, and playgroup). The activities were carried out according to a monthly theme and sought to achieve the goals set by the activity-type. These activities were monthly evaluated by old people. In addition, socio-cultural animation was done in home care context. With this paper, supported in the intervention performed, we intend to reflect critically on the socio-cultural activities as a strategy for development of the adult education and community intervention

Species of Bursaphelenchus Fuchs, 1937 (Nematoda: Parasitaphelenchidae) associated with maritime pine in Portugal

Summary – Species of Bursaphelenchus associated with maritime pine, Pinus pinaster, from Portugal – within and outside the quarantine restricted demarcated zone of B. xylophilus – are described and characterised both morphologically (LM and SEM) and with the use of molecular biology (ITS-RFLP).A new staining method for spicules is proposed. Species include B. hellenicus, B. hylobianum, B. leoni, B. pinophilus, B. sexdentati, B. tusciae, B. teratospicularis, B. xylophilus and Bursaphelenchus sp. 1. Bursaphelenchus hylobianum was collected from the insect Hylobius sp. The most frequent species in the demarcated zone, besides B. xylophilus, was Bursaphelenchus sp. 1. Morphological characterisation is compared with the original descriptions and discussed. The differentiation between B. pinophilus and B. sexdentati is not clear in the literature and is discussed. Since differentiation of B. xylophilus (mucronate form) from B. mucronatus, and B. pinophilus from B. sexdentati, as well as their juvenile forms, is almost im possible on the basis of morphological features, a molecular approach based on ITS-RFLPs was used. Ribosomal DNA containing the 5.8S gene, the internal transcribed spacer region 1 and 2, and partial regions of 18S and 28S gene were amplified by PCR. Restriction profiles of the amplified products generated species-specific differences, leading to the unambiguous identification of isolates belonging to B. xylophilus, B. mucronatus, B. sexdentati, B. tusciae and B. hylobianum

Desenvolvimento de um catálogo CIPE® para o foco de enfermagem “autoestima”: Uma scoping review

INTRODUÇÃO: autoestima pode ser definida como a opinião que cada pessoa tem de si própria, a visão do seu mérito e capacidades; verbalização das crenças sobre si próprio; confiança em si; verbalização de autoaceitação e de autolimitação, desafiando as imagens negativas sobre si, aceitação do elogio e do encorajamento, bem como da crítica construtiva. Por influenciar a qualidade de vida esta merece uma abordagem estruturada, o que pode ser conseguido através da elaboração de um catálogo CIPE® OBJETIVO: Contribuir para odesenvolvimento de um catálogo CIPE® para o foco de Enfermagem "Autoestima". MÉTODOS: Scoping review, baseada na consulta de literatura cinzenta e na análise de artigos presentes na CINAHL e MEDLINE (2008-2018), relativa aos dados relevantes e intervenções de Enfermagem para o diagnóstico de "Baixa Autoestima". Foram excluídos os artigos indisponíveis em full text e que não se encontrassem em português, inglês ou espanhol. Obtiveram-se um total de 259 artigos, sendo que destes apenas nove foram considerados na análise integral. RESULTADOS: A avaliação do comportamento, dos sentimentos de culpa, vergonha e impotência, e a monitorização da autoestima com recurso a escalas parecem essenciais para o diagnóstico/avaliação do foco “Autoestima”. As intervenções mais efetivas parecem passar por: planear/executar reestruturação cognitiva, planear/executar terapia pela reminiscência, de grupo e/ou aconselhamento; promover o exercício; assistir na modificação do comportamento e providenciar apoio emocional. CONCLUSÕES: A criação de um catálogo CIPE® permite aos enfermeiros a uniformização do diagnóstico, das intervenções e das atividades de avaliação. Salientam-se, contudo, as dificuldades encontradas para converter alguns termos presentes na literatura em linguagem classificada.info:eu-repo/semantics/publishedVersio