Efficiently folding and circularly permuted variants of the Sapphire mutant of GFP

BACKGROUND: The green fluorescent protein (GFP) has been widely used in cell biology as a marker of gene expression, label of cellular structures, fusion tag or as a crucial constituent of genetically encoded biosensors. Mutagenesis of the wildtype gene has yielded a number of improved variants such as EGFP or colour variants suitable for fluorescence resonance energy transfer (FRET). However, folding of some of these mutants is still a problem when targeted to certain organelles or fused to other proteins. RESULTS: By directed rational mutagenesis, we have produced a new variant of the Sapphire mutant of GFP with improved folding properties that turns out to be especially beneficial when expressed within organelles or as a fusion tag. Its absorption spectrum is pH-stable and the pKa of its emission is 4.9, making it very resistant to pH perturbation inside cells. CONCLUSION: "T-Sapphire" and its circular permutations can be used as labels of proteins or cellular structures and as FRET donors in combination with red-fluorescent acceptor proteins such as DsRed, making it possible to completely separate donor and acceptor excitation and emission in intensity-based FRET experiments

A Sustained Increase in Intracellular Ca2+ Is Required for the Acrosome Reaction in Sea Urchin Sperm

AbstractThe acrosome reaction (AR), necessary for fertilization in many species, requires an increase in intracellular Ca2+ ([Ca2+]i). In sea urchin sperm, the AR is triggered by an egg-jelly factor: the associated [Ca2+]i elevation lasts minutes and involves two Ca2+ permeable channels. Both the opening of the second channel and the onset of the AR occur ∼5 s after treatment with egg factor, suggesting that these events are linked. In agreement, removal of Ca2+ from sea water or addition of Ca2+ channel blockers at the time when opening of the second channel is first detected inhibits AR and causes a “rapid” (t1/2 = 3–15 s) decrease in [Ca2+]i and partial inhibition of the intracellular pH change associated with the AR. Simultaneous addition of NH4Cl and either EGTA, Co2+, or Ni2+ 5 s after egg factor prevents the partial inhibition of the evoked pHi change observed but does not reverse AR inhibition. Therefore, the sustained increase in [Ca2+]i caused by the second Ca2+ channel is needed for the sperm AR. Experiments with agents that induce capacitative Ca2+ uptake (thapsigargin and cyclopiazonic acid) suggest that the second channel opened during the AR could be a store-operated Ca2+ channel

Perfil del estudiante de idiomas extranjeros de la universidad del atlántico. Estudio comparativo CHAEA e ISALEM.

El estudio de los estilos de aprendizaje se ha convertido en las últimas décadas en un referente para los docentes y administrativos de entidades educativas. En este sentido es significativo mostrar un trabajo sobre el perfil del estudiante de la licenciatura en Idiomas Extranjeros de la Universidad del Atlántico. El objetivo que guía este estudio es mostrar un estudio comparativo de los estilos de aprendizaje de esos futuros licenciados. Para cumplir con el propósito de dicha comparación se utilizaron los cuestionarios de CHAEA propuesto por Alonso, Gallego y Honey, y el de la Universidad de Liège ISALEM. De una población de 520 estudiantes, se tomó, en tres momentos, una muestra de 236. Los datos se tabularon, analizaron e interpretaron para obtener un perfil en torno a los estilos de aprendizaje de esos aprendientes. Los resultados muestran un estudiante intuitivo pragmático y metódico reflexivo según ISALEM y uno activo según CHAEA. Es decir es un estudiante a quien le gusta involucrarse en proyectos y le encantan los desafíos, aprecia las situaciones que necesitan abundancia de ideas; tiene intereses culturales muy amplios y le gusta reunir información de manera ecléctica. Estos resultados pueden tener implicaciones para nuestra práctica pedagógica

Las TIC y los estilos de aprendizaje en la clase de francés como lengua extranjera

Este artículo presenta los resultados de una investigación sobre el aprovechamiento de las tecnologías de la información y la comunicación (TIC), en particular la internet, como herramienta pedagógica potenciadora de los estilos de aprendizaje en la clase de francés como lengua extranjera. Se indagó sobre los recursos que ofrecen las TIC y se elaboró una propuesta de utilización de los recursos de internet en la clase de francés. El análisis de páginas web creadas por equipos de estudiantes mostró la influencia de su estilo de aprendizaje en el producto TIC. También confirmó la contribución de las TIC al desarrollo de sus habilidades comunicativas y cognitivas, bajo la óptica del aprendizaje cooperativo y la pedagogía por proyectos