Viral determination and molecular characterization of Aujeszky’s disease virus in slaughter plants and wild boar, as part as the epidemiological surveillance official program in Argentina

La enfermedad de Aujeszky afecta principalmente a la producción porcina y ocasiona pérdidas económicas importantes. En la Argentina, esta enfermedad es considerada endémica, lo que puede resultar en restricciones de comercialización para la región. Las exigencias del mercado externo obligan a avanzar con los planes de control y erradicación de la enfermedad de Aujezsky. Esta enfermedad limita las posibilidades económicas del sector porcino y la comercialización internacional, lo cual influye negativamente en la rentabilidad de las explotaciones y en la calidad de los productos de origen animal. Las técnicas serológicas utilizadas solo detectan la presencia de anticuerpos específicos y no permiten detectar directamente la presencia del patógeno en el organismo ni una infección latente. La utilización de la biología molecular para la confirmación y diagnóstico de la enfermedad de Aujeszky en los planes de vigilancia puede convertirse en una herramienta eficaz para la detección temprana de animales infectados con el virus, así como también para la identificación de las variantes genotípicas que circulan en el país. Este conocimiento aportaría información para establecer políticas sanitarias enfocadas en el control de la enfermedad de Aujeszky, tendientes a la erradicación del virus Herpesvirus porcino tipo 1 (SuHV-1) circulante en la Argentina.Aujezky´s disease principally affects the porcine production, and it generate important economical lost. Currently, In Argentina, Aujeszky is consider an endemic disease and could result in regional commercial restrictions. International requirements for commercialization oblates to develop plans for control and eradication of Aujezsky´s disease. Serological techniques currently used do not allow to identify if the animal is free of pathogen or if it could be a healthy carrier. In surveillance programs, the implementation of Molecular techniques to confirm the diagnostic of this disease is a necessary tool for obtaining early and rapid results. Furthermore, it is also necessary to achieve the molecular characterization of the circulating strains in Argentina in order to establish sanitary politics for eradication of Aujeszky´s disease. This information could allow establishing sanitary politics based on the control of Aujeszky’s diseases and eradication of the circulating Suid Herpesvirus type 1 (SuHV-1).Facultad de Ciencias Veterinaria

Viral determination and molecular characterization of Aujeszky’s disease virus in slaughter plants and wild boar, as part as the epidemiological surveillance official program in Argentina

La enfermedad de Aujeszky afecta principalmente a la producción porcina y ocasiona pérdidas económicas importantes. En la Argentina, esta enfermedad es considerada endémica, lo que puede resultar en restricciones de comercialización para la región. Las exigencias del mercado externo obligan a avanzar con los planes de control y erradicación de la enfermedad de Aujezsky. Esta enfermedad limita las posibilidades económicas del sector porcino y la comercialización internacional, lo cual influye negativamente en la rentabilidad de las explotaciones y en la calidad de los productos de origen animal. Las técnicas serológicas utilizadas solo detectan la presencia de anticuerpos específicos y no permiten detectar directamente la presencia del patógeno en el organismo ni una infección latente. La utilización de la biología molecular para la confirmación y diagnóstico de la enfermedad de Aujeszky en los planes de vigilancia puede convertirse en una herramienta eficaz para la detección temprana de animales infectados con el virus, así como también para la identificación de las variantes genotípicas que circulan en el país. Este conocimiento aportaría información para establecer políticas sanitarias enfocadas en el control de la enfermedad de Aujeszky, tendientes a la erradicación del virus Herpesvirus porcino tipo 1 (SuHV-1) circulante en la Argentina.Aujezky´s disease principally affects the porcine production, and it generate important economical lost. Currently, In Argentina, Aujeszky is consider an endemic disease and could result in regional commercial restrictions. International requirements for commercialization oblates to develop plans for control and eradication of Aujezsky´s disease. Serological techniques currently used do not allow to identify if the animal is free of pathogen or if it could be a healthy carrier. In surveillance programs, the implementation of Molecular techniques to confirm the diagnostic of this disease is a necessary tool for obtaining early and rapid results. Furthermore, it is also necessary to achieve the molecular characterization of the circulating strains in Argentina in order to establish sanitary politics for eradication of Aujeszky´s disease. This information could allow establishing sanitary politics based on the control of Aujeszky’s diseases and eradication of the circulating Suid Herpesvirus type 1 (SuHV-1).Facultad de Ciencias Veterinaria

Viral determination and molecular characterization of Aujeszky’s disease virus in slaughter plants and wild boar, as part as the epidemiological surveillance official program in Argentina

La enfermedad de Aujeszky afecta principalmente a la producción porcina y ocasiona pérdidas económicas importantes. En la Argentina, esta enfermedad es considerada endémica, lo que puede resultar en restricciones de comercialización para la región. Las exigencias del mercado externo obligan a avanzar con los planes de control y erradicación de la enfermedad de Aujezsky. Esta enfermedad limita las posibilidades económicas del sector porcino y la comercialización internacional, lo cual influye negativamente en la rentabilidad de las explotaciones y en la calidad de los productos de origen animal. Las técnicas serológicas utilizadas solo detectan la presencia de anticuerpos específicos y no permiten detectar directamente la presencia del patógeno en el organismo ni una infección latente. La utilización de la biología molecular para la confirmación y diagnóstico de la enfermedad de Aujeszky en los planes de vigilancia puede convertirse en una herramienta eficaz para la detección temprana de animales infectados con el virus, así como también para la identificación de las variantes genotípicas que circulan en el país. Este conocimiento aportaría información para establecer políticas sanitarias enfocadas en el control de la enfermedad de Aujeszky, tendientes a la erradicación del virus Herpesvirus porcino tipo 1 (SuHV-1) circulante en la Argentina.Aujezky´s disease principally affects the porcine production, and it generate important economical lost. Currently, In Argentina, Aujeszky is consider an endemic disease and could result in regional commercial restrictions. International requirements for commercialization oblates to develop plans for control and eradication of Aujezsky´s disease. Serological techniques currently used do not allow to identify if the animal is free of pathogen or if it could be a healthy carrier. In surveillance programs, the implementation of Molecular techniques to confirm the diagnostic of this disease is a necessary tool for obtaining early and rapid results. Furthermore, it is also necessary to achieve the molecular characterization of the circulating strains in Argentina in order to establish sanitary politics for eradication of Aujeszky´s disease. This information could allow establishing sanitary politics based on the control of Aujeszky’s diseases and eradication of the circulating Suid Herpesvirus type 1 (SuHV-1).Facultad de Ciencias Veterinaria

Role of sulfated polysaccharides and herpes simplex virus type 1 variants in viral pathogenicity

El virus Herpes simplex (HSV) es responsable de una variedad de manifestaciones clínicas desde ulceras oro-faciales y genitales hasta encefalitis y alteraciones respiratorias. Los síntomas son usualmente autolimitantes pero pueden ser extensivos y prolongados en individuos inmunocomprometidos. En estos casos, puede requerirse una larga terapia antiviral, lo que resulta en la generación de virus resistentes a las drogas como el aciclovir (ACV). El HSV ingresa a las células mediante una interacción primaria entre las glicoproteínas virales y el heparán sulfato (HS), molécula presente en la superficie celular y en la matriz celular. Los carragenanos (CGNs) son polisacáridos sulfatados derivados de algas rojas cuya estructura es similar a la del HS. Ellos actúan como inhibidores potentes y selectivos de HSV, al bloquear la interacción de virus con su receptor primario en la etapa de adsorción viral. En estudios previos realizados en nuestro laboratorio se seleccionaron y caracterizaron variantes virales de HSV-1 cepa F. Éstas fueron obtenidas bajo presión de selección con un CGN natural μ/n denominado 1C3 de estructura relacionada con los CGNs kappa (k) e iota (ɩ)-(1C3syn14-1 y 1C3syn17-2). A fin de evaluar la reproducibilidad del método utilizado para generar las variantes virales se realizaron pasajes seriados de HSV-1 cepa KOS en células Vero en presencia de concentraciones crecientes de CGN ɩ o heparina (H). Se seleccionaron 4 clones, ɩ16-6, ɩ16-11, H17-5 y H17-16, los cuales exhibieron características similares en: resistencia relativa al compuesto usado durante el tratamiento selectivo y al ACV, al igual que su curva de replicación viral. Además, fueron menos virulentos que la cepa patrón en ratones BALB/c por inoculación intravaginal pero no por vía intranasal, a excepción de la variante ɩ16-11 que fue atenuada por ambas vías. Por otro lado, se profundizó el estudio de la caracterización citopática y patogénica de las variantes virales, derivadas de HSV-1 F, en mucosa respiratoria. Se demostró la activa participación de los macrófagos como protagonistas en la patología viral y se la correlacionó con la menor activación de citoquinas inflamatorias (TNF-α, IL-6) en relación con la cepa control. Alteraciones puntuales detectadas en el gen de la glicoproteína D de las variantes virales podrían ser parte responsable de la liberación disminuida de citoquinas proinflamatorias. Mientras que las moléculas de adhesión VCAM e ICAM no se vieron afectadas. Por otro lado se mostró, que el procedimiento empleado usando CGNs permitió la selección y/o modificación de los genes de la Timidina Quinasa y la ADN polimerasa sin alterar la resistencia viral al ACV. El conjunto de estos resultados indican que la regulación de los niveles de las citoquinas TNF-α e IL-6 juega un rol importante en la patología respiratoria de HSV y además que el método utilizado de obtención de las variantes permite la selección de virus con características estables. Estos resultados contribuyen a la caracterización de las variantes virales con el objetivo de profundizar los conocimientos de la respuesta inflamatoria en el tracto respiratorio luego de una infección por HSV. Palabras Claves: virus Herpes simplex, Carragenanos, variantes virales, atenuación, inmunopatología.Herpes simplex virus (HSV) is responsible for a variety of clinic manifestations, from oro-facial and genital ulcers to encephalitis and respiratory disorders. Symptoms are usually self-limiting but they can be extensive and prolonged in immunocompromised patients. In these cases, it might be required a long antiviral therapy, resulting in the generation of drugresistant viruses such as Acyclovir-resistant viruses. HSV enters the cell by a primary interaction between viral glycoproteins and the heparan sulfate (HS), molecule present in the cell surface and cellular matrix. Carrageenans (CGN) are sulfated polysaccharides derived from red algae with a chemical structure similar to HS. CGN were identified as potent and selective inhibitors of HSV by blocking the interaction between the virus and HS during the adsorption. In previous studies carried out in our laboratory, viral variants from HSV-1 strain F were selected and characterized. They were obtained under selective pressure of the μ/n -1C3 natural CGN with a chemical structure related to the kappa (k) and iota (ɩ) CGNs (1C3syn14-1 and 1C3syn17-2). In order to evaluate the reproducibility of the method used to generate viral variants, serial passages were done with HSV-1 strain KOS in Vero cells in the presence of increasing concentrations of the ɩ CGN or heparine (H). Four clones were selected: ɩ16-6, ɩ16-11, H17-5 and H17-16, which exhibited similar characteristics such as relative resistance to the compound used for the selective treatment and ACV, as well as theirs viral replication curve. Furthermore, they were less virulent than the parental strain in BALB/c by intravaginal inoculation but not intranasally, except for the variant ɩ16-11 which was attenuated by both routes. On the other hand, the cytopathic and pathogenic effect of the viral variants, derived from HSV-1 F virus, were characterized in the respiratory mucosa. It was demonstrated that the active involvement of macrophages as key players in the viral pathology correlated with the lower release of the inflammatory cytokines (TNF-a and IL-6) in relation with the parental strain. Punctual mutations detected in the gene of glycoprotein D of the viral variants could be partially responsible for the low concentration of the inflammatory cytokines. Moreover, the expression of adhesion molecules VCAM and ICAM was not altered. It was also shown that the use of the CGN allowed the selection and/or modification of the Timidine Kinase and DNA polimerase genes without modifying resistance to ACV. All these results indicate that the regulation of TNF-a and IL-6 play a key role in the respiratory pathology of HSV and that the method used to obtain the viral variants allows the selection of virus with stable and attenuated characteristics. Results obtained in the present study contribute to characterize viral variants in order to extend the knowledge about the cellular inflammatory response induced in the respiratory tract by HSV-1. Keywords: virus Herpes simplex virus, Carrageenans, viral variants, attenuation, inmunopathologyFil:Artuso, María Carolina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Viruses: As mediators in “Élan vital” of the “creative” evolution

The understanding of the processes occurring in Nature has been a continuing concern throughout the history of mankind. Intellectual tools employed towards this goal were specific for each period and have been largely based on the prevailing paradigms that reigned in the past. In this work we present evidence that supports the idea of viruses as key agents mediating natural processes linked to the evolution of organisms, particularly those involved in the flux of genes in the environment. This point of view tinges our perception of Nature and prompts us to include “viral” creativity and plasticity among the tools we employ to analyze those processes far beyond actual paradigms. Experimental data to support this proposal arose during the study of the interaction of the human pathogen, herpes simplex virus (HSV) with sulfated polysaccharides during multiplication of the virus in vitro. Sulfated polysaccharides are the main chemical structures found in carrageenans (CGNs) that are natural products obtained from seaweeds, which proved to be strong inhibitors for the virus. Here we describe the interaction between virus and CGNs as a suitable scenario for the emergence of viral variants which proved to be markedly attenuated for mice. A striking feature of these variants is that they showed changes at the level of conserved regions of the genome such as the DNA polymerase and thymidine kinase genes. In view of these findings, the importance of HSV evolution towards attenuated variants by the action of polysaccharides is also discussed. Attenuation may be considered part of a natural evolutionary process enabling the virus to contribute with valuable information for the host.Fil: Artuso, María Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Roldan, Julieta Suyay. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Scolaro, Luis Alberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Carlucci, Maria Josefina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; Argentin

Inhibition of Junín virus replication by small interfering RNAs

Junín virus (JUNV), the etiological agent of the Argentine hemorrhagic fever, has a single-stranded RNA genome with ambisense expression which encodes for five proteins. In previous works we have demonstrated that the Z arenavirus matrix protein represents an attractive target for antiviral therapy. With the aim of studying a new alternative therapeutic mechanism, four Z-specific siRNAs (Z1- to Z4-siRNAs) were tested showing variable efficacy. The most effective inhibitor was Z2-siRNA targeted at the region encompassed by nt 179-197 of Z gene. The efficacy of this Z2-siRNA against JUNV was also demonstrated in virus-infected cells, by testing infectious virus plaque formation (92.8% JUNV yield reduction), viral RNA level or antigen expression, as well as in cells transfected with Z-specific reporter plasmids (91% reduction in expression of Z-EGFP fusion protein). Furthermore, the lack of effect of this Z-siRNA on the expression of other JUNV proteins, such as N and GPC, confirmed the specificity of action exerted by Z2-siRNA on Z transcript. Thus, the present study represents the first report of virus inhibition mediated by RNA interference for a New World arenavirus. © 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.Fil: Artuso, María Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Ellenberg, Paula Clarisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Scolaro, Luis Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Damonte, Elsa Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Garcia, Cybele. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; Argentin

Characterization of Junín virus particles inactivated by a zinc finger-reactive compound

Our previous studies reported the inhibitory action against arenaviruses of antiretroviral zinc finger-reactive compounds provided by the National Cancer Institute (USA). These compounds were able to inactivate virions as well as to reduce virus yields from infected cells. Here, the inactivation of the arenavirus Junín (JUNV), agent of Argentine hemorrhagic fever, by the aromatic disulfide NSC20625 was analyzed. The treatment of purified JUNV with this compound eliminated infectivity apparently through irreversible modifications in the matrix Z protein detected by: (a) alterations in the electrophoretic migration profile of Z under non-reducing conditions; (b) an electrodense labeling in the internal layer beneath the envelope and around the matrix Z protein, in negatively stained preparations; (c) changes in the subcellular localization of Z in cells transfected with a recombinant fusion protein JUNVZ-eGFP. The infection of Vero cells with JUNV inactivated particles was blocked at the uncoating of viral nucleocapsid from endosomes, providing new evidence for a functional role of Z in this stage of arenavirus cycle. Furthermore, the inactivated JUNV particles retained the immunoreactivity of the surface glycoprotein GP1 suggesting that this disulfide may be useful in the pursuit of an inactivating agent to obtain a vaccine antigen or diagnostic tool. © 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.Fil: Garcia, Cybele. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Ellenberg, Paula Clarisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Artuso, María Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Scolaro, Luis Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Damonte, Elsa Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Eco-environmental Factors Related to Potential Reservoirs of Leptospira spp. in the Costanera Sur Ecological Reserve, Buenos Aires, Argentina

Las modificaciones ambientales generan entornos de interfaz en los que la transmisión de Leptospira spp. puede verse afectada. Con el objetivo de identificar y analizar variables ecoambientales asociadas a potenciales reservorios de Leptospira spp. en la Reserva Ecológica Costanera Sur (RECS) (Buenos Aires, Argentina) y áreas urbanizadas contiguas, se realizó un muestreo por conveniencia en líneas transectas, estratificado y proporcionado. Fueron capturados 170 mamíferos de 11 especies y se analizó Leptospira spp. por serología, cultivo y PCR. En áreas conservadas se registraron mayormente Didelphis albiventris y Deltamys kempi, mientras que Oligoryzomys flavescens también fue hallado en áreas degradadas y Rattus norvegicus solo en áreas degradadas. No se detectó Leptospira spp. en los mamíferos silvestres. Un perro sin tenedor responsable resultó positivo por serología. Las condiciones ambientales de la RECS sugieren un ecosistema poco propicio para Rattus, evidenciando la importancia de la conservación de áreas naturales en entornos urbanos.Environmental modifications generate interface environments in which Leptospira spp. transmission may be affected. In order to identify and analyze eco-environmental variables associated with potential reservoirs of Leptospira spp. in the Reserva Ecológica Costanera Sur (RECS) (Buenos Aires, Argentina) and adjacent urbanized areas, a stratified and proportionate transect line convenience sampling was carried out. A total of 170 mammals of 11 species were captured and analyzed for the presence of Leptospira spp. by serology, culture and PCR. In conserved areas, Didelphis albiventris and Deltamys kempi were mostly recorded, while Oligoryzomys flavescens was also found in degraded areas, and Rattus norvegicus was only found in degraded areas. Leptospira spp. were not detected in wild mammals. One dog without a responsible keeper tested positive by serology. The environmental conditions of the RECS suggest a poor ecosystem for Rattus, demonstrating the importance of the conservation of natural areas in urban environments.Fil: Berra, Yanina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Vet. en Salud Publica; ArgentinaFil: Aracena, Gaston. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; ArgentinaFil: Artuso, María Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; ArgentinaFil: Petrakowski, Jessica. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; ArgentinaFil: Orozco, Maria Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires; ArgentinaFil: Degregorio, Osvaldo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Vet. en Salud Publica; Argentin

In vitro isolation of variants of herpes simplex virus attenuated with altered thymidine kinase and DNA polymerase genes using carrageenans as selection agents

Natural polysaccharides known as carrageenans are potent and selective inhibitors of herpes simplex virus through blocking the interaction of the virus with the cellular receptor. Passaging the virus in vitro in the presence of carrageenans types k and ι enabled us to generate variants of herpes simplex type 2. At passage 22, four clones were selected for further characterization: ι22-9, ι22-12, k22-12 and k22-13. Variants showed a syncytial phenotype, grew at similar titers when compared to parental virus and exhibited moderate resistance to carrageenans. These were found to have a mutation in the thymidine kinase gene in the case of k22-13 (aa 149 Val to Ala) and in the DNA pol gene in the case of ι22-12 (aa 789 Met to Thr). In variant k22-12, three substitutions in the DNA pol gene were identified. Variants were less virulent than parental strain when tested intravaginally or intranasally in mice. Attenuation correlated with higher levels of IL-6 and TNF-α in animals inoculated with the variants. Selective pressure on the external glycoproteins of the virus may generate viruses with alterations in genes unrelated to the target of action of the selection agent. Study of this type of variation might help us to understand the basis of persistent viral strategies, which in turn may play a role in the development of virus-host symbioses.Fil: Mateu, Cecilia Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Artuso, María Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Pujol, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Linero, Florencia Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Scolaro, Luis Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; ArgentinaFil: Carlucci, Maria Josefina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Virología; Argentin

Estudio molecular para la detección de Leptospira spp. en mamíferos silvestres y domésticos en la reserva ecológica Costanera Sur, CABA

Under "One Health" concept, the health problem is approached from a holistic view linking human, animal and environmental health. Multiple pathogens circulating among animal and human populations, which can be a threatto both human and animal health. Leptospira spp. has been reported to cause infection in almost all species of mammals. In this work the human-animal-environment interface was analyzed by studying Leptospira spp. infection model in wild and domestic species in the Costanera Sur Ecological Reserve. Data were obtained through a transects, stratified stages and proportionate sampling. Urine and renal tissue were taken as appropriate and PCR diagnostic was performed. The present work has the objective to study the occurrence of leptospirosis by molecular techniques(PCR), in populations of domestic and wild animals of the RECS. At the same time, contribute to the knowledge of the impact of the contact of these populations and their potential role as reservoirs and transmitters of Leptospira spp. Which inhabit protected natural areas, modified by increasing urbanization processes, such as the RECS.A total of 140 animals belonging to 10 different species were caught:6 species of rodents, 3 species of marsupials, 1 cingulate and a total of 30canines. All analyzed samples were negative. The eco-environmental conditions of the study area posed an enabling environment for development of Leptospira spp. But we could presume that the dispersion of the populations of host (and therefore their potential reservoirs)condition the environmental burden of bacteria in different habitats, may establish a detection limit below the level of sampling and diagnostic techniques used in this research. This study is considered an approach of the knowledge of the eco epidemiology and infection risk of diseases in the human- animal - environment interface in CABA, considering Leptospira spp. as zoonotic infectious disease model, in which proposals to deepen these studies are performed.Fil: Berra, Yanina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Área de Veterinaria en Salud Pública; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Arocena, Gastón Maximiliano. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Artuso, María Carolina. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ercolini, Carina. Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Instituto de Zoonosis Luis Pasteur; ArgentinaFil: Bruno, Antonela. Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Instituto de Zoonosis Luis Pasteur; ArgentinaFil: Orozco, Maria Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires; ArgentinaFil: Degregorio, Osvaldo Jorge. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Área de Veterinaria en Salud Pública; Argentin