Third Brazilian consensus for autoantibodies screening in HEp-2 cells (ANA) : recommendations for standardization of autoantibodies screening trial in HEp-2 cells, quality control and clinical associations

Objetivo: O 3º Consenso Brasileiro para pesquisa de autoanticorpos em Células HEp-2 (FAN) teve como propósito avaliar as dificuldades de implantação do 2º Consenso ocorrido no ano de 2002, discutir estratégias para controlar a qualidade do ensaio e promover a atualização das associações clínicas dos diversos padrões. Métodos: Participaram do encontro em Goiânia nos dias 13 e 14 de abril de 2008 pesquisadores e especialistas de diversos centros universitários e laboratórios clínicos de diferentes regiões do Brasil, com o propósito de discutir e aprovar as recomendações que visam à melhor padronização, interpretação e utilização do ensaio pelos clínicos. Representantes comerciais de diferentes empresas produtoras de insumos para realização do teste de FAN foram convidados como ouvintes. Resultados e Conclusões: O 3º Consenso enfatizou a necessidade do controle de qualidade em imunofluorescência dada a heterogeneidade de microscópios e reagentes disponíveis no mercado, promoveu adequações na terminologia utilizada para classificar os diferentes padrões e, finalmente, atualizou as associações clínicas com finalidade de facilitar cada vez mais o melhor uso do ensaio pelos clínicos. ________________________________________________________________________________ ABSTRACTObjective: The Third Brazilian Consensus for autoantibodies Screening in HEp-2 cells had as purpose the evaluation of difficulties in the accomplishment of the 2nd Consensus recommendations that took place in the year of 2002, the discussion of strategies for quality control of the assay and the promotion of an update of the clinical associations of the several immunofluorescent patterns. Methods: Several ANA experts from university centers and private laboratories in different areas in Brazil joined the workshop in Goiânia on 2008 April 13 and 14 with the purpose of discussing and approving the recommendations for standardization, interpretation and use of the test by physicians. Commercial representatives of different ANA slide brands were also invited as listeners to the workshop. Results and Conclusions: The 3rd Consensus emphasized the need for quality control in indirect immunofluorescent since there is a considerable heterogeneity of available microscopes and reagents. It also promoted adaptations in the previously approved terminology used to classify the different patterns and finally updated the clinical associations of the several patterns with the purpose of providing guidance for interpretation of the assay by clinical pathologists and assistant physicians

Definições para a padronização da pesquisa de auto-anticorpos contra constituintes do núcleo (FAN HEp-2), nucléolo, citoplasma e aparelho mitótico e suas associações clínicas

OBJECTIVE: The Second Brazilian Consensus on Antinuclear Antibodies (ANA) in HEp-2 Cells approved and extended the decision trees developed during the First Brazilian Consensus in order to also offer information about mixed patterns of fluorescence. METHODS: Since this test elicits reactions not only to nuclear autoimmune antigens but also to different cell compartments, new denominations for the test were approved. Results and CONCLUSIONS: These new denominations encompass variations on the autoantibody testing against the nucleus (ANA HEp-2), nucleolus, cytoplasm, and mitotic apparatus issue. Furthermore, major clinical associations were described for each immunofluorescent pattern, facilitating the interpretation of laboratory results in the clinical practice.OBJETIVO: O Segundo Consenso Brasileiro de Fator Antinuclear (FAN) em Células HEp-2 ratificou os algoritmos de decisão para leitura dos padrões do FAN na imunofluorescência indireta vistos na primeira edição do Consenso Brasileiro, adicionando ainda um novo algoritmo relacionado com os padrões mistos. MÉTODOS: Tendo em vista a habilidade do teste em detectar autoantígenos nos distintos compartimentos celulares, e não apenas no núcleo, propõe-se novas denominações para este exame laboratorial. RESULTADOS E CONCLUSÕES: Como novas denominações algumas sugestões foram igualmente aceitas, dentro do tema pesquisa de auto-anticorpos contra constituintes do núcleo (FAN HEp-2), nucléolo, citoplasma e aparelho mitótico. Foram abordadas as principais relevâncias clínicas com os padrões de FAN descritos, facilitando o melhor uso do ensaio pelo médico.FMUSPUNIFESPBio-Rad Laboratório BrasilHospital Geral de GoiâniaBiomédicaUniversidade Federal de UberlândiaUFMG HCPUCRS HCNew Life Produtos HospitalaresUniversidade Católica de GoiásFMUSP HC Laboratório CentralPatologista ClínicaFMUSP HCFrischmann Aisengart Unidad InmunologíaUniversidade Católica de Goiás Laboratório de Auto-ImunidadeExame Medicina LaboratorialFMUFG HC Laboratório de Imuno-Reumatologia e HLALab. Santa LuziaMedivax/BionHSPE/SPUniversidade Católica de Goiás Laboratório da Área de SaúdeFarmacêutica-BioquímicaUniv. Fed. Mato GrossoFMUFG Serviço de ReumatologiaHospital Durand Unidad InmunologíaLaboratório ClínicoUFRGS HCPA Serviço de ReumatologiaUERJ FCMUFMG FMHospital Universitário de Brasília Laboratório de ReumatologiaUNIFESPSciEL

IV Brazilian Guidelines for autoantibodies on HEp-2 cells

Objective: the Fourth Brazilian Consensus for Autoantibodies Screening in HEp-2 Cells (ANA) was held in Vitoria, Espirito Santo, and aimed to discuss strategies and recommendations about the technique, standardization, interpretation and quality control of the indirect immunofluorescence reaction on HEp-2 cells.Methods: Twenty three ANA experts from university centers and private laboratories in different areas from Brazil discussed and agreed upon recommendations for the fourth edition of the Brazilian Consensus for Autoantibodies Screening in HEp-2 Cells.Results and conclusion: the 4th ANA Consensus included three novel patterns into the existing algorithm (cytoplasmic Rods and Rings, nuclear Quasi-homogeneous, and CENP-F). Emphasis was given to the need of attention in describing the peculiar mixed pattern elicited by anti-DNA topoisomerase I (Scl-70) autoantibodies, comprising nuclear fine specked, nucleolar homogeneous pattern, NOR staining in metaphase plates, and cytoplasmic fine speckled patterns. the group also emphasized the need for continuous quality control in indirect immunofluorescence assays, the establishment of screening dilutions, as well as conjugate titration. An alert was made regarding the heterogeneity of commercial kits in defining patterns and the use of solid phase methodologies to determine the presence of autoantibodies. (C) 2014 Elsevier Editora Ltda. All rights reserved.Objetivo: O IV Consenso Brasileiro para Pesquisa de Autoanticorpos em Células HEp-2 (FAN) realizado em Vitória (ES), no dia 18 de setembro de 2012, objetivou discutir estratégias e recomendações relacionadas ao procedimento técnico, à padronização e à interpretação dos resultados da pesquisa de autoanticorpos em células HEp-2. Métodos: Participaram do evento 23 pesquisadores e especialistas de Universidades e laboratórios brasileiros. Foram abordados diferentes tópicos, discutidos amplamente a fim de se estabelecer recomendações específicas. Resultados e conclusão: O IV Consenso integrou à árvore de decisão o padrão citoplasmático em Anéis e Bastões, o padrão nuclear pontilhado Quasi-homogêneo (QH) e o padrão misto CENP-F. Discutiu-se ainda a necessidade de atenção para a classificação do padrão misto relacionado à presença de anticorpos anti-DNA topoisomerase I (Scl-70), compreendendo os componentes nuclear pontilhado fino, nucleolar homogêneo, NOR na placa metafásica e citoplasmático pontilhado fino. Foram sugeridas diretrizes para o controle de qualidade do teste, diluição de triagem e diluição de esgotamento, e foi emitido alerta quanto à necessidade de atenção em relação à heterogeneidade de substratos disponíveis no mercado e a utilização de metodologias automatizadas para detecção de autoanticorpos.Albert Einstein Medicina DiagnosticaAlka TecnologiaAmaral Costa LaboratorioConselho Federal de BiomedicinaDASAEuroimmun BrasilGrupo FleuryHemagenMedivaxOlimpusPadrao Laboratorio ClinicPontificia Universidade Catolica de Goias - PUC-GoiasSociedade Brasileira de Patologia Clinica e Medicina LaboratorialSociedade Brasileira de ReumatologiaThermo ScientificWama DiagnosticaWerfen Group - Werfen MedicalHermes PardiniConselho Regional de Biomedicina - 3a RegiaoPUC Goias, Goiania, Go, BrazilFleury Med & Saude, São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo UNIFESP, Discipline Rheumatol, São Paulo, BrazilUniv Fed Uberlandia, Hosp Clin, Serv Rheumatol, BR-38400 Uberlandia, MG, BrazilClin Doencas Reumat Porto Alegre, Ctr Diagnost Med & Rheuma, Porto Alegre, RS, BrazilAmaral Costa Med Diagnost, Belem, PA, BrazilUniv São Paulo, Fac Med, Hosp Clin, Lab Invest Med, São Paulo, BrazilUniv São Paulo, Fac Med, Hosp Clin, Lab Cent, São Paulo, BrazilHosp Israelita Albert Einstein, Dept Clin Pathol, São Paulo, BrazilInst Hermes Pardini, Belo Horizonte, MG, BrazilUniv São Paulo, Fac Med, São Paulo, BrazilUniv Fed Minas Gerais, Fac Med, Belo Horizonte, MG, BrazilUniv Catolica Brasilia, Brasilia, DF, BrazilUniv Fed Goias, Fac Med, Goiania, Go, BrazilUniv Sul Santa Catarina UNISUL, Florianopolis, SC, BrazilUniv Vale do Itajai UNIVALE, Florianopolis, SC, BrazilUniv Fed Espirito Santo, Vitoria, ES, BrazilEBMSP, Salvador, BA, BrazilGrp DASA, São Paulo, BrazilEscola Super Ciencias Saude Dist Fed, Brasilia, DF, BrazilLab Sabin, Brasilia, DF, BrazilUniversidade Federal de São Paulo UNIFESP, Discipline Rheumatol, São Paulo, BrazilWeb of Scienc

Performance evaluation of eight rapid tests to detect HIV infection: A comparative study from Brazil.

Rapid tests (RTs), also known as point-of-care tests, usually release results within 30 minutes with no need for a qualified staff, equipment, or laboratory structure. The Brazilian Ministry of Health published a resolution in 2013, recommending the use of RTs for the diagnosis of HIV infection, where one positive RT must be followed by another different RT. This was meant to increase the chance of proper diagnosis in specific settings and special populations. However, data comparing and validating the different HIV RTs available in Brazil are scarce. Therefore, the present study seeks to evaluate eight anti-HIV RTs available in the Brazilian market regarding their analytical performance: sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, positive and negative likelihood ratios, and accuracy. We also evaluated the agreement between kits (Kappa index) and the quality of the reading pattern of the tests. This was an observational, analytical, and concordance study, in which previously defined positive and negative samples, based on their serological pattern for anti-HIV antibodies (chemiluminescent immunoassay-ECLIA-used as screening and Western Blot used as the confirmatory test) were tested. Analytical performance and Kappa index were calculated, considering a 95% CI and p<0.05. This study identified differences in the performances of the eight tested kits. Six out of eight RTs showed good performance and can be used in the routine laboratory and health care units as screening tests. Regarding the quality of the RT band reading pattern, two brands had several samples showing quite faint bands, thus compromising its use in clinical and laboratory settings

Detecção de anticorpos antinucleares por imunofluorescência indireta em células HEp-2: definindo a diluição de triagem adequada para o diagnóstico das doenças reumáticas autoimunes

Objetivo: Definir o t&#237;tulo anormal e a dilui&#231;&#227;o de triagem adequada para o teste de FAN (fator antin&#250;cleo) por imunofluoresc&#234;ncia indireta em c&#233;lulas HEp-2 (FAN HEp-2). M&#233;todos: Realizamos a pesquisa do FAN HEp-2 em amostras de soro de 126 indiv&#237;duos saud&#225;veis. As amostras foram triadas na dilui&#231;&#227;o de 1:80, e aquelas positivas dilu&#237;das at&#233; o t&#237;tulo de 1:5120. O t&#237;tulo anormal de FAN foi definido como aquele correspondente ao percentil 95 do teste nesta popula&#231;&#227;o. A sensibilidade dos diferentes t&#237;tulos do FAN foi determinada em um grupo de 136 pacientes com diagn&#243;stico de doen&#231;a reum&#225;tica autoimune, e a especificidade em um grupo de 118 pacientes com diagn&#243;stico de outras doen&#231;as reum&#225;ticas. O valor de corte &#243;timo do teste foi determinado pelo estudo da curva ROC. Resultados: A frequ&#234;ncia de FAN positivo em indiv&#237;duos saud&#225;veis foi de 13,2%. N&#227;o houve diferen&#231;a na frequ&#234;ncia de resultados positivos de acordo com o g&#234;nero ou a idade. O t&#237;tulo anormal do FAN foi definido como a dilui&#231;&#227;o de 1:160. A dilui&#231;&#227;o dos soros de 1:80 apresentou sensibilidade de 87,7% e especificidade de 67,8%, enquanto a dilui&#231;&#227;o de 1:160 apresentou sensibilidade de 82% e especificidade de 73,7%. Pela an&#225;lise da curva ROC, a dilui&#231;&#227;o de 1:160 correspondeu ao valor de corte &#243;timo. Conclus&#227;o: O t&#237;tulo anormal e o valor de corte &#243;timo do FAN HEp-2 na popula&#231;&#227;o avaliada foram de 1:160. A dilui&#231;&#227;o de 1:160 &#233;, portanto, a dilui&#231;&#227;o de triagem ideal, com melhor especificidade, por&#233;m sem comprometimento significativo da sensibilidade diagn&#243;stica do teste